家兔失血性休克實驗技術(shù)的探索和改進

王慧雯，干仲元

(上海中醫(yī)藥大學(xué)，教學(xué)實驗中心，機能實驗室，上海 201203)

《生理科學(xué)綜合實驗》作為上海中醫(yī)藥大學(xué)機能實驗教學(xué)的一門特色課程，將生理學(xué)、病理生理學(xué)和藥理學(xué)這三門學(xué)科的實驗教學(xué)部分有機整合?！凹彝檬а孕菘藢嶒灐睘楸菊n程的重要組成部分。在日常教學(xué)中發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)實驗方法操作繁瑣，學(xué)生自行完成該實驗較為困難，實驗成功率低，教學(xué)效果不甚理想。此次課程建設(shè)，對“家兔失血性休克”實驗技術(shù)(包括手術(shù)操作、實驗裝置設(shè)計、觀察項目等)進行研究與改進，改進后操作難度降低，實驗成功率提高，達到更好的教學(xué)目的，為學(xué)生實驗教學(xué)創(chuàng)造更好的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 試劑與儀器

1%戊巴比妥鈉(戊巴比妥鈉干粉劑為德國Fluka公司產(chǎn)品)、肝素生理鹽水(肝素鈉注射液為上海第一生化藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。)、生理鹽水(上海百特醫(yī)療用品有限公司)、RM6240BD型多道生理信號采集處理系統(tǒng)、YPJO1型壓力換能器(均為四川成都儀器廠產(chǎn)品，中國)、三通輸液治理及壓力監(jiān)測旋塞系統(tǒng)(德國B.Braun Melsungen AG公司)。

1.1.2 實驗動物

普通級家兔，成年，雄性，體重 2.4～2.6kg，購自上海市松江區(qū)車墩實驗動物良種場【SCXK(滬)2012—0008】。

1.2 實驗方法

“家兔失血性休克實驗”采用家兔Wiggers法模擬失血性休克［1］，通過頸動脈插管途徑觀察和監(jiān)測家兔心率及血壓的變化，觀察腸系膜微循環(huán)發(fā)生瘀阻確定休克發(fā)生，頸靜脈輸血輸液路徑進行搶救［1-4］。在以往教學(xué)中，學(xué)生普遍反映獨立完成實驗存在較大困難，為此我們對參加過《生理科學(xué)綜合實驗》課程的學(xué)生發(fā)放問卷調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)72%的學(xué)生表示實驗操作困難，實驗失敗率為39.8%。通過統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)實驗失敗的問題集中在以下幾個方面:1.肝素化后的家兔在手術(shù)過程中容易出血不止，放血造模前已經(jīng)出現(xiàn)休克甚至死亡。2.多處手術(shù)操作復(fù)雜，耗時較長，家兔術(shù)中容易死亡。3.多處插管操作繁復(fù)，因此學(xué)生在實驗過程中易顧此失彼、高度緊張或直接失敗，無法有效觀察到家兔失血性休克狀態(tài)下的生理、病理現(xiàn)象，使課程本身失去教學(xué)意義。課題組在上述通用實驗方法基礎(chǔ)上［1-4］，嘗試做出以下探索性改進:如表1。

1.3 手術(shù)方法改進

1.3.1 實驗中通過對三通閥門組的改進，將血壓心率監(jiān)測途徑和放血途徑合并到股動脈［7］。因股動脈非主動脈，離心臟較遠，腹部循環(huán)比較豐富，既可順利造模，同時，若在造模過程中發(fā)生放血閥門堵塞需要沖洗，對心臟功能影響也較小。此外，我們還改進了插管結(jié)構(gòu)，詳見1.4［3］，這樣便可以同時兼顧放血與血壓、心率的監(jiān)測。課題組對兩組體重為2.4～2.6kg的雄性家兔，每組6只，分別做頸總動脈插管和股動脈插管，對比在造模和搶救過程中，通過頸總動脈插管途徑監(jiān)測血壓、心率與股動脈插管途徑監(jiān)測血壓、心率可得:實驗中股動脈插管組家兔測得原始血壓低于頸動脈插管組，為外周阻力逐漸增大的關(guān)系［3］。在失血性休克造模及搶救過程中，頸動脈插管組及股動脈插管組血壓曲線相似;實驗過程中，頸動脈組插管組家兔及股動脈插管組家兔心率出現(xiàn)都相應(yīng)病理變化［3，5］。因此，將放血途徑和監(jiān)測途徑合并到股動脈，對實驗結(jié)果影響不大，具有教學(xué)意義。并且在上述前提下，達到了簡化實驗步驟、降低操作難度的目的。

1.3.2 以往教學(xué)中對家兔的輸血輸液經(jīng)由頸外靜脈進行，學(xué)生反映實際操作中，分離血管困難，容易將靜脈挑斷大量出血。課題組考慮到麻醉家兔時經(jīng)由耳緣靜脈注射，家兔耳緣靜脈粗大淺表，可以接受大劑量快速注射，擬將頸外靜脈輸液途徑改為耳緣靜脈輸液途徑，在麻醉時采用靜脈留置針，將留置針固定在家兔耳部。這樣改動后，操作簡便，留置針本身帶有肝素帽，可避免血液凝固堵塞針頭，針頭軟管設(shè)計更易于固定，避免造成靜脈損傷影響注射。經(jīng)過課題組實際操作驗證可行。

表1 實驗方法Tab.1 Empirical method

圖1 前置三通閥控制系統(tǒng)連接簡圖Fig.1 prepositive stopcocks system

1.4 實驗裝置改進

以往實驗中，家兔一般事先肝素化，劑量為4000 U/(kg·bw)［2，4，10］(U 為效價單位)，家兔肝素化后手術(shù)容易在手術(shù)過程中大量失血，導(dǎo)致在造模前家兔已經(jīng)休克甚至死亡。課題組嘗試家兔不術(shù)前肝素化手術(shù)，發(fā)現(xiàn)家兔失血確實減少，但造模過程中，三通閥門放血后堵塞的概率很高，因此，我們將肝素注射時間改為手術(shù)完成后，放血造模前，調(diào)整肝素注射劑量為原來的1/3用以抗凝(實驗中使用的肝素生理鹽水濃度為:1000 U/mL［7-9］)。此外，原有插管裝置的三通閥為后置，與換能器直接連接，插管長度超過30 cm，直接對頸總動脈插管進行沖洗損傷心臟功能，于是我們在將插管途徑合并到股動脈后，對三通閥門的結(jié)構(gòu)進行了調(diào)整，從一組三通閥門控制變成多組三通閥組成一個控制系統(tǒng)，且將三通閥門組前置縮短插管到放血閥門的距離為10 cm以內(nèi)，如圖1:從閥門1放血，如果出現(xiàn)凝血則從閥門2注入肝素生理鹽水沖洗，將插管到放血閥門一路的血液沖洗稀釋，由于縮短放血距離，在沖洗插管時，只需少量注入肝素生理鹽水，對股動脈功能的影響也盡量降低，經(jīng)實驗驗證可行。

2 結(jié)語

本次“家兔失血性休克”實驗技術(shù)改進后投入教學(xué)，2010～2012學(xué)年參與“生理綜合性實驗”的共兩批學(xué)生，課題組于課后進行問卷調(diào)查，結(jié)果反映實驗改進后，認為操作困難的學(xué)生比例由原來的72%下降至31%，實驗失敗率下降為12%。課題組對“家兔失血性休克”實驗進行的一系列技術(shù)改進，實驗結(jié)果有效、實驗操作難度降低、實驗成功率顯著提高。同時由于時間和經(jīng)驗所限，此課程改進也仍然存在一些不足，比如:1.家兔腸系膜微循環(huán)的觀察，作為示教，應(yīng)該清晰明了，可反復(fù)觀察更佳。目前我們考慮與信息教學(xué)相結(jié)合，借助虛擬實驗室或者視頻同步教學(xué)，擬在下一期課程建設(shè)中進一步實踐，達到最佳教學(xué)效果。2.在本次課程建設(shè)項目中，對實驗觀察項目的選取比較典型，可以擴大觀察范圍，如監(jiān)測尿量及測定血紅蛋白等，或可實驗不同的搶救方案并觀察效果，提升教學(xué)意義。

［1］裘法祖，陳孝平.《外科常用實驗方法及動物模型的建立》［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003年8月:97-99.

［2］陸源，夏強.《生理科學(xué)實驗教程》［M］.浙江:浙江大學(xué)出版社，2004年8月:270-274.

［3］張志雄.《生理學(xué)》［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012年1月:102-117.

［4］龔永生，陳醒言.《醫(yī)學(xué)機能實驗學(xué)》［M］.北京:高等教育出版社，2012年1月:112-113.

［5］李桂源.《病理生理學(xué)》(第2版)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2011年6月:262-288.

［6］劉曉琳，張騰，王陛可.休克指數(shù)在失血性休克中的監(jiān)測意義［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2011，24(3):290-291.

［7］姚奇，倪秀雄，卓若.關(guān)于家兔失血性休克實驗課的教學(xué)體會［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，8(6):631-632.

［8］張建青，李墨林.醫(yī)學(xué)機能實驗中失血性休克實驗的教學(xué)體會［B］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，28(1):79.

［9］王建榮，蘇榮，劉秀華等.復(fù)蘇液體溫度對失血性休克兔微循環(huán)的影響［J］.微循環(huán)學(xué)雜志，2004，14(4):18-20.

［10］陳小琳，楊皓莊，王達安等.發(fā)熱的動物模型復(fù)制方法的改進:制備EP冷貯溫度的新選擇［J］.中國病理生理雜志，1999，15(3):285-286，288.