六味地黃丸中丹皮酚含量測定實驗研究

宋 飛

（廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，廣西 柳州 545005）

六味地黃丸中丹皮酚含量測定實驗研究

宋 飛

（廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，廣西 柳州 545005）

六味地黃丸是最常用的中成藥之一，具有滋陰利水之功，尤對陰虛濕停證更為適宜。中醫(yī)上稱六味為酸苦甘辛咸淡，六味之名以此六味地黃丸中山茱萸含鉻量最高，通過對此丸微量元素測定，說明對動脈粥樣硬化和糖尿病有預(yù)防作用。六味地黃丸能拮抗醋酸氫化可的松腎陽虛模型引起的脾臟重量減輕，似與中醫(yī)“陽化氣，陰成形”理論相關(guān)。江揚聰研究證明六味地黃丸能控制血糖水平在正常范圍內(nèi)，從而使臨床癥狀明顯改善。

六味地黃丸；丹皮酚含量

1 概 論

1.1 理化性質(zhì)

丹皮酚為白色或微黃色有光澤的針狀結(jié)晶，無色針狀結(jié)晶（乙醇），熔點49～51℃，氣味特殊，味微辣，易溶于乙醇和甲醇中，溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳中，稍溶于水，在熱水中溶解，不溶于冷水，能隨水蒸汽揮發(fā)。丹皮酚為常用中藥牡丹皮、徐長卿、芍藥等的主要揮發(fā)性成分之一，具有明顯的降壓、鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛等藥理作用。由于醋酸等因素導(dǎo)致的疼痛癥狀具有非常好的療效。由蛋清、甲醛等毒素導(dǎo)致的炎癥都有著非常好的抑制效果。對由于傷寒和疫苗導(dǎo)致的體溫過高有著非常好的清熱解毒的效果。日常生活中，它可以減少我們身體中O2-自由基的增加，對我們的皮膚有著增白的效果，減少皮膚色素的沉積增加皮膚彈性。不僅如此，在我們刷牙時如果加入少量丹皮酚有著對我們的牙齦疼痛都有著非常好的療效。

表1 回收率試驗結(jié)果

1.2 檢測方法比較

①可以采用HPLC定量的方法進行丹皮酚的含量測定，以甲醇-2%冰醋酸為流動項，固定值相用HypersilODS柱，檢測波長為276奈米。②可以運用采用2005版藥典規(guī)定方法對丹皮酚含量進行了比較檢測。③利用毛細管氣相色譜法來進行測定，采用如下色譜條件：色譜柱，熔融彈性毛細管柱，涂布SE-300.26μm，N2流速60mL/min，H2流速50mL/min，空氣流速500mL/min，柱溫：180℃，汽化器、檢測器：320℃。以內(nèi)標法計算含量（以正十六烷為內(nèi)標）。

1.3 論述

采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)手段對以前的測定方案改革，不斷提高測定含量的技術(shù)的思路是正確的。人類既要尊重傳統(tǒng)，繼承傳統(tǒng)，更要有所前進，有所創(chuàng)新。在制劑質(zhì)量的控制方面的研究重點主要放在熊果酸和丹皮酚的測定方法的研究上，這是否恰當(dāng)。尚需研究如何才能真正控制中成藥的質(zhì)量是一個復(fù)雜的問題，因為究竟該方的有效成分是什么還不甚清楚。在此情況下如能以生物效應(yīng)的強弱作為質(zhì)量控制的指標可能更客觀些。

2 實驗部分

2.1 實驗器材和條件[1]

2.1.1 實驗儀器

儀器：日本島津CS910雙波長薄層掃描儀，化學(xué)試劑均為分析純；硅膠：薄層層折用硅膠G（青島海洋化工）；丹皮酚對照品：中國藥品生物制品檢定所；六味地黃丸樣品：馬鞍山神鹿科瑞藥業(yè)有限公司、九芝堂股份有限公司。

2.1.2 薄層掃描條件

掃描方式：反射法鋸齒掃描；波長：λS=274nm，λR=365nm；掃描速度：20mm/min；狹縫3mm。

2.2 層析條件

薄層板：硅膠G薄層板20cm×20cm×0.4cm，105℃，活化30min備用；展開劑：環(huán)乙烷：氯仿：無水乙醇（7∶3∶1）；斑點觀察：置紫外燈下（λ=254nm）檢識定位。

3 實驗步驟[2]

3.1 標準曲線

精密稱定丹皮酚對照品50mg，置50mL容量瓶中，無水乙醇溶解并稀釋至刻度，使對照品溶液濃度為lmg/mL。精密吸取丹皮酚對照品溶液1、2、3、4、5μL點樣于同一硅膠板上，按層析條件展開，置紫外燈下（λ=254nm）檢識定位，掃描測得峰面積積分值，。線性方程為：Y=1.555.5X+4743，相關(guān)系數(shù)為0.9899。

3.2 精密度試驗

準確吸取標準品溶液5μL，在同一薄層板上點5個相同量的點，依法測定各斑點的斑面積積分值，計算精密度。結(jié)果下列數(shù)據(jù)。計算RSD=2.8%（n=5），說明本方法精密度較好。其對照品的測定值分別為：17234，16554，18888，16908，15048，16926.7±481.5，2.8 RSD（%）。

3.3 穩(wěn)定性試驗

我們隊標準品的斑點進行穩(wěn)定性試驗，通過技術(shù)測量峰面積，每過20民、測量一次，這樣連續(xù)進行五次測量。結(jié)果得出如下列數(shù)據(jù)所述，其峰面積基本是穩(wěn)定的。丹皮酚標準品穩(wěn)定性實驗結(jié)果，第一到第五對照品的測定值分別是：16671，16908，16710，16799，16374，16692.3±209.8，1.264 RSD（%）。

3.4 樣品含量測定[3]

稱取六味地黃丸20g，研碎，置圓底燒瓶中，加無水乙醇80mL，然后提出3h，過濾液，然后量瓶定容100mL。精確的分別對樣品進行吸取，10μL及丹皮酚對照品5μL，交叉點于同一硅膠薄板上。按層折條件展開，掃描測得峰面積積分值，用外標法計算丹皮酚含量。

3.5 回收率試驗

采用加樣回收法。稱取已知含量的廠家1六味地黃丸樣品5份約20g，分別制作出相關(guān)對照項15mg，然后根據(jù)樣品含量的標準來制作備用溶液，最后進行測量，得出的結(jié)果是丹皮酚的添加回收率為93.12%，RSD為3.44%（n=5）。見表1。

4 討 論

4.1 實驗誤差分析

薄層掃描法（TLCS）系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中有紫外或可見吸收的斑點或經(jīng)照射能激發(fā)產(chǎn)生熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分值用于藥品的質(zhì)量檢查的方法。其掃描測量結(jié)構(gòu)的誤差主要來自點量、展開、掃描中的斑點定位和掃描過程本身。在這次實驗中，丹皮酚對照品標準曲線中相關(guān)系數(shù)值（R）為0.9899，相對較低。分析實驗過程，可能由以下幾個因素導(dǎo)致：①薄層點樣時，取樣體積不夠準確。②薄層板上點樣的時候沒有使樣品吹干而接著點樣，導(dǎo)致點樣斑點過大，較大的影響了實驗[4]。③層析缸中展開劑飽和時間較短，影響展開效果。④薄層板在展開劑中展開的時，有較嚴重的邊緣效應(yīng)，從而使得展開的各個斑點沒能很好的成一直線，這是掃描過程中會產(chǎn)生較大誤差，使得實驗結(jié)果受到影響。一般在薄層色譜中，薄層板兩邊展開劑跑得比較快，使得展開前沿形成一道弧線，稱為邊緣效應(yīng)。邊緣效應(yīng)的產(chǎn)生是由于溶劑的揮發(fā)造成的，展開劑一般是由幾個有機溶劑混合而成的，而在薄層板上一般是邊緣上的展開劑較容易揮發(fā)，如果這幾個有機溶劑的揮發(fā)性能差異比較大，那么就會造成薄層板上邊緣和中間展開劑比例的差異而產(chǎn)生展開速度不一致的現(xiàn)象。為了避免邊緣效應(yīng)，就要做到：①保持展缸內(nèi)不的氣體飽和；②點樣的時候，避免點在邊緣，從而減小邊緣效應(yīng)[5]。

4.2 外標法測定

本實驗采用了外標法測定丹皮酚的含量，外標法是色譜分析中的一種定量方法，它不是把標準物質(zhì)加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。外標物與被測組分同為一種物質(zhì)但要求它有一定的純度，分析時外標物的濃度應(yīng)與被測物濃度相接近，以利于定量分析的準確性[6]。

5 總 結(jié)

通過上文的研究和實驗，我們可以看到利用薄層色譜掃描法來進行測定丹皮酚在六味地黃丸中的含量是十分簡便的，靈敏度相對也比較高，這一方法也同樣可以運用在牡丹皮等治劑中的測定。

[1]崔連有,劉有娥.六味地黃丸利水功效初探[J].時珍國醫(yī)國藥, 2000,11(3):245.

[2]國家藥局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1998:1246.

[3]李順成,錢瑞琴,范維崢,等.六味地黃湯及杞菊地黃湯對老年小鼠免疫衰老的調(diào)整作用[J].中成藥,1990,12(10):28～29.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002:358.

[5]李萍,石曉宏,王風(fēng)連.六味地黃丸和地黃的免疫藥理研究[J].中國免疫學(xué)雜志,1987,3(5):296-298.

[6]劉敘儀,王耐勤,孔家軍,等.六味地黃丸或金匱腎氣丸輔助治療小細胞肺癌的療效的觀察[J].中西醫(yī)結(jié)合雜志,1990,10(12):720-722.

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