燙傷合劑的抗炎抑菌鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究

黃 瑩 李明艷

廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院藥劑科，廣西 柳州 545005

燙傷合劑的抗炎抑菌鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究

黃 瑩 李明艷

廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院藥劑科，廣西 柳州 545005

目的：探討本院制劑燙傷合劑的抗炎抑菌鎮(zhèn)痛活性作用。方法：采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀^察抗炎作用，采用小鼠熱板試驗(yàn)觀察鎮(zhèn)痛作用，采用紙片法測(cè)定體外抑菌試驗(yàn)。結(jié)果：燙傷合劑對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹有明顯抑制作用 （P＜0.05），提高熱板致痛小鼠的痛閾值 （P＜0.05），采用紙片擴(kuò)散法測(cè)定，燙傷合劑對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌均具有抑菌作用，抑菌圈＞7 mm。結(jié)論：燙傷合劑具有抗炎抑菌鎮(zhèn)痛作用

燙傷合劑；抗炎；抑菌；鎮(zhèn)痛

1 材料

1.1 材料LRH－150R－生化培養(yǎng)箱（廣東省醫(yī)療廠），SW－CJ－2FD型雙人單面凈化工作臺(tái)。燙傷合劑 （廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院本院制劑室，批號(hào)：20111023，紫花燒傷膏（山東華潤(rùn)制藥有限公司，批號(hào)20110506）昆明種小鼠 （柳州醫(yī)學(xué)專科學(xué)校試驗(yàn)動(dòng)物中心），體重 （20±2）g。

1.2 實(shí)驗(yàn)用菌株和培養(yǎng)基：金黃色葡萄球菌［CMCC（B）26003］，銅綠假單胞菌［CMCC（B）10104］，大腸埃希菌［CMCC（B）25921］，營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（北京奧康生物技術(shù)有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 抗炎作用［2］小鼠耳廓腫脹試驗(yàn)：取小鼠30只，♀♂各半，分為模型組 （生理鹽水）、燙傷合劑組和紫花燒傷膏對(duì)照組。分別將受試物均勻涂于小鼠右耳正反面，燙傷合劑給藥量為每次2m l，給藥面積約2cm2，左耳作為對(duì)照，給藥5次，每次間隔1h。模型組與紫花燒傷膏（0.032g／cm2）對(duì)照組也給藥5次。末次給藥后1.5h，各小組的右耳以溫水洗去殘余藥物，用干棉球擦凈，然后將0.05mL二甲苯涂于小鼠右耳廓前后兩面致炎，左耳不涂為對(duì)照，致炎30min處死小鼠，用直徑為6mm的打孔器在兩耳相同的部位取下左、右圓耳片，稱重，計(jì)算左、右耳片質(zhì)量差為腫脹度。腫脹抑制率 （%）＝（模型組腫脹度－給藥組腫脹度）／模型組腫脹度×100%。結(jié)果燙傷合劑組腫脹度較模型組明顯減少（P＜0.05），見表1

表1 燙傷合劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 （±s，n＝10）

表1 燙傷合劑對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 （±s，n＝10）

注：與模型組比較，aP＜0.05；與對(duì)照組比較，bP＜0.05。

10ml 12.4±1.1 5.2±0.6 7.2±0.8 －燙傷合劑組 10ml 9.0±1.2 5.3±0.8 3.7±1.2a 48.61紫花燒傷膏組 0.32g 9.2±1.1 5.1±0.7 4.1±1.5b／%模型組組別 劑量 右耳／mg 左耳／mg 腫脹度／mg 抑制率43.06

2.2 鎮(zhèn)痛作用［2］小鼠熱板法致痛試驗(yàn)：調(diào)恒溫水浴溫度至55～56℃，將鐵板置于恒溫水浴上預(yù)熱10min。對(duì)小鼠進(jìn)行痛閾值篩選 （以5－30S內(nèi)舔后足者為及格，跳躍者棄之不用），挑選表現(xiàn)合格的30只雌性小鼠，隨機(jī)均分成模型組（生理鹽水），燙傷合劑組和紫花燒傷膏組。分別將受試物涂于四足掌，模型組、燙傷合劑組給藥量為每次2ml，紫花燒傷膏組給藥量為每次0.032g*cm－2，給藥面積約1cm2，涂藥5次，每次間隔均為30min。各組動(dòng)物末次給藥后30、75、120min分別測(cè)定一次痛閾值，如痛閾值超過(guò)60s，則按60s計(jì)。結(jié)果表明，燙傷合劑組動(dòng)物的痛閾高于模型組，尤其是用藥75min時(shí)兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2

表2 燙傷合劑對(duì)小鼠熱板試驗(yàn)的影響 （±s，n＝10）

表2 燙傷合劑對(duì)小鼠熱板試驗(yàn)的影響 （±s，n＝10）

注：與模型組比較，aP＜0.05。

10ml 16.2±1.3 16.8±1.1 16.3±1.7 17.1±1.9燙傷合劑組 10ml 17.3±1.4 27.5±1.5 33.8±3.8a 31.8±4.8紫花燒傷膏組30min 75min 120min模型組組別 劑量 給藥前痛閾值0.16g 14.1±1.4 21.5±2.4 25.9±3.7 23.8±3.5

2.3 抑菌作用確定［3－4］濾紙片的制備：取無(wú)菌并干燥的濾紙片，制成6mm的小圓紙片，投入燙傷合劑浸泡2小時(shí)，然后將濾紙片平放于清潔的無(wú)菌平皿內(nèi)，開蓋置恒溫箱（37℃）中烤干。每4片 （塊）一組。陰性對(duì)照樣片的制備：取無(wú)菌干燥濾紙片，每片滴加無(wú)菌蒸餾水20μl，干燥后備用。金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌三種試驗(yàn)菌的接種：用無(wú)菌棉拭子蘸取濃度為5×105cfu／m l～5×106cfu／ml試驗(yàn)菌懸液，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿，置室溫干燥5min。燙傷合劑樣片貼放：每次試驗(yàn)貼放1個(gè)染菌平板，每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片，1片陰性對(duì)照樣片，共5片。用無(wú)菌鑷子取樣片貼放于平板表面。各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上。貼放好后，用無(wú)菌鑷子輕壓樣片，使其緊貼于平板表面。蓋好平皿，置37℃溫箱，培養(yǎng)16h～18h觀察結(jié)果。用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)的直徑 （包括貼片）并記錄。試驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果金黃色葡萄球菌抑菌圈分別為（12.58±0.35）、 （11.99±0.23）、（12.10±0.31）mm；銅綠假單胞菌抑菌圈分別為為（7.52 ±0.31）、（7.66±0.21）、（7.75±0.22）mm；大腸埃希菌抑菌圈分別為（10.10±0.22）、（10.22±0.12）、（10.56± 0.24）mm。

觀察標(biāo)準(zhǔn)：抑菌圈＞7mm，表示有抑菌作用，可見燙傷合劑具有抑菌或殺菌作用。

2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)。

3 討論

燙傷合劑經(jīng)過(guò)多次HPLC法檢測(cè)出多種有效成分［5－7］。虎杖主要成分為白黎蘆醇苷具有抗菌作用，金銀花主要成分是綠原酸具有抗炎抑菌作用。兩面針成分為氯化兩面針堿具有抗炎和止痛作用地榆含多種鞣質(zhì)成分具有涼血止血收斂的功效。十大功勞含小檗堿具有抑菌松弛立毛肌的痙攣而產(chǎn)生止痛作用。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，以上幾味中藥經(jīng)制劑后，有明顯的抗炎止痛，活血化瘀，防止創(chuàng)面感染的功效，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。用于臨床Ⅰ度、Ⅱ度燒燙傷取得較好的療效［8］。

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R285.5

A

1007－8517（2013）17－0016－02燙傷合劑是廣西醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院根據(jù)中醫(yī)藥理論自擬的處方，由該制劑室生產(chǎn)［1］，由虎杖、兩面針、地榆、金銀花、十大功勞中藥組成，用于治療燒燙傷治療?，F(xiàn)對(duì)燙傷合劑抗炎抑菌鎮(zhèn)痛活性作用進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)研究，為臨床應(yīng)用提供資料。

2013.07.07）