石榴茶提取物對小鼠抗疲勞抗氧化作用的研究

劉志國，趙文亞，劉洪波，張清，鮑娟，杜文婭

（1.棗莊學院體育學院，山東棗莊 277160；2.棗莊學院生命科學學院，山東棗莊 277160）

近年來有研究證明，很多植物性食品如綠茶、普洱茶等的提取物能有效地清除運動時機體產(chǎn)生的自由基，提高體內(nèi)糖原含量，增強機體的運動能力。

茶是一種常見的飲品，有關(guān)抗疲勞抗氧化作用的研究，杜云研究了茶多酚對運動大鼠抗疲勞作用的實驗研究[1]，張冬英等研究了普洱茶熟茶抗疲勞作用研究[2]，梁勇等研究了云南綠茶抗疲勞作用的研究[3]。作為茶葉中的的一個特有品種，石榴茶以其清香醇厚的口感和良好的保健功能深受廣大消費者的喜愛[4]。用水把石榴茶中的有效成分提取出來即石榴茶提取物，目前對于石榴茶提取物抗氧化抗疲勞作用的研究文獻還比較少。本實驗擬以石榴茶提取物為原料，研究其對小鼠運動能力和心肌抗氧化能力的影響，為深入研究石榴茶的保健作用，推動石榴茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 石榴茶提取物

采用購至兩個廠家的石榴茶（山東棗莊榴園榴葉茶廠和嶧縣榴茶廠）進行制備。

1.1.2 實驗動物

昆明種小鼠，雌雄各40 只，體重（20±2）g，購自濟南立秋實驗動物繁殖中心，動物合格證號SCXK（魯）20110024。

1.1.3 試劑

SOD 試劑盒、MDA 試劑盒、GSH-Px 試劑盒、LG試劑盒、MG 試劑盒，均購自上海恒遠生化試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 石榴茶提取物的制取

將石榴茶粉碎，沸水浸提，茶水之比為1 ∶20，然后進行減壓濃縮，制成石榴茶提取液，其濃度為1 ∶1，降至室溫后低溫冷藏[5]。

1.2.2 動物給藥及分組

小鼠進行群養(yǎng)，每日喂食專用鼠飼料（山東大學醫(yī)學院動物實驗中心提供），自由飲用純凈水。6 d 后，按照每組20 只進行實驗把小鼠隨機分為4 組：對照組、石榴茶提取物低、中、高劑量組，雌雄各半。根據(jù)《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》的要求，在小鼠實驗中其中一個劑量組的劑量應當是人體推薦劑量的5 倍，且最高劑量不超過人體推薦劑量的30 倍[6]。低、中、高劑量組分別給予石榴茶提取物0.5、1.0、2.0 g/kg，相當于推薦人體劑量的5 倍、10 倍、20 倍。采取灌胃法，在每天11：00～12：00 間，對照組小鼠每天分別一次性灌胃蒸餾水，低、中、高實驗組灌服和相應量的石榴茶提取物溶液，其余時間自由進食飲水。每5 d 稱體重一次，然后根據(jù)體重灌胃，持續(xù)30 d。

1.2.3 力竭游泳時間及心肌生化指標的測定

小鼠在末次灌胃20 min 后，按各自體重的5%負重（尾部細棉繩系上相應重量的鉛皮）游泳，投入溫度（25±1）℃，深35 cm 的水池中，記錄小鼠從入水至不再浮出水面所持續(xù)的時間。第一批4 個組別的實驗各取10 只小鼠平行進行，以減少系統(tǒng)誤差。采用斷頭法迅速處死力竭小鼠，生理鹽水沖洗取出的心臟、然后濾紙吸干水分，再用生理鹽水制成10%的均勻漿液，倒入離心管，3 000 r/min 離心12 min，然后冷藏，按照標準測定方法嚴格操作，測定心肌中GSH-Px、SOD、MDA 的含量。

1.2.4 運動后肝臟和后腿肌肉中生化指標的測定

第二批每組10 只小鼠在末次灌胃20 min 后，在水溫（25±1）℃的水中游泳10 min，然后立即斷頭處死，迅速取出小鼠的肝臟和后腿肌肉，用生理鹽水沖洗、濾紙吸干水分，然后用生理鹽水制成10%的勻漿液，倒入離心管，3 000 r/min 離心12 min，取上清液，按照試劑盒說明嚴格操作，測定肝臟中LG 和后腿肌肉中MG 的含量。

1.3 統(tǒng)計分析

2 結(jié)果與分析

2.1 石榴茶提取物對小鼠力竭游泳時間的影響

石榴茶提取物對小鼠力竭游泳時間的影響，見表1。

表1 石榴茶提取物對小鼠力竭游泳時間的影響（，n=10）Table 1 The influence of pomegranate tea extract on the swimming time in exhausted rats

小鼠負重游泳能力與抗疲勞效果呈正相關(guān)，能反映小鼠運動水平的高低。由表1 可知，小鼠負重游泳時間較對照組要長。低劑量組和對照組相比有顯著性差異（P＜0.05），中劑量組和高劑量組與對照組相比有極顯著性差異（P＜0.01）。表明石榴茶提取物能不同程度延長小鼠游泳的時間，提高抗疲勞能力，其中以高劑量組效果最好。

2.2 石榴茶提取物對小鼠運動后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影響

石榴茶提取物對小鼠運動后SOD、MDA 和GSHPx 含量的影響，見表2。

表2 石榴茶提取物對小鼠運動后SOD、MDA 和GSH-Px 含量的影響（，n=10）Table 2 The influence of pomegranate tea extract on SOD，MDA and GSH-Px in post-exercise rats

有研究證明，小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px 的含量與抗疲勞效果呈正相關(guān)，MDA 的含量與抗疲勞效果呈負相關(guān)。實驗結(jié)果從表2 可以看出，SOD 在實驗組中小鼠心肌中的含量與低、中、高劑量組相比均有增高趨勢，分別增加了4.15%、8.99%和19.09%，其中低劑量組和對照組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組均和對照組呈極顯著性差異（P＜0.01）；與對照組相比，實驗組中MDA 的含量依次降低了0.35%、4.95%、12.01%，其中，中、高劑量組和對照組相比分別呈顯著性差異（P＜0.05）和極顯著性差異（P＜0.01）；與對照組相比，低、中、高劑量組中GSH-Px 的含量依次提高了10.94 %、44.53%、74.22%，其中低劑量組和對照組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組和對照組呈極顯著性差異（P＜0.01）。實驗表明，石榴茶提取物對于提高心肌的抗氧化能力有較好地促進作用。

2.3 石榴茶提取物對小鼠運動后LG 和MG 含量的影響

石榴茶提取物對小鼠運動后LG 和MG 含量的影響，見表3。

表3 石榴茶提取物對小鼠運動后LG 和MG 含量的影響（，n=20）Table 3 The influence of pomegranate tea extract on LG and MG in post-exercise rats

體內(nèi)糖的主要儲備形式是肝糖原和肌糖原，其量的多少反映小鼠的運動能力，決定抗疲勞效果。實驗證明，由表3 所示，與對照組相比，實驗組中小鼠肝臟中LG 的含量依次增高，其中低劑量組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組均呈極顯著性差異（P＜0.01）；與對照組相比，實驗組低、中、高劑量組后腿肌肉中MG 的含量均有增高，其中低劑量組呈顯著性差異（P＜0.05），中、高劑量組和對照組均呈極顯著性差異（P＜0.01）。實驗表明，石榴茶提取物能較好地提高肝臟中LG 和后腿中MG 的含量，提高小鼠的運動和抗疲勞能力。

3 討論

運動性疲勞是機體運動能力下降的現(xiàn)象。大強度運動后小鼠生理生化指標會發(fā)生變化，產(chǎn)生大量自由基，是造成運動性疲勞的重要因素。為了提高運動能力，可從增加體內(nèi)抗氧化劑和糖原含量來抑制運動性疲勞[7-8]。通過石榴茶提取物對小鼠抗疲勞作用的研究，根據(jù)《保健食品功能學評價程序和檢驗方法》結(jié)果判定原則，“若1 項以上（含1 項）運動試驗和2 項以上（含2 項）生化指標為陽性，即可以判斷該受試物具有抗疲勞作用。”，實驗顯示：石榴茶提取物能增強小鼠游泳能力，提高心肌中SOD 和GSH-Px 的含量并降低MDA 含量，增強肝糖原和肌糖原的儲備能力，顯示石榴茶提取物能提升小鼠抗氧化抗疲勞能力，為石榴茶的推廣應用提供了依據(jù)。

[1]杜云.茶多酚對運動大鼠抗疲勞作用的實驗研究[J].西北大學學報：自然科學版,2012,42(5)：783-786

[2]張冬英,黃業(yè)偉,汪曉娟,等.普洱茶熟茶抗疲勞作用研究[J].茶葉科學,2010,30(3)：218-222

[3]梁勇,邵宛芳,黃業(yè)偉,等.云南綠茶抗疲勞作用研究[J].食品工業(yè)科技,2011,32(1)：271-272

[4]劉金勇,李秀娟.嶧城區(qū)石榴茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略[J].中國林副特產(chǎn),2004,71(4)：65-66

[5]黃業(yè)偉,邵宛芳,冷麗影,等.普洱茶生茶抗疲勞作用研究[J].西南農(nóng)業(yè)學報,2010,23(3)：801-804

[6]國家衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品功能學評價程序和檢驗方法[M].北京：國家衛(wèi)生部,1996：6-7

[7]曲綿域,高云秋,浦鈞宗,等.實用運動醫(yī)學[M].北京：北京科學技術(shù)出版社,2003：198-201

[8]Coyle C H,Philips B J,Morrisroe S N,et al.Antioxidant effects of green tea and its polyphenols on bladder cells[J].Life sci,2008,83(1/2)：12-18