純化蝎毒抗癌多肽灌胃對小鼠肝癌H22移植瘤的抑制作用

沈東海，高春芳，劉春霞

近年國內(nèi)外學(xué)者對蝎毒的抗腫瘤作用進(jìn)行了廣泛的研究，其對人類多種腫瘤細(xì)胞株的抑制作用和改善人體免疫狀況作用已被證實(shí)[1-4]，但由于蝎毒是由多種特性不同的毒素組成，直接應(yīng)用不良反應(yīng)較大，而目前對蝎毒的研究主要集中在7000分子量以上成分的研究，且多經(jīng)注射途徑，仍有較大的不良反應(yīng)。純化蝎毒抗癌多肽（APBMV）經(jīng)腹腔注射可迅速擴(kuò)散至全身（不通過血腦屏障），其半數(shù)致死量（LD50）為 4~8 mg/kg，但灌胃劑量>100 mg/kg 未見任何中毒癥狀。筆者等也已對蝎毒的抗腫瘤作用進(jìn)行了10余年的研究，從東亞鉗蝎蝎毒毒素中提取、分離、篩選出了抗腫瘤的有效成分APBMV（分子量<3500）。本研究主要觀察純化的APBMV （分子量<3500）灌胃對小鼠肝癌動物移植瘤的抑制作用，以期對為進(jìn)一步得到純化的蝎毒抗腫瘤的有效成分和對口服APMBV可行性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 昆明種小鼠40只，雌雄各半，體重（20±2）g，由解放軍150醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。按APBMV （分子量<3500）和對照藥品共分4組。APBMV系由河南東亞鉗蝎蝎毒中分離，由華美公司協(xié)助分離提供，經(jīng)冷凍干燥后-20℃保存，臨用前生理鹽水配制成所需濃度。環(huán)磷酰胺為常用的化療藥物。另設(shè)陽性和空白對照組。

1．2 方法

1．2．1 帶瘤動物的移植和接種[5]取傳代6～7 d的H22帶瘤小鼠，無菌抽取乳白色的腹水，2 g/L臺盼藍(lán)染色鏡檢細(xì)胞活力在95%以上，以無菌生理鹽水稀釋至細(xì)胞濃度1.0×107/ml的懸液，每只小鼠右側(cè)腋部皮下接種0.2 ml。

1．2．2 實(shí)驗(yàn)方法 接種腫瘤24 h后，分別給予相應(yīng)藥物和劑量灌胃，環(huán)磷酰胺0.2 mg/20 g，腹腔注射，1次/d，連續(xù)給藥10 d，所有帶瘤小鼠均于末次給藥后次日頸椎脫臼致死，解剖腫瘤，按下列公式計算抑瘤率（%）：抑瘤率（%）=（1-治療組瘤重/陽性對照組瘤重）×100%。

1．3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SAS6.12統(tǒng)計軟件行方差分析檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

APBMV（分子量<3500）對小鼠H22轉(zhuǎn)移瘤的生長抑制情況如表1所示。

表 1 APBMV對H22轉(zhuǎn)移瘤的生長抑制

從表1可以看出，APBMV（分子量<3500）對H22轉(zhuǎn)移瘤有明顯的生長抑制作用，瘤重明顯降低，抑瘤率達(dá)60%以上，且各劑量組之間有顯著性量效關(guān)系，對H22有良好的實(shí)驗(yàn)療效。APBMV可以明顯延長實(shí)驗(yàn)動物的生存期，APBMV組動物未有死亡。

3 討 論

由于移植性動物腫瘤模型能夠在實(shí)驗(yàn)室條件下在同一時間內(nèi)制造出比較接近的、一定數(shù)量的帶瘤動物用于進(jìn)行藥物篩選，因此動物移植性腫瘤模型是篩選和研究抗腫瘤藥物的常用及重要的實(shí)驗(yàn)手段。蝎毒具有對人類多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并可改善人體的免疫機(jī)能，但由于蝎毒為一種具有多種生物活性的混合物，直接應(yīng)用不良反應(yīng)較大，且目前所有實(shí)驗(yàn)均為實(shí)驗(yàn)動物腹腔注射，不良反應(yīng)也較大，全東琴等[7]將蝎毒提取液直接制成脂質(zhì)體前體，對口服給藥的藥效、制劑穩(wěn)定性及制劑藥物含量、包裝率進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明蝎毒脂質(zhì)體前體制劑口服有效。口服劑量6 mg/kg與腹腔注射2 mg/kg相當(dāng)，脂質(zhì)對藥物包裹率可達(dá)54.0%，制劑比較穩(wěn)定。本實(shí)驗(yàn)采用篩選藥物常用的H22動物模型，其接種動物為昆明小鼠，經(jīng)實(shí)驗(yàn)性藥物（APBMV，分子量<3500）治療10 d后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)APBMV（分子量<3500）對H22有明顯的抑制作用，且有顯著性量效關(guān)系，其中大劑量組抑瘤率>50%。環(huán)磷酰胺是臨床上治療腫瘤的常用藥物，也是本實(shí)驗(yàn)選用的陽性對照藥物，實(shí)驗(yàn)表明環(huán)磷酰胺對H22具有顯著的抑制作用，作用略強(qiáng)于APBMV（分子量<3500）高劑量組，但無顯著性差異，與以前蝎毒腹腔注射治療實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似。其他學(xué)者也證明APMBV除了對腫瘤細(xì)胞有直接抑殺作用外，對機(jī)體功能具有調(diào)節(jié)作用，可以提高機(jī)體的免疫功能，保護(hù)和增強(qiáng)造血機(jī)能，改善機(jī)體一般狀況的作用。筆者等以前的研究表明APMBV對大腸癌的抑制作用大于氟脲嘧啶 （5-FU），APBMV（分子量<3500）是筆者等首次從蝎毒中提取、篩選出的純度較高的具有較高的抗癌活性的一種多肽物質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)再次證明其具有明顯的抗癌活性，且證明口服蝎毒同樣可以抑制腫瘤生長，說明蝎毒抗癌有效成分主要集中在分子量<3500的成分中，也說明蝎毒抗癌的這種成分中是從APMBV中分離得到的純化度更高、抑制腫瘤作用更強(qiáng)的有效成分，也說明口服蝎毒是可行的，為今后分離到純度更高、抑制腫瘤作用更強(qiáng)的有效成分和蝎毒藥物劑型的研制奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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[3]董偉華，孔天翰，韓雪飛，等.蝎毒抗癌多肽對4種人腫瘤細(xì)胞系的作用[J]. 河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999，34（1）：52.

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[5]韓 銳.抗癌藥物研究與實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：北京醫(yī)科大學(xué)-中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1997.295.

[6]魏 東，王元和，高春芳，等.東亞鉗蝎灌腸治療大腸癌前后腫瘤組織中 DNA 參數(shù)的變化[J]. 腫瘤，1997，17（6）：458.

[7]全東琴，蘇德森，張景海，等.蝎毒脂質(zhì)體前體制劑的研究[J].中國生化藥物雜志，1997，18（3）：116.