桑菊清解湯對慢性吸煙大鼠氣道炎癥的影響

劉 茵 何雪梅 盧育明 陳少藩

（中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528400）

桑菊清解湯對慢性吸煙大鼠氣道炎癥的影響

劉 茵 何雪梅 盧育明 陳少藩

（中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528400）

目的 探究桑菊清解湯對慢性吸煙大鼠氣道炎癥的影響。方法 將慢性吸煙 Wistar 大鼠隨機(jī)分成：①吸煙對照組（吸煙組）。② N-乙酰半胱氨酸組（NAC 組）。③低劑量桑菊清解湯組（低劑量組）。④高劑量桑菊清解湯（高劑量組）。⑤空白對照組（對照組）。測定吸煙組、NAC 組、低劑量組、高劑量組吸煙第 60 天的肺泡灌洗液（BALF）中白細(xì)胞計數(shù)和分類，同時測定 BALF 中白細(xì)胞介素 -8（IL-8）含量。結(jié)果 慢性吸煙大鼠第 60 天 BALF 中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)及 IL-8 水平均顯著高于空白組；高、低劑量組與 NAC 組 BALF 中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和 IL-8 水平均顯著降低。高、低劑量組與 NAC 組比較，P ＜ 0.05，有顯著性差異，高、低劑量組比較，P＜ 0.05，有顯著性差異。結(jié)論 桑菊清解湯對慢性吸煙大鼠肺損傷的保護(hù)作用，可能與降低氣道白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和 IL-8 水平相關(guān)。且桑菊清解湯控制氣道炎癥的水平與劑量相關(guān)。

桑菊清解湯；N-乙酰半胱氨酸；白細(xì)胞介素 -8；慢性吸煙；氣道炎癥

吸煙嚴(yán)重威脅人類的健康安全，導(dǎo)致慢性阻塞性肺?。–OPD）的發(fā)生率增高。吸煙引起肺泡巨噬細(xì)胞在肺內(nèi)聚集、激活，釋放出催化因子，如白細(xì)胞介素-8（IL-8）及白三烯B4（LTB4）。其中IL-8是中性粒細(xì)胞重要的催化因子，促進(jìn)COPD患者氣道炎性反應(yīng)。本實驗通過建立慢性吸煙誘發(fā)的大鼠氣道炎癥模型，探討我院制劑桑菊清解湯對于慢性大鼠氣道炎癥影響，為該藥物治療COPD提供臨床依據(jù)。

1 實驗與方法

1.1 材料

香煙（椰樹牌）,IL-8ELISA試劑盒。

1.2 實驗分組及給藥方法

50只SD大鼠，體質(zhì)量140～180g，隨機(jī)分成5組，每組10只。除空白對照組外，各組實驗動物均被動吸煙60d。

桑菊清解湯根據(jù)成人臨床用藥量的6倍，換算為大鼠高劑量藥物組，即上述濃縮藥液加蒸餾水稀釋成含生藥1.2g/mL的藥液；低劑量藥物組：給藥量換算為成人臨床用藥量的3倍，即以蒸餾水倍比稀釋成含生藥0.6g/mL的藥液取SD雄性大鼠50只，實驗前適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后開始實驗，按體質(zhì)量隨機(jī)分為空白對照組（對照組）、吸煙對照組（吸煙組）、NAC組及桑菊清解湯高、低劑量組，共5組，每組10只。正常對照組、模型組灌胃蒸餾水；桑菊清解湯高、低劑量組灌胃相應(yīng)劑量桑菊清解湯，均按1mL/100g體質(zhì)量給藥。陽性藥物組將NAC以蒸餾水溶解，配制成濃度為0.2g/mL的溶液，按200mg/kg體質(zhì)量灌胃給藥。各組動物均每天空腹灌胃一次后進(jìn)行被動吸煙造模，連續(xù)60d。

1.3 實驗方法

置被動吸煙各組大鼠分別置于本院自制的70cm×50cm×50cm的有機(jī)玻璃吸煙箱內(nèi)吸煙，每次同時點燃3支香煙，每天2次，放入箱內(nèi)自然燃燒，至香煙燃燒完全后，持續(xù)約10min，間隔1h后，第2次吸煙亦如上述方法，再點燃3支香煙。其中，陽性藥物組、桑菊清解湯高、低劑量組動物每天早晨被動吸煙前分別灌胃給予NAC（200mg/kg）、桑菊清解湯高劑量、桑菊清解湯低劑量；空白對照組動物只灌胃等劑量生理鹽水，不給予喂藥和被動吸煙處理，其他飼養(yǎng)條件與其余各組等同。

1.4 指標(biāo)檢測

大鼠用3%戊巴比妥鈉（30mg/kg）腹腔麻醉后，腹主動脈穿刺采血，然后迅速用器械分離氣管，用10mL生理鹽水進(jìn)行在體肺泡灌洗，緩慢的經(jīng)氣道把液體注入肺臟，再回抽液體，如此反復(fù)3次，最終回收量約8mL的BALF。過濾、離心，取上清液及細(xì)胞沉淀物分裝，保存于-70℃冰箱中待測。

1.5 評價桑菊清解湯對減輕氣道炎性反應(yīng)的作用

①通過IL-8測定；②沉淀的細(xì)胞用白細(xì)胞計數(shù)板計算肺泡灌洗液（BALF）中白細(xì)胞總數(shù)，并將其涂片HE染色后進(jìn)行BALF細(xì)胞分類。

1.6 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理

計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ—±s）表示，t檢驗，SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計。

2 實驗結(jié)果

2.1 BALF中白細(xì)胞總數(shù)及分類

急慢性吸煙均能導(dǎo)致Wistar大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)增加，與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。桑菊清解湯高、低劑量組、NAC組與吸煙組比較，白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。說明桑菊清解湯與NAC均能減少炎癥細(xì)胞浸潤，并顯著降低BALF中白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)。桑菊清解湯高、低劑量組與NAC干預(yù)組比較，白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 BALF中IL-8水平的變化

實驗中，IL-8水平明顯高于對照組（P＜0.05），與吸煙組相比，桑菊清解湯和NAC對升高的IL-8水平有明顯下調(diào)作用（P＜0.05）。高劑量組和NAC組在下調(diào)IL-8水平方面有顯著性差異（P＜0.05）。低劑量組和NAC組在下調(diào)IL-8水平方面無顯著性差異（P＞0.05）。桑菊清解湯高劑量組與低劑量組在下調(diào)IL-8水平方面，高劑量組明顯優(yōu)于低劑量組，有顯著性差異（P＜0.05）。

說明桑菊清解湯能更好控制急慢性吸煙大鼠氣道炎癥。高劑量組與低劑量組比較，白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)明顯減少，IL-8水平有明顯下調(diào)，P＜0.05，有顯著性差異。見表1。

表1 吸煙、胃飼NAC及桑菊清解湯大鼠BALF中炎癥細(xì)胞的變化（χ—±s）×109/L

3 討 論

吸煙是慢性阻塞性肺病的重要致病因素。煙霧刺激呼吸道及肺內(nèi)的巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞；中性粒細(xì)胞在肺內(nèi)大量聚集活化，產(chǎn)生大量的彈性蛋白酶，不僅導(dǎo)致蛋白酶/抗蛋白酶失衡，引起肺組織的損傷而且可以導(dǎo)致氣道上皮細(xì)胞IL-8 mRNA的表達(dá)，引起IL-8的進(jìn)一步分泌。研究表明，吸煙者BALF的IL-8水平比不吸煙者高[1]。IL-8與中性粒細(xì)胞表面特異性受體結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞變形反應(yīng)、脫顆粒反應(yīng)及呼吸爆發(fā)反應(yīng)，釋放溶酶體，形成超氧化物，形成一種炎癥循環(huán)，破壞肺結(jié)構(gòu)。

我院制劑清解湯，其主要成分包括竹黃、甘草、桑白皮、蘆根、川貝、車前子、菊花，主要功效為清熱去痰，止咳，解毒。臨床療效理想，主要針對熱性咳嗽?，F(xiàn)代藥理研究表明竹黃多糖具有良好的抗氧化性能。甘草具有抗感染鎮(zhèn)咳祛痰作用[2]。桑白皮具有明顯的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗感染和平喘作用[3]。蘆根對β-溶血鏈球菌有抑制作用。川貝有鎮(zhèn)咳、祛痰作用。車前子能促進(jìn)呼吸道粘液分泌，稀釋痰液，故有祛痰作用，令對各種桿菌和葡萄球菌均有抑制作用。菊花對金黃色葡萄球菌、多種致病性桿菌及皮膚真菌均有一定抗菌作用。高濃度時，對流感病毒PR3和鉤端螺旋體也有抑制作用，有抗感染作用。

本實驗中慢性吸煙均能導(dǎo)致大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)增加、IL-8水平上調(diào)。桑菊清解湯高、低劑量組、NAC組與吸煙組比較，白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。說明桑菊清解湯能減輕吸煙導(dǎo)致氣管內(nèi)的炎性反應(yīng)產(chǎn)生的劇烈程度。桑菊清解湯和NAC對升高的IL-8水平有明顯下調(diào)作用（P＜0.05）。高劑量組和NAC組在下調(diào)IL-8水平方面有顯著性差異（P＜0.05）。低劑量組和NAC組在下調(diào)IL-8水平方面無顯著性差異（P＞0.05）。高劑量組與低劑量組在下調(diào)IL-8水平方面，高劑量組明顯優(yōu)于低劑量組，有顯著性差異（P＜0.05）。說明桑菊清解湯的干預(yù)通過減緩中性粒細(xì)胞在肺內(nèi)的聚集活化，抑制彈性蛋白酶的大量產(chǎn)生，進(jìn)一步減少IL-8分泌而具有間接抗感染作用。低劑量組與NAC組對比無差異性，高劑量組優(yōu)于NAC組。

綜上所述，桑菊清解湯對慢性吸煙大鼠肺損傷的保護(hù)作用，可能與降低氣道白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和IL-8水平相關(guān)。且桑菊清解湯控制氣道炎癥的水平與劑量相關(guān)。

[1]溫文川,馮冰虹,譚毓治,等.泰鎮(zhèn)咳浸膏的鎮(zhèn)咳、祛痰、抗炎和平喘作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報,2000,16(2):114.

[2]雷載權(quán).中藥學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1995.

[3]張昭原.袖珍中藥手冊[M].石家莊:河北科學(xué)技術(shù)出版社,1996.

Effects of Sangju Qingjie Decoction on Airway Inflammation of Chronic Smoking Rats

LIU Yin, HE Xue-mei, LU Yu-ming, CHEN Shao-fan
(Zhongshan Traditional Chinese Medicine Hospital, Zhongshan 528400, China)

ObjectiveTo find out the effects of Sangju Qingjie Decoction on airway inflammation of chronic smoking rats.MethodRandomly divide the Wistar rats into 5 groups, namely ①Smoking Control Group (Smoking Group), ②N-Acetyl Cysteine Group (NAC Group), ③Low Dose Sangju Qingjie Decoction Group (Low Dose Group), ④High Dose Sangju Qingjie Decoction Group (High Dose Group), ⑤Blank Control Group (Blank Group). After 60 days of smoking, the rats in Smoking Group, NAC Group, Low Dose Group and High Dose Group were given detection on the number and type of white cells in Broncho Alveolar Lavage Fluid (BALF) and the content of Interleukin-8.ResultThe numbers of white cells and neutrophile granulocyte, and the IL-8 level of all chronic smoking rats are significantly higher than those of Blank Group. The numbers of white cells and neutrophile granulocyte, and the IL-8 level of High Dose, Low Dose and NAC Group are significantly reduced. Comparing with the NAC Group, High Dose and Low Dose Group display a significant difference with P＜0.05 which can also be found between the High Dose Group and Low Dose Group.ConclusionThe result shows that the reason why Sangju Qingjie Decoction can protect the chronic smoking rats from chronic injury of lungs might rely on its effect of reducing the white cell and neutrophile granulocyte number and the IL-8 level. It also indicates that the effects of Sangju Qingjie Decoction on airway inflammation relate to the dose.

Sangju Qingjie Decoction; N-Acetyl Cysteine Group; Interleukin-8; Chronic Smoking; Airway Inflammation

R563

：B

：1671-8194（2013）04-0038-02