慈菇消脂膠囊對(duì)非酒精性脂肪肝病大鼠肝組織P4502E1及血脂代謝的影響

徐 超楊少軍*

（1 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730000）

慈菇消脂膠囊對(duì)非酒精性脂肪肝病大鼠肝組織P4502E1及血脂代謝的影響

徐 超1楊少軍2*

（1 甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2 甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化科，甘肅 蘭州 730000）

目的探討慈菇消脂膠囊治療非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的作用機(jī)制。方法雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分成6組，正常組喂以標(biāo)準(zhǔn)飼料；其余組給予高脂飼料喂養(yǎng)12周復(fù)制NAFLD大鼠模型。對(duì)照組喂以吡格列酮0.135mg/kg，慈菇消脂膠囊各組分別喂以0.162g，0.324g，和0.648g/kg。6周后，觀察慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血清鐵蛋白（SF）水平，和細(xì)胞色素P4502E1（CYP2E1）表達(dá)的影響。結(jié)果與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組，TC，TG，SF均不同程度的降低（P＜0.05），肝組織P4502E1的表達(dá)與肝細(xì)胞脂肪變性程度一致。與吡格列酮組相比，慈菇消脂膠囊高劑量組大鼠肝組織P4502E1的表達(dá)顯著降低（P＜0.05），同時(shí)TC，TG，SF指標(biāo)也恢復(fù)接近正常水平。結(jié)論慈菇消脂膠囊可明顯抑制NAFLD大鼠肝組織P4502E1的表達(dá)，改善血脂代謝異常，從而發(fā)揮治療NAFLD的作用。

慈菇消脂膠囊；非酒精性脂肪肝病；肝組織P4502E1；血脂

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征[1]，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“二次打擊”學(xué)說(shuō)認(rèn)為，以細(xì)胞色素P4502E1（CYP2E1）為中心形成的氧自由基、脂質(zhì)過(guò)氧化，導(dǎo)致肝實(shí)質(zhì)損傷是NAFLD的重要發(fā)病機(jī)制[2]。據(jù)此，我們運(yùn)用慈菇消脂膠囊對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)的NAFLD大鼠進(jìn)行干預(yù)，觀察其對(duì)大鼠肝組織P4502E1及血脂的影響作用，以探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取同批成年雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量約（200±20）g，大鼠（SPF級(jí)）均由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證為：SCXK2004-006。

1.2 藥物與試劑

慈菇消脂膠囊（主要以山慈菇、澤瀉、山楂、決明子等十五味中藥組成）由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心提供（0.5g×60粒，批號(hào)：120412）。吡格列酮片：15mg/片，成都恒瑞制藥有限公司（批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20040631，批號(hào)：20120402）。相關(guān)生化指標(biāo)測(cè)定試劑盒均購(gòu)自南京建成生物研究所，兔抗大鼠肝P4502E1抗體，SP免疫組化染色試劑盒（SPkit）均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 復(fù)制模型與分組處理

取60只SD雄性大鼠，先以基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，然后將所有大鼠按體質(zhì)量進(jìn)行編號(hào)，使用隨機(jī)數(shù)字表法抽取10只空白組，繼續(xù)用普通飼料喂養(yǎng)；剩余50只都喂以高脂飼料（2%膽固醇；5%蔗糖；18%豬油；2%蛋黃粉；71.3%基礎(chǔ)飼料等）開(kāi)始造模。自由飲水。至第8周末，隨機(jī)處死兩只造模大鼠，剖肝證實(shí)模型復(fù)制成功。造模成功后，空白組繼續(xù)以普通飼料喂養(yǎng)，高脂飼料喂養(yǎng)的48只大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)分成模型組、吡格列酮組、慈菇消脂丸組（包括高劑量、中劑量、低劑量組）5組，繼續(xù)喂以高脂飼料4周，造模時(shí)間共12周。根據(jù)人與大鼠體表面積比，慈菇消脂膠囊組按等效劑量的12倍，6倍，3倍（分別喂以0.162g，0.324g和0.648g/kg。）灌胃給藥。吡格列酮組喂以0.135mg/kg?？瞻捉M每日灌胃等劑量的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)期間觀察體質(zhì)量、飲食及尿量。

1.4 樣本處理

灌胃6周后處死所有大鼠，取血剖肝。分離血清，測(cè)定血清TC，TG，SF含量。稱(chēng)取肝臟濕質(zhì)量，計(jì)算肝指數(shù)（肝指數(shù)＝肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色備用。按照試劑盒要求采取免疫組化法（SP）測(cè)定肝組織P4502E1含量。

1.5 結(jié)果判定

采用BH-2型顯微鏡（美國(guó)，Nikon）拍攝，在高倍鏡(×40)下，每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，圖像采用彩色病理圖文分析系統(tǒng)（成都泰盟，BI-2000型）分析，表達(dá)強(qiáng)度用平均吸光度值（A）表示。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用（χ—±s）表示。顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)的影響

與治療前相比，慈菇消脂膠囊高劑量組治療后大鼠體質(zhì)量降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組治療后體質(zhì)量均增高。與對(duì)照組相比，模型組肝指數(shù)增高。與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組肝指數(shù)均降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠體質(zhì)量和肝指數(shù)的影響[（χ—±s），n=10]

2.2 慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠血脂的影響

模型組血清TC、TG、SF水平明顯高于正常組(P＜0.05)，與模型組相比，慈菇消脂膠囊組及吡格列酮組均有不同程度的降低（P＜0.05）。慈菇消脂膠囊高劑量組作用顯著（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 肝組織P4502E1蛋白的表達(dá)

空白組可見(jiàn)少量P4502E1蛋白表達(dá)；模型組P4502E1蛋白呈高表達(dá)；慈菇高劑量組P4502E1蛋白表達(dá)與正常組相似，在極少數(shù)脂肪滴周?chē)噬倭勘磉_(dá)。慈菇中、低劑量組P4502E1的表達(dá)與肝細(xì)胞脂肪變性程度一致；與吡格列酮組相比，慈菇高劑量組P4502E1的表達(dá)顯著降低（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表2 慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠血清TG，TC，SF的影響[（χ—±s），n=10]

表3 慈菇消脂膠囊對(duì)NAFLD大鼠肝組織P4502E1表達(dá)的影響

3 討 論

近年來(lái)，隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，NAFLD的發(fā)病率不斷攀高，發(fā)病年齡也逐漸趨向低齡化，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康。目前，西醫(yī)在治療上尚缺乏理想藥物，主要是他汀類(lèi)降脂藥，但副作用較多。而中藥防治該病具有一定優(yōu)勢(shì)[3]。慈菇消脂膠囊為我科研制的院內(nèi)制劑，多年來(lái)運(yùn)用于臨床取得了較滿意的療效[4]。

慈菇消脂膠囊主要是以山慈菇為君藥，佐以決明子、山楂、澤瀉、丹參、土鱉蟲(chóng)等15味中藥配伍而成，方中以山慈菇為君藥，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效，民間用其以化脂肪，已使用良久[5]。澤瀉、山楂以化濁消脂，丹參、土鱉蟲(chóng)以化瘀通絡(luò)，決明子清肝化濁。現(xiàn)代藥理研究表明[6]，丹參能有效抑制和減輕肝細(xì)胞脂肪變性、壞死以及炎癥反應(yīng)，并可改善肝臟血液循環(huán)等作用，澤瀉能降低對(duì)外源性TG、TC的吸收和抑制肝內(nèi)TG的合成，決明子可使HDL增高、TC降低，預(yù)防脂肪沉積。全方共奏化痰解毒、消降濁脂、祛瘀散結(jié)的功效.

細(xì)胞色素P450酶是肝臟主要代謝酶，主要存在于肝細(xì)胞微粒體中。在正常大鼠肝組織中，表達(dá)是很少的。研究發(fā)現(xiàn)[7,8]，在NAFLD中P4502E1高水平表達(dá)，并參與NAFLD的形成，在非酒精性脂肪肝的發(fā)病中起到重要作用。脂肪性肝病發(fā)病過(guò)程中P4502E1的誘導(dǎo)表達(dá)可加重肝內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，并參與肝細(xì)胞的氧應(yīng)激、脂質(zhì)過(guò)氧化、細(xì)胞凋亡、炎性因子形成及星狀細(xì)胞激活等過(guò)程。通過(guò)抑制肝P4502E1表達(dá)，從而中斷肝細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從而達(dá)到治療NAFLD的目的。

本研究結(jié)果顯示慈菇消脂膠囊能顯著降低NAFLD大鼠肝細(xì)胞P4502E1的表達(dá)，高劑量組效果優(yōu)于吡格列酮組（P＜0.05）。并能下調(diào)TC，TG，SF水平，提示其機(jī)制是通過(guò)減少P4502E1的表達(dá)，阻止脂質(zhì)過(guò)氧化物的產(chǎn)生，阻止肝細(xì)胞變性和肝臟損傷，提高肝臟分解TG，TC，SF的能力，恢復(fù)肝內(nèi)正常的脂質(zhì)代謝。從而發(fā)揮治療NAFLD的作用。

[1] 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組.非酒精性肝病診療指南(2010年修訂版)[J].中華肝臟病雜志,2010,18(3):163-166.

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1671-8194（2013）12-0076-03

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