失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用觀察及機制初探

靳剛強徐 敏李福雷尹 航于永軍

（1 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000；2 河北省滄州醫(yī)學高等?？茖W校，河北 滄州 061000）

失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用觀察及機制初探

靳剛強1徐 敏1李福雷1尹 航1于永軍2

（1 河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000；2 河北省滄州醫(yī)學高等?？茖W校，河北 滄州 061000）

目的探究失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用及其作用機制。方法將心電圖正常的Wistar健康大鼠隨機均分為6組，空白對照組、模型對照組、小劑量組，中劑量組，高劑量組，陽性對照組（復方丹參滴丸），連續(xù)灌胃給藥7d，從第3日起除正常對照組外，其余各組均于給藥后1h皮下注射異丙腎上腺素5mg/(kg·d)，連續(xù)5d，時間間隔為24h，正常對照組給予等量生理鹽水皮下注射，用心電圖機記錄不同時間段的Ⅱ?qū)?lián)心電圖J值的變化。并測定末次注射iso 2h后CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平。結(jié)果與空白對照組相比，模型對照組中大鼠的J 值下降值、CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平明顯提高（P＜0.05）；與模型對照組相比，失笑散顆粒小劑量組能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值、CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平降低，P＞0.05，無統(tǒng)計學意義，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組均能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值、CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平明顯降低(P＜0.05)。結(jié)論失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血保護作用顯著，增強SOD活力系數(shù)，清除自由基，從而減輕心肌損傷。

心肌缺血；異丙腎上腺素；失笑散；保護作用；作用機制

冠狀動脈性心臟病簡稱冠心病，又稱缺血性心臟病。它指由于脂質(zhì)代謝不正常，血液中的脂質(zhì)沉著在原本光滑的動脈內(nèi)膜上，在動脈內(nèi)膜一些類似粥樣的脂類物質(zhì)堆積而成白色斑塊，稱為動脈粥樣硬化病變。這些斑塊漸漸增多造成動脈腔狹窄，使血流受阻，導致心臟缺血，產(chǎn)生心絞痛[1,2]。失笑散出自于宋·《太平惠民和劑局方》，由蒲黃和五靈脂等份經(jīng)過一系列顆粒制作工藝而制成顆粒，具有活血祛瘀，散結(jié)止痛的功效。經(jīng)過大量的臨床研究，失笑散能有效地改善心電圖異常，抗動脈粥樣硬化，抗心肌缺血，改善心肌供血能力[3]。本文通過觀察失失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌損傷的保護作用，探究其作用機制，現(xiàn)將工作總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 動物

雄性Wistar健康大鼠，體質(zhì)量180～220g，由河北醫(yī)科大學實驗動物中心提供，動物合格證號：DK0608-0062。

1.2 儀器、試劑與藥物

XDH-B型心電圖機（上海醫(yī)用電子儀器廠）；Humalyzer 2000型半自動生化分析儀（美國）；異丙腎上腺素（iso）為上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，批號20120706；復方丹參滴丸為天津天士力制藥股份有限公司產(chǎn)品，批號20120608；失笑散顆粒（蒲黃，五靈脂等份自制）。

1.3 分組及給藥處理

表1 六組大鼠血清CRP、TNT、BNP、SOD及MDA含量變化（χ—±s）

將心電圖正常的大鼠隨機分為6組，每組10只，共60只。空白對照組給等容量生理鹽水，模型對照組給等容量生理鹽水，小劑量組8g/kg，中劑量組12g/kg，高劑量組16g/kg，陽性對照組72.9mg/kg復方丹參滴丸，各組均連續(xù)灌胃給藥7d。從第3日起除正常對照組外，其余各組均于給藥后1h皮下注射異丙腎上腺素5mg/(kg·d)，連續(xù)5d，時間間隔為24h，正常對照組給予等量生理鹽水皮下注射，記錄給藥前及第5次注射ISO后心電圖，觀察J值變化，J值下降值=注射iso后J值-注射iso前J值。末次注射后2h，處死動物，取血，制備血清，測定AST（谷草轉(zhuǎn)氨酶）、CK-MB（磷酸肌酸激酶同工酶）、CK（磷酸肌酸激酶） 及LDH（乳酸脫氫酶）含量采用試劑盒（Beacon Analytical Systems，Inc.）。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件統(tǒng)計處理及分析，計量資料以（χ—±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05差異顯著，認為具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同組J值下降值對比

如圖1所示，與空白對照組相比，模型對照組大鼠的J值明顯提高（P＜0.05)；與模型對照組相比，失笑散顆粒小劑量組能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值降低，P＞0.05，差異不明顯，無統(tǒng)計學意義，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組均能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值明顯降低(P＜0.05)。

圖1 六組大鼠心肌缺血心電圖中不同時間J值下降值趨勢圖

2.2 血清CRP、TNT、BNP、SOD及MDA含量

與空白對照組相比，模型對照組大鼠的血清CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平明顯提高(P＜0.05)；與模型對照組相比，失笑散顆粒小劑量組大鼠血清 CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平降低了，P＞0.05，差異不顯著，無統(tǒng)計學意義，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組大鼠血清CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平明顯減輕(P＜0.05)；失笑散顆粒中劑量組及高劑量組與陽性對照組比較，CRP、TNT、BNP、SOD及MDA水平降低值相當，效果相當。見表1。

3 討 論

異丙腎上腺素（ISO）為β受體激動劑，持續(xù)給予大鼠ISO會引起細胞內(nèi)Ca2+濃度的升高及自由基產(chǎn)生，增加心肌耗氧量，導致大鼠心肌缺血性損傷，而這種動物模型與人體心肌損傷相似程度較大，故本文通過異丙腎上腺素造模，評價抗心肌缺血情況[4]。當出現(xiàn)心肌缺血損傷時，由于無氧代謝受到障礙，所致能力供應(yīng)不足，有害物質(zhì)在體內(nèi)堆積，加之細胞內(nèi)鈣離子超載等因素造成心功能下降，心肌收縮力減弱，細胞膜通透性增強，使細胞內(nèi)酶大量釋放入血液。心電圖J點變化值是個評估心肌缺血性損傷的重要指標，微小的變化就能反映心肌損傷的情況。

目前，大量研究表明心肌缺血性損傷與自由基的大量產(chǎn)生、細胞內(nèi)鈣離子的超載、心肌能量代謝紊亂、內(nèi)分泌細胞因子增多等有直接的關(guān)系。自由基數(shù)量的增多，造成心肌細胞組織脂質(zhì)體數(shù)量的大增，改變了心肌細胞膜的結(jié)構(gòu)，導致膜的性質(zhì)發(fā)生異常，對各種物質(zhì)的通透性增大，大量因子釋放到血清中。超氧化物歧化酶(SOD)是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)。SOD是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)，如果SOD水平下降到一定程度時意味著衰老與死亡的直觀指標。它可對抗與阻斷因氧自由基對細胞造成的損害，并及時修復受損細胞，復原因自由基造成的對細胞傷害。自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)，氧化終產(chǎn)物為丙二醛（MDA），會引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細胞毒性。機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此形成脂質(zhì)過氧化物。CRP是一種環(huán)狀五聚體蛋白具有顯著的耐熱及抗蛋白酶降解的能力，能與補體系統(tǒng)的相互作用使其表現(xiàn)出很多生物活性，包括宿主對感染的防御反應(yīng)、對炎性反應(yīng)的吞噬作用和調(diào)節(jié)作用等。與受損細胞、凋亡細胞及核抗原的結(jié)合，使其在自身免疫病方面也起著重要作用。B型尿鈉肽又稱腦尿鈉肽（BNP），是由心肌細胞合成的具有生物學活性的天然激素，主要在心室表達，同時也存在于腦組織中。當左心室功能不全時，由于心肌擴張而快速合成釋放入血，有助于調(diào)節(jié)心臟功能。本文研究表明，與模型對照組相比，失笑散顆粒小劑量組能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值降低，P＞0.05，而中劑量組及高劑量組、陽性對照組均能使心肌損傷大鼠的心電圖J值下降值明顯明顯降低，這提示，失笑散顆粒劑量組對心電圖ST值變化有明顯影響，具有改善心肌缺血的作用，P＜0.05。與空白對照組比較，模型對照組的大鼠血清生化標志物指標含量均有差異，而與模型組比較，失笑散顆粒劑量組均能明顯降低這些指標的含量，說明失笑散顆粒劑量組對異丙腎上腺素所致的心肌缺血后血清生化標志物含量變化有所控制，增強細胞膜的穩(wěn)定性，對心肌細胞起到保護作用，減少心肌損傷標志物的滲出，而且控制程度與一定的劑量有直接的關(guān)聯(lián)。

綜上所述，失笑散顆粒對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血有明顯的保護作用，對自由基有較強的清除作用，減少自由基對心肌細胞膜的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，能有效地減輕心肌損傷，值得進一步研究與應(yīng)用。

[1] 祝光禮,周凡,陳鐵龍.黃芪失笑散抗心肌缺血的實驗研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2007,25(11) :2232-2234.

[2] 陳瑩,周波,路秀云,等.全真一氣湯合并失笑散治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛的臨床觀察[J].中醫(yī)藥學報,2012,40(1): 108-110.

[3] 潘志偉,王秋娟,楊涓,等.淫羊藿苷對異丙腎上腺素致大鼠急性心肌缺血的影響[J].中國藥理學通報,2007,23(5):622-625.

[4] 任雪梅,曹志然.加味失笑散治療冠心病心絞痛的臨床應(yīng)用及作用機理研究進展[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,5(12): 1084-1085.

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1671-8194（2013）17-0087-02