Runx3 和fascin在胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

饒 鵬，李貴春，許麗萍，周和成，劉軍成，彭光喜，何 芳，劉 新，劉智華，王志強(qiáng)

（鷹潭市人民醫(yī)院外一科，江西 鷹潭 335000）

胃癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率第二的常見惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅到人類的健康，在我國胃癌發(fā)病率居惡性腫瘤的首位［1］。 不同臨床分期的胃癌患者預(yù)后完全不同，TNMⅠ期胃癌手術(shù)后5 年生存率為95%，TNMⅡ期5 年生存率為70%，TNMⅢ期5 年生存率為31.9%，而TNMⅥ期5 年生存率僅為6.5%［2］。胃癌的發(fā)生與發(fā)展是多階段、多步驟的過程，主要包括原癌基因的激活、 抑癌基因的失活、DNA 損傷修復(fù)基因的突變及遺傳學(xué)的變化等［3］，涉及了細(xì)胞增殖、分化、凋亡多個環(huán)節(jié)。 Runx3 作為一種新發(fā)現(xiàn)的候選腫瘤抑制基因，它表達(dá)的失活與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。 在正常胃黏膜組織中Runx3 的陽性表達(dá)率＞90%。fascin 蛋白又稱為成束蛋白，正常情況下, fascin 蛋白在正常胃黏膜組織中基本不表達(dá)，而在一些惡性腫瘤組織中有陽性表達(dá)［4］。目前無研究Runx3 和Fascin 蛋白在胃癌細(xì)胞中表達(dá)的互相關(guān)系，由于兩蛋白存在于腫瘤細(xì)胞增殖及活動的過程中，希望通過本實(shí)驗(yàn)來研究Runx3 和fascin 蛋白在胃癌腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)與胃癌患者術(shù)后情況的關(guān)聯(lián)，有望為胃癌患者預(yù)后評估及化療效果提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料

選擇2005 年9 月到2008 年6 月鷹潭市人民醫(yī)院存檔病理組織標(biāo)本（經(jīng)胃癌根治術(shù)并證實(shí)為胃癌的石蠟標(biāo)本）150 例。 男84 例，女66 例，年齡35～83 歲，平均63.98 歲，均為胃癌根治手術(shù)切除患者，病理標(biāo)本由主治醫(yī)師以上病理醫(yī)生診斷。 其中腺癌114 例，黏液腺癌6 例，印戒細(xì)胞癌30 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的72 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的78 例；均未發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。 根據(jù)2010 年的UICC 的胃癌TNM 分期：TNMⅠ期66 例，TNMⅡ期54 例，TNMⅢ期30 例。術(shù)前均未行放化療，術(shù)后TNMⅠ期患者未化療，TNMⅡ期及TNMⅢ期患者術(shù)后行ECF 方案化療。 所有患者均為第1 次手術(shù)， 無其他上消化道相關(guān)性疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)本經(jīng)常規(guī)病理檢查，石蠟包埋，每例標(biāo)本蠟塊各取2 張4 μm 切片，分別做Runx3 及fascin 的免疫組織化學(xué)染色。 Runx3 及fascin 表達(dá)均位于細(xì)胞漿內(nèi)，Runx3 表達(dá)陽性染色為大小不一的黃色或棕黃色顆粒［5］。fascin 蛋白的陽性表達(dá)也呈棕黃色顆粒狀。 由病理科醫(yī)師對每一張切片進(jìn)行全面觀察，結(jié)果按染色強(qiáng)度及顯色細(xì)胞比例判定。

Runx3 蛋白陽性根據(jù)陽性細(xì)胞比評分×染色評分得出總分?jǐn)?shù)。陽性細(xì)胞在細(xì)胞總數(shù)的百分比＜10%為0 分；10%～25%為1 分；26%～50%為2 分；51%～75%為3 分；＞75%為4 分。 按染色判為：無著色為0分；淺黃色或淺褐色為1 分；棕黃色為2 分；棕褐色為3 分。 評分標(biāo)準(zhǔn)：總分＜3 分判為陰性；3～6 分為陽性；＞6 分判為強(qiáng)陽性。 本實(shí)驗(yàn)將陽性及強(qiáng)陽性記為陽性。

fascin 蛋白陽性表達(dá)根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)比例來分級，陽性細(xì)胞數(shù)5%～30%為弱陽性，超過30%為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS12.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用卡方檢驗(yàn)或校正卡方檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果

在TNM 分期Ⅰ期66 例標(biāo)本中fascin 陽性者15 例，Runx3 陽性者50 例；TNM 分期Ⅱ期的54 例標(biāo)本中fascin 陽性者21 例，Runx3 陽性者40 例；TNM 分期Ⅲ期的30 例標(biāo)本中fascin 陽性者24 例，Runx3 陽性者12 例。Fascin 及Runx3 的表達(dá)與患者年齡、性別、病理分型及TNM 分期的關(guān)系見表1。

2.2 生存率的結(jié)果

在TNM 分期Ⅰ期的15 例fascin 陽性標(biāo)本中5年生存率為80.0%（12/15），而陰性標(biāo)本的5 年生存率為94.11%（48/51）；Runx3 陽性的50 例標(biāo)本中5年生存率為96.00%（48/50）， 而陰性標(biāo)本的5 年生存率為75.0%（12/16）。TNM 分期Ⅱ期的21 例fascin陽性標(biāo)本中5 年生存率為57.1%（12/21），而陰性的5 年生存率為72.7%（24/33）；Runx3 陽性的40 例中5 年生存率為72.5%（29/40），而陰性的5 年生存率為50.0%（7/14）。 TNM 分期Ⅲ期的24 例fascin 陽性標(biāo)本中5 年生存率為25.0%（6/24）， 而陰性的5 年生存率50.0%（3/6）；Runx3 陽性的12 例中5 年生存率為50.0%（6/6），而陰性的5 年生存率為16.7%（3/18）。

表1 Fascin 及Runx3 的表達(dá)與患者年齡、性別、病理分型及TNM 分期的關(guān)系

3 討論

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)和回訪了解的生存率可以發(fā)現(xiàn)，Runx3 和fascin 的陽性表達(dá)和年齡及性別無明顯關(guān)系， 而和TNM 分期有明顯的關(guān)系 （P＜0.05）。 隨著TNM 分期的進(jìn)展兩者的異常表達(dá)率提高，說明兩者確實(shí)和胃癌的發(fā)生及發(fā)展過程有關(guān)。 Runx3 可能是與TGF-β 介導(dǎo)的細(xì)胞生長和凋亡調(diào)控有關(guān)的重要抑癌基因， 細(xì)胞生長的數(shù)量缺乏調(diào)控可能是由于Runx3 基因不發(fā)揮生理作用，缺乏Runx3 基因的胃黏膜上皮細(xì)胞凋亡受到抑制，增殖速度加快，黏膜厚度明顯增加，并且細(xì)胞對生長抑制因子TGF-β 表現(xiàn)出拮抗效應(yīng)，表明Runx3 基因是胃黏膜上皮細(xì)胞生長和增殖的調(diào)控者［7］。 在fascin 高表達(dá)的進(jìn)展期，可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞獲得的侵襲能力更強(qiáng)， 并可能更容易進(jìn)入鄰近的血管和淋巴管。有研究［8］報(bào)道，在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中， 腫瘤細(xì)胞可以獲得一定的移動性及侵襲性，可以通過基底膜從而擴(kuò)散到周圍鄰近組織；fascin 蛋白在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌標(biāo)本中表達(dá)較無轉(zhuǎn)移的胃癌標(biāo)本明顯增高， 腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移過程有三步假說：黏附、降解及移動，腫瘤細(xì)胞的移動性增強(qiáng)及腫瘤細(xì)胞的黏附性增強(qiáng)均可能是fascin蛋白的原因。 本研究發(fā)現(xiàn)，兩蛋白的異常表達(dá)和TNM 分期存在關(guān)聯(lián)，早期腫瘤患者的Runx3 的陽性表達(dá)高，而fascin 的陽性表達(dá)較低，隨著腫瘤的進(jìn)展Runx3 表達(dá)陰性率越高、而fascin 的表達(dá)的陽性率越高。 根據(jù)患者5 年生存率的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，同期中的Runx3 及fascin 異常表達(dá)的患者生存率較低，說明兩者異常表達(dá)的患者腫瘤生物活性及侵襲性較強(qiáng)，更容易出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移、腹腔種植及血運(yùn)轉(zhuǎn)移。所以根據(jù)以往對早期胃癌的局部切除或D1 根治手術(shù)是否能達(dá)到最好治療效果還有待研究，希望能根據(jù)不同免疫組織化學(xué)的腫瘤有針對性地選擇手術(shù)方式。 本研究對患者化療方案的選擇未進(jìn)行討論，進(jìn)一步需要研究不同化療方案對相同TNM 分期及相同Runx3 及fascin 表達(dá)的影響。

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