頭孢克肟膠囊溶出曲線測定方法的研究

張映雪，張建麗，柳世萍，賈全，徐巍巍(華北制藥河北華民藥業(yè)有限責(zé)任公司，河北 石家莊 052165)

1 儀器與試劑

1.1 儀器

電子天平，自動(dòng)溶出儀，紫外分光光度計(jì)。

1.2 試劑

頭孢克肟膠囊(日本長生堂制藥株式會社)，鹽酸(試劑級)，氫氧化鈉(試劑級)，磷酸二氫鉀(試劑級)，乙酸鈉(試劑級)，乙酸(試劑級)，磷酸氫二鈉(試劑級)。

2 溶出曲線的測定

2.1 溶出介質(zhì)配制

pH 1.2 鹽酸介質(zhì)：量取鹽酸7.65 mL，用純化水稀釋至1 000 mL，搖勻即得。

pH 4.5 醋酸鹽緩沖液：稱取乙酸鈉2.99 g，加200 mL 純化水溶解，量取2.0 mol/L 乙酸溶液14 mL [量取乙酸120.0 g (114 mL)，用純化水稀釋至1 000 mL]，用純化水稀釋至1 000 mL，搖勻，即得。

pH 6.8 磷酸鹽緩沖液：取0.2 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(稱取磷酸二氫鉀27.22 g，加純化水溶解并稀釋至1 000 mL)250 mL，0.2 mol/L 氫氧化鈉溶液(稱取氫氧化鈉8.00 g，加純化水溶解并稀釋至1 000 mL)112.0 mL，混合后，用純化水稀釋1 000 mL，即得。

pH 7.2 磷酸鹽緩沖液：量取0.2 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(稱取磷酸二氫鉀27.22 g，加純化水溶解并稀釋至1 00 mL)250 mL，0.2 mol/L 氫氧化鈉溶液(稱取氫氧化鈉8.00 g，加純化水溶解并稀釋至1 000 mL)173.5 mL，混合后，用純化水水稀釋1 000 mL，即得。

pH 7.5 磷酸氫二鈉-枸櫞酸緩沖液：取0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液1 000 mL，加0.025 mol/L 枸櫞酸溶液1 000 mL，并調(diào)pH 值至7.5，即得。

水：純化水。

備注：以上六種介質(zhì)使用的純化水均是經(jīng)脫氣的。

2.2 溶出曲線測定

精密稱取頭孢克肟對照品，用溶出介質(zhì)(水、pH 1.2 鹽酸溶液、pH 4.5 乙酸鹽緩沖液、pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、pH 7.2 磷酸鹽緩沖液、pH 7.5 磷酸鹽緩沖液)定量稀釋制成10 μg/mL的頭孢克肟溶液，作為對照品溶液，采用紫外-可見分光光度法，在288 nm 波長檢測樣品吸光度。取參比制劑樣品，分別以六種溶液為溶出介質(zhì)，以兩種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(籃法，100 轉(zhuǎn)；槳法，50 轉(zhuǎn)，加沉降籃)，分別在對應(yīng)的取樣時(shí)間點(diǎn)，取出實(shí)驗(yàn)溶液(5～10 mL)，過濾，并補(bǔ)充相同體積的介質(zhì)溶液，用溶出介質(zhì)定量稀釋制成每10 μg/mL 的頭孢克肟 (按C16H15N5O7S2計(jì))溶液，作為供試品，同樣采用紫外-可見分光光度法，檢測樣品吸光度，以12 粒的平均溶出量、實(shí)驗(yàn)時(shí)間，為縱坐標(biāo)、橫坐標(biāo)，制作溶出曲線圖[1]。

2.3 影響溶出數(shù)據(jù)的因素

除藥物自身因素，實(shí)驗(yàn)儀器，取樣過濾方式，紫外波長等均有可能對藥物的溶出數(shù)據(jù)產(chǎn)生影響。

(1)中間精密度實(shí)驗(yàn)。取頭孢克肟膠囊參比制劑樣品，在不同日期，使用不同儀器，采用籃法100 轉(zhuǎn)進(jìn)行溶出曲線實(shí)驗(yàn)，檢測出溶出度，制作溶出曲線，比較儀器之間的結(jié)果差異。

(2)溶液度穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。使用頭孢克肟膠囊參比制劑樣品，采用籃法100 轉(zhuǎn)進(jìn)行溶出曲線實(shí)驗(yàn)，在5 min 和60 min 取適量溶液，過濾，精密量取濾液適量，用溶出介質(zhì)稀釋制成約10 μg/mL的溶液，用紫外分光光度計(jì)法檢測吸光度，該濾液置于室溫，分別于1、2、3 h 測定溶液的吸光度，計(jì)算變異系數(shù)。

(3)溶出儀濾膜吸附實(shí)驗(yàn)。使用溶出儀過濾頭，模擬溶出儀的取樣方式進(jìn)行濾膜吸附實(shí)驗(yàn)，配制濃度相當(dāng)于主藥溶出度20% 的溶液和相當(dāng)于主藥溶出度100% 的溶液，兩種溶液均分為兩份，一份用濾頭過濾，一份不過濾。使用紫外-可見光光度法在288 nm 波長處測定溶液的吸光度。

(4)耐用性實(shí)驗(yàn)。取頭孢克肟膠囊參比制劑樣品，考察溶出曲線測定方法波長在288±2 nm 的微小變動(dòng)下，測定供試品溶液的吸光度。

3 結(jié)果與討論

3.1 pH 1.2 鹽酸介質(zhì)溶出曲線的測定

以pH 1.2 鹽酸鹽溶液作為介質(zhì)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線。

兩條溶出曲線差異很大，籃法100 轉(zhuǎn)最終溶出量遠(yuǎn)高于槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)。

3.2 pH 4.5 醋酸介質(zhì)溶出曲線的測定

以pH 4.5 醋酸鹽溶液作為介質(zhì)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線[2]。

溶解過程中溶出度籃法100 轉(zhuǎn)始終高于槳法50 轉(zhuǎn)。

3.3 pH 6.8 磷酸介質(zhì)溶出曲線的測定

以pH 6.8 磷酸鹽溶液作為介質(zhì)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線。

溶解過程中溶出度籃法100 轉(zhuǎn)始終高于槳法50 轉(zhuǎn)。

3.4 pH 7.2 磷酸介質(zhì)溶出曲線的測定

以pH 7.2 磷酸鹽溶液作為介質(zhì)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線。

初期籃法100 轉(zhuǎn)的溶解速度快，后期兩者溶出量接近。

3.5 pH 7.5 磷酸介質(zhì)溶出曲線的測定

以pH 7.5 磷酸鹽溶液作為介質(zhì)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線。

初期籃法100 轉(zhuǎn)的溶解速度快，后期兩者溶出量接近。

3.6 水介質(zhì)溶出曲線的測定

以水作為溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出實(shí)驗(yàn)，采用籃法100 轉(zhuǎn)和槳法50 轉(zhuǎn)(加沉降籃)，紫外分光光度發(fā)檢測溶出度，繪制對應(yīng)的溶出曲線。

溶解過程中溶出度籃法100 轉(zhuǎn)始終高于槳法50 轉(zhuǎn)。

3.7 實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象

實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，采用槳法50 轉(zhuǎn)的溶出杯中，膠囊在杯底部破裂，物料堆積為錐形，導(dǎo)致變異系數(shù)值可能偏大。投料過程中沉降籃降落位置和速度會有差異，也會導(dǎo)致變異系數(shù)值偏大。而籃法100 轉(zhuǎn)不會出現(xiàn)這種情況[3]。

3.8 溶出度變異系數(shù)數(shù)據(jù)比較

比較數(shù)據(jù)可知，實(shí)用槳法50 轉(zhuǎn)方法的溶出度變異系數(shù)高于籃法100 轉(zhuǎn)的變異系數(shù)。

3.9 其他因素

采用紫外分光光度發(fā)測定頭孢克肟膠囊的溶出度變異系數(shù)小于15%，方法學(xué)研究中線性范圍、回收率、溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)等方法學(xué)指標(biāo)滿足檢測要求，本品所用的輔料對檢測無干擾。

4 結(jié)語

通過進(jìn)行大量溶出實(shí)驗(yàn)，對比兩種溶出方法檢測溶出曲線的結(jié)果，并結(jié)合溶解過程中的現(xiàn)象和各時(shí)間點(diǎn)變異系數(shù)，明顯看出在各介質(zhì)中籃法100 轉(zhuǎn)的區(qū)分力優(yōu)于槳法50 轉(zhuǎn)，該方法與《中國藥典》中頭孢克肟膠囊溶出度方法一致。綜上所述，頭孢克肟膠囊溶出實(shí)驗(yàn)方法選擇籃法100 轉(zhuǎn)更為合適。