比格犬全身動脈鑄型標本的制作方法

李長征 鄭和平

1（福建中醫(yī)藥大學 中西醫(yī)結(jié)合學院，福州350122）

2（南京軍區(qū)福州總醫(yī)院 比較醫(yī)學科，福州350025）

比格犬（Beagle），是獵犬種較小的一種。在以犬為實驗動物的研究成果中，只有應用比格犬才能被國際公認。比格犬由于體形較小，易于馴服和抓捕，外型可愛，性格開朗，動作惹人喜愛，日漸受到人們的歡迎而成為家庭犬。鑄型標本制作法是指為了研究管腔臟器，特別是血管系統(tǒng)復雜的立體構(gòu)筑，往管腔內(nèi)注入某種物質(zhì)，待硬化后將組織腐蝕清除，僅留下填充物的方法［1］。為了更能清楚的顯示比格犬全身血管的立體構(gòu)造，本文用過氯乙烯填充劑制作了比格犬全身動脈鑄型標本，為科研實驗人員和獸醫(yī)提供更為直觀的比格犬血管解剖學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

比格犬1條，雌性，體質(zhì)量12 kg，由南京軍區(qū)福州總醫(yī)院比較醫(yī)學科提供。

1.2 試劑和器材

過氯乙烯、乙酸乙酯、戊巴比妥鈉、硫化鈉、肝素鈉、濃鹽酸、生理鹽水；止血鉗、手術(shù)刀、手術(shù)剪、鑷子、腐蝕槽、20ml塑料注射器、玻璃插管等。

1.3 實驗方法

采用溶劑揮發(fā)凝固成型法，其原理和填充劑的配制及注意事項參見文獻［1］，文中解剖學名詞按文獻［2］。

1.3.1 比格犬的麻醉、處死和脫毛 將比格犬固定在手術(shù)臺上，按50 mg／kg經(jīng)腹腔注射體積分數(shù)3%戊巴比妥鈉，待比格犬進入麻醉狀態(tài)后，切開左側(cè)頸部皮膚，探查左頸外靜脈及頸總動脈，用注射器于左頸外靜脈向心方向緩慢注射肝素鈉12 500U（用氯化鈉注射液稀釋至5ml），5 min后縱行切開左頸總動脈放血致死，用棉球蘸取8%硫化鈉溶液［3］涂抹比格犬全身，10 min后用水沖洗脫落的皮毛，用紗布擦干。

1.3.2 插管與灌注 在左頸總動脈、右股動脈離心和向心方向分別插管，并用縫合線結(jié)扎固定，用剪刀剪開左頸外靜脈；用止血鉗夾住右股動脈向心方向插管，于左頸總動脈向心方向插管處用生理鹽水快速沖洗，直至左頸外靜脈流出清亮液體后，停止沖洗血管。將比格犬放置在一長、寬尺寸比其稍大有5cm高的邊欄并打孔的有機玻璃板上，在有機玻璃板的兩頭各穿入一條耐腐蝕的尼龍繩，以方便搬動標本。往左頸總動脈和右股動脈向心、離心方向插管分別灌注紅色20%過氯乙烯填充劑80ml、30ml、50ml、20ml，首次總灌注量為180ml左右，首次灌注后每4～6h進行一次補注，共補注4～5次，補注用25%過氯乙烯填充劑，補注的量逐漸遞減，總共補注150～200ml。

1.3.3 腐蝕與沖洗 標本補注后，將標本在20℃左右環(huán)境下放置5 d，待過氯乙烯填充劑充分硬固后，將標本連同有機玻璃板放入盛有濃鹽酸的腐蝕槽中腐蝕，1周后，拿出用流水沖洗，待組織沖洗干凈后，放置于0.5%NaOH溶液中浸泡24 h，再用流水沖洗12h以上，取出晾干，將血管的斷口用濃度為25%過氯乙烯粘接起來。酌情進行疏密打枝等處理，封瓶保存。

2 結(jié)果

比格犬全身動脈鑄型外觀完整美觀，血管的整體性和連貫性好，立體感強，能充分顯示比格犬全身動脈的分支分布和走行途徑；各管道飽滿，粗細、疏密合理，色澤鮮艷。四肢動脈和肋間動脈、腰動脈被充分鑄型出來；心、肺、肝、腎、脾、腸管等血管被充分鑄型出來；耳朵、鼻子、唇部、眼瞼、尾巴輪廓被完整保留下來，其基本輪廓一目了然（圖1）。

圖1 比格犬全身動脈鑄型（側(cè)面觀）

3 討論

3.1 脫毛劑的選擇

毛發(fā)具有耐酸耐堿，常規(guī)的腐蝕劑難以將其完全腐蝕。若腐蝕前未行脫毛處理，標本腐蝕后，未完全腐蝕的毛發(fā)粘附在鑄型支上，難以沖洗，嚴重影響鑄型標本的質(zhì)量。犬全身脫毛方法有剪毛法、水燙脫毛法、剝皮法和硫化鈉脫毛法［3］。剪毛法費時，脫毛不徹底且易將皮膚剪破；燙水脫毛水溫不易控制，水溫過低無法脫毛，水溫過高容易造成皮膚燙傷；剝皮法造成表層血管破裂，不宜灌注；硫化鈉脫毛徹底，操作簡單，且不會對皮膚造成損傷；因此脫毛宜首選硫化鈉脫毛。

3.2 抗凝劑的使用

未經(jīng)抗凝處理的比格犬血在體外和死后較短時間內(nèi)就凝結(jié)成塊，灌注過氯乙烯時，易使凝塊堵塞中、小動脈，使過氯乙烯無法到達細小動脈，導致鑄型支缺失不完整，甚至失敗。因此，灌注前要對犬抗凝處理，具體做法是在未放血前，先從左頸外靜脈注射肝素鈉，使全身的血液具有抗凝作用，再縱行切開左頸總動脈放血致死，并于左頸總動脈插管處用生理鹽水快速沖洗，使犬血液不凝固始終保持液態(tài)，且能將血管內(nèi)殘留血液全部排出體外，保證了過氯乙烯能達到各細小動脈，使鑄型完整。

3.3 插管部位選擇

比格犬全身動脈鑄型標本的插管部位既可選擇大鼠全身動脈鑄型標本插管部位，即經(jīng)左心室至升主動脈基部插管［4］；也可選擇人體全身動脈鑄型標本多點插管，即經(jīng)雙側(cè)頸總動脈、股動脈雙向插管［5］。升主動脈基部插管容易，不易損傷其他血管，但心臟及肺臟血管鑄型缺失，此外，比格犬全身血管行程相對較長，單一的升主動脈插管過氯乙烯難以到達四肢末梢血管，四肢的血管鑄型很難完整成形，而內(nèi)臟血管鑄型則過于細密，觀察不清血管構(gòu)筑形式，且易破裂，影響鑄型的整體觀；雙側(cè)頸總動脈、股動脈多點雙向插管灌注，全身各部位的動脈灌注均較飽滿，血管顯示比較清楚均勻，整體外觀較完整，此法較適合人體解剖學姿勢的全身血管鑄型，比格犬全身動脈鑄型采用此法需仰臥位灌注，較難保持比格犬的正常解剖學姿勢，要保持比格犬的正常解剖學姿勢需側(cè)臥位，因此在保證比格犬正常的解剖學姿勢情況下，相對于人體全身血管行程，比格犬全身血管行程相對較短，在左頸總動脈和右股動脈雙向插管也取得了較好的比格犬全身動脈鑄型標本。

3.4 填充劑的選擇

制作鑄型標本常用的填充劑有過氯乙烯和自凝牙托材料，過氯乙烯灌注流動性較好，易達細微血管；鑄型支支撐性好，具有較好的韌性，不易折斷；配置簡單，易操作；不足之處是收縮率高，需要補注，較大血管的鑄型不夠飽滿。自凝牙托材料一次完成灌注，收縮率低，不需補注；外形飽滿、美觀；缺點是鑄型支較脆、韌性較差，不易后期修剪。比格犬的全身血管行程較長，管道較細，因此宜選用流動性和韌性較好的過氯乙烯灌注。若要使比格犬主動脈鑄型更加飽滿，可于過氯乙烯補注4～5次后，用自凝牙托材料在頸總動脈和股動脈向心方向插管進行大干血管補注。

3.5 灌注量及灌注壓力的控制

灌注量太多，壓力太大，容易使鑄型較密，觀察不清血管構(gòu)筑形式，且易造成管壁破裂，導致填充劑滲入組織間隙，影響整個鑄型的質(zhì)量。左頸總動脈、右股動脈向心和離心方向總灌注的量分別為160ml、60ml、100ml和40ml。

［1］李忠華，王興海.解剖學技術(shù)［M］.第二版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997.123－183.

［2］安鐵洙，唐建華，韋旭斌.犬解剖學 ［M］.長春：吉林科學技術(shù)出版社，2003.

［3］施新猷.現(xiàn)代醫(yī)學實驗動物學［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2000.304－306.

［4］李長征，鄭敏麟，張文光，等.大鼠全身動脈鑄型標本的制作［J］.實驗動物與比較醫(yī)學，2009，29（3）：196－197.

［5］洪輝文，吳坤成，李澤宇，等.全身動脈鑄型制作方法的改進［J］.中國臨床解剖學雜志，2007，25（4）：478－479.