提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性的對(duì)策

郝麗紅

大同市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試所，山西大同 037008

提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性的對(duì)策

郝麗紅

大同市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試所，山西大同 037008

本文針對(duì)工作中應(yīng)用液相色譜法來(lái)檢測(cè)食品中食品添加劑時(shí)經(jīng)常出現(xiàn)的情況，從三個(gè)方面：準(zhǔn)備工作、樣品的分析過(guò)程以及實(shí)驗(yàn)后處理，分析了可能發(fā)生的情況，并總結(jié)出相應(yīng)的對(duì)策，對(duì)提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性有一定的指導(dǎo)作用。

液相色譜法；食品添加劑；準(zhǔn)確性；對(duì)策

為了改善食品的品質(zhì)、口感以及防腐和在加工工藝中的需要，食品生產(chǎn)廠家常常會(huì)在食品中添加一種或者幾種食品添加劑。目前，食品添加劑的種類(lèi)很多，主要有23種：抗結(jié)、酸度調(diào)節(jié)、消泡、漂白、增味、抗氧化、膨松、護(hù)色、著色、膠基糖果咀嚼和吹泡、乳化、面粉增白和提高焙烤制品質(zhì)量、酶制催化、被膜劑、防腐、水分保持、營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化、穩(wěn)定和凝固、增甜、增稠、食品加工助劑、食品香料、其他。

近年來(lái)，一些商家為了更大限度地延長(zhǎng)保質(zhì)期或者使食品的口感更佳，往往會(huì)在食品中添加超量的食品添加劑，甚至法律規(guī)定食品中禁止添加的添加劑，這給廣大人民群眾的生命健康造成很大的威脅。目前，檢測(cè)食品中添加劑的方法主要是用高效液相色譜［2］。但利用高效液相色譜儀來(lái)檢測(cè)食品中的添加劑時(shí)時(shí)常出現(xiàn)一些問(wèn)題。因此，如何提高液相色譜法對(duì)食品添加劑檢測(cè)的準(zhǔn)確性意義十分重大。

1 準(zhǔn)備工作

1.1 流動(dòng)相的過(guò)濾與脫氣

一般樣品溶液和流動(dòng)相中都會(huì)存在一些直徑在0.45μm以上的顆粒。而色譜柱中的填充物很細(xì)，色譜柱的內(nèi)腔很小，這樣造成樣品和溶劑中的細(xì)小顆粒容易堵塞色譜柱以及毛細(xì)管。所以，所有的溶劑在使用之前必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾，去除溶劑中的雜質(zhì)顆粒。

流動(dòng)相必須預(yù)先經(jīng)過(guò)脫氣處理，否則，在系統(tǒng)內(nèi)容易逸出氣泡，影響泵的正常工作。同時(shí)也會(huì)對(duì)HPLC檢測(cè)器的基線(xiàn)穩(wěn)定性和靈敏度產(chǎn)生影響，甚至無(wú)法檢測(cè)。對(duì)低沸點(diǎn)溶劑采用煮沸法或者抽氣法時(shí)需要注意溶劑揮發(fā)可能造成組成的變化問(wèn)題。目前最常見(jiàn)的脫氣做法是利用超聲脫氣。超聲脫氣的優(yōu)點(diǎn)是不會(huì)對(duì)溶劑的組成造成影響。一般超聲脫氣處理流動(dòng)相只需20min～30min之間。應(yīng)該避免溶劑瓶和超聲槽壁以及超聲槽底部相接觸，以免超聲處理時(shí)溶劑瓶破裂。再者，容器內(nèi)的液面不要比水面高出太多。

1.2 檢查HPLC的柱壓與排氣泡

檢查HPLC的柱壓是否是正常的狀態(tài)。柱壓過(guò)高或者過(guò)低都會(huì)對(duì)檢測(cè)的結(jié)果造成一定的影響。通常情況下，HPLC常常會(huì)出現(xiàn)柱壓過(guò)高的問(wèn)題。解決這個(gè)問(wèn)題一般采用以下的步驟：第一步，拆下保護(hù)柱，觀察柱壓。如果柱壓下降，則是保護(hù)柱出現(xiàn)問(wèn)題，如果柱壓仍然過(guò)高，則進(jìn)行下一步檢查；第二步，從HPLC上取下色譜柱，觀察柱壓。如果柱壓仍然過(guò)高，則是管路出現(xiàn)阻塞，需要進(jìn)行清洗，如果柱壓下降，則進(jìn)行下一步檢查；第三步，反接色譜柱的進(jìn)出口，接著用十倍于柱子體積的流動(dòng)相清洗色譜柱，觀察柱壓。如果柱壓沒(méi)有下降，則進(jìn)行下一步檢查；第四步，更換色譜柱的入口篩板，觀察柱壓。如果柱壓下降，則是因?yàn)闃悠坊蛘呷軇┲泻须s質(zhì)顆粒，堵塞了入口篩板，如果柱壓仍然很高，則需要聯(lián)系廠商。通常情況下，避免柱壓過(guò)高的做法是在HPLC的進(jìn)樣器和保護(hù)柱之間安裝在線(xiàn)過(guò)濾器。

另外，輸液管路中氣泡的及時(shí)排出也是提高檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟之一。如果管道中有氣泡存在，則分析的時(shí)候柱壓會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定，譜圖上表現(xiàn)為基線(xiàn)不穩(wěn)，甚至出現(xiàn)假峰的現(xiàn)象。對(duì)樣品的定性與定量造成非常大的影響。

1.3 其它準(zhǔn)備工作

為了提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性，試驗(yàn)前還需做以下工作，如檢查室內(nèi)的溫度變化情況、電壓的波動(dòng)情況、比例閥、單向閥、泵密封墊、保護(hù)柱、流動(dòng)性過(guò)濾頭等。

1.4 色譜柱的清洗與平衡

上述準(zhǔn)備工作完成以后，必須對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗和平衡。清洗的步驟為：先用含有甲醇或者乙腈約80%的純水沖洗半個(gè)小時(shí)左右，接著用甲醇或者乙腈沖洗半個(gè)小時(shí)左右，然后用流動(dòng)相平衡色譜柱到基線(xiàn)平穩(wěn)。

1.5 樣品處理

樣品處理必須按標(biāo)準(zhǔn)要求。否則，會(huì)出現(xiàn)以下兩種情況。一是不能徹底分離與待測(cè)組分結(jié)構(gòu)相近的組分而導(dǎo)致檢測(cè)的結(jié)果偏高；二是待測(cè)組分未能徹底分離而導(dǎo)致檢測(cè)的結(jié)果偏低。因此，處理樣品時(shí)應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)要求，比如試劑加入的量，樣品處理所需的時(shí)間和溫度等等。平行樣應(yīng)注意處理?xiàng)l件相同。

2 樣品的分析過(guò)程

2.1 定性

一般采用加標(biāo)同類(lèi)樣品來(lái)定性的方法，即向不含待測(cè)組分的同類(lèi)樣品中加入一定濃度的標(biāo)樣，通過(guò)與樣品的保留時(shí)間的比較來(lái)進(jìn)行定性。如果兩者的保留時(shí)間差不多，則在待測(cè)樣品中加入含量與樣品待測(cè)組分基本相同的等體積標(biāo)液進(jìn)行定性。若加標(biāo)樣品中待測(cè)組分的峰出現(xiàn)叉峰，則可以確定不是待測(cè)組分；若加標(biāo)樣品中待測(cè)組分的峰沒(méi)有出現(xiàn)叉峰，根據(jù)HPLC測(cè)出的待測(cè)組分含量、樣品和標(biāo)樣的混合計(jì)算出來(lái)的含量基本相同，則可以確定是待測(cè)組分，反之，非待測(cè)組分。

2.2 定量

在一定的條件下分別加入一系列相同體積的標(biāo)樣，測(cè)得相對(duì)應(yīng)的響應(yīng)值，繪制出響應(yīng)值與標(biāo)樣含量的校準(zhǔn)曲線(xiàn)，接著檢測(cè)待測(cè)樣品，從校準(zhǔn)曲線(xiàn)上找出待測(cè)組分響應(yīng)值對(duì)應(yīng)的組分含量。所以，在實(shí)際檢測(cè)工作中，若待測(cè)組分的濃度低于檢測(cè)低限，或者按照標(biāo)準(zhǔn)方法無(wú)法濃縮的，結(jié)果為未檢出；若可以濃縮，濃縮后再進(jìn)行檢測(cè)；若可以增加樣品量，應(yīng)增加樣品量后再進(jìn)行檢測(cè)；若待測(cè)組分的濃度高于校準(zhǔn)曲線(xiàn)的上限，則應(yīng)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測(cè)。

在進(jìn)行山梨酸、糖精鈉、苯甲酸［4］的分析過(guò)程中，在苯甲酸前有時(shí)會(huì)有安賽蜜峰的出現(xiàn)，并在糖精鈉前有時(shí)會(huì)有脫氫乙酸峰的出現(xiàn)，而且這些峰非常接近，且不能完全分離，形成分叉峰或者饅頭峰，嚴(yán)重影響樣品的定性與定量。如果通過(guò)樣品標(biāo)簽的信息能確定添加劑，就可以直接定性。如果待測(cè)組分超標(biāo)，則要降低流動(dòng)相的極性徹底分開(kāi)雜質(zhì)峰后再進(jìn)行定量。如果不能確定樣品中的添加劑，則要通過(guò)樣品加標(biāo)來(lái)定性，再定量。如果標(biāo)準(zhǔn)中聲明不允許添加的，但在待測(cè)峰的附近出現(xiàn)這些添加劑峰的，則要通過(guò)樣品加標(biāo)來(lái)定性，再定量，并注意待測(cè)峰應(yīng)與雜質(zhì)峰完全分離開(kāi)，否則，要降低流動(dòng)相的極性來(lái)使雜質(zhì)峰徹底分離開(kāi)后才可定量。

3 實(shí)驗(yàn)后處理

完成實(shí)驗(yàn)后，必須徹底清洗HPLC的色譜柱。用含甲醇或乙腈約80%的純水來(lái)沖洗，沖洗到柱壓恢復(fù)至實(shí)驗(yàn)前用含甲醇或乙腈約80%的純水沖洗時(shí)的柱壓。用甲醇或者乙腈來(lái)沖洗，沖洗到柱壓恢復(fù)至實(shí)驗(yàn)前用甲醇或者乙腈沖洗時(shí)的柱壓。

一般半個(gè)月至一個(gè)月要清洗單向閥、泵密封墊、保護(hù)柱、流動(dòng)性過(guò)濾頭等易堵塞的部件一次。清洗用純水要現(xiàn)做，現(xiàn)過(guò)濾，現(xiàn)用。在過(guò)濾好的清洗用純水中加入10%的甲醇或乙腈溶劑，可防止細(xì)菌滋生，延長(zhǎng)純水的使用時(shí)間。

4 結(jié)論

綜上所述，在食品中食品添加劑檢測(cè)高標(biāo)準(zhǔn)的環(huán)境下，高效液相色譜儀的分析技術(shù)以其靈敏度、分辨率和定量精度高的優(yōu)點(diǎn)，在食品檢測(cè)領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用。為了迎合檢測(cè)的高標(biāo)準(zhǔn)，我們必須提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性。本文研究表明，準(zhǔn)備工作、樣品的分析過(guò)程以及實(shí)驗(yàn)后處理相應(yīng)對(duì)策的總結(jié)對(duì)提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性有一定的指導(dǎo)作用。

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1674-6708（2013）97-0116-02