女性泌尿生殖道衣原體與支原體檢測及藥敏分析

韓婷梅 郭曉光 蘆潔

沙眼衣原體和支原體是主要寄生于人類泌尿生殖道的原核細(xì)胞型微生物，是非淋菌性宮頸炎(NGU)的主要病原體，不僅可引起泌尿生殖道炎癥，亦可導(dǎo)致自發(fā)性流產(chǎn)，新生兒體重不足，不孕不育等多種泌尿生殖道疾?。?，2］，其感染有逐年上升的趨勢。近年來由沙眼衣原體(CT)和支原體所引起的泌尿生殖道疾病發(fā)病率呈上升趨勢，加之支原體耐藥株不斷上升，給治療效果帶來困難，因此治療前進(jìn)行病原檢測和藥敏試驗(yàn)，根據(jù)藥敏結(jié)果來選擇用藥，是提高治療效果的有效手段。為了解本地區(qū)女性泌尿生殖道感染患者CT、支原體感染情況及支原體對抗生素的敏感情況，對967例疑似女性泌尿生殖道感染患者的標(biāo)本進(jìn)行了分析，現(xiàn)將結(jié)果分析報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 檢測人群 2009年1月至2012年12月我院皮膚科、婦產(chǎn)科收治疑似為泌尿生殖道感染女性患者967例，受檢者均嚴(yán)格按要求取材送檢，所有患者取標(biāo)本前一周均未使用過任何抗生素類藥物。年齡均在18～61歲之間，平均年齡29.3歲。其中，20歲以下疑似患者89人，占9.2%;20～40歲疑似患者698人，占 72.2%;40歲以上疑似患者 180人，占18.6%。所有患者均有不同程度的泌尿生殖道感染癥狀，臨床癥狀最短1周，最長2年，在治療前采集標(biāo)本。

1.2 標(biāo)本采集 按常規(guī)操作，患者消毒外陰后，用陰道窺器擴(kuò)引陰道，先用消毒棉拭子拭去宮頸口分泌物，再用另一無菌拭子伸入宮頸2～4 cm處，旋轉(zhuǎn)2周，并至少停留20 s取宮頸分泌物及帶柱狀上皮細(xì)胞的材料的樣本，均用配套的無菌容器立即送檢。取樣拭子不可碰陰道壁，輕輕取出。留取2份標(biāo)本，分別送檢CT和支原體。

1.3 試劑

1.3.1 沙眼衣原體檢測為膠體金法，采用上海凱創(chuàng)生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的CT抗原檢測試劑盒(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號YZS/國1774-2009)，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作。

1.3.2 支原體培養(yǎng)、鑒定采用貝瑞特生物技術(shù)(鄭州)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的Uu和Mh培養(yǎng)鑒定、計(jì)數(shù)、藥敏劑盒(產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號YZS/豫0096-2005)。

1.4 方法

1.4.1 CT實(shí)驗(yàn) 將所得第一份臨床樣品放入含有溶液A(含0.2 ml NaOH溶液)的樣品處理管中，2 min后加入等量的溶液B(含0.2 ml HCl溶液)，充分混勻后滴2～3滴在檢測試劑盒的加樣空中，10 min判讀結(jié)果(有些陽性樣品可在1 min后出現(xiàn)結(jié)果，為確保陰性結(jié)果請勿在15 min后判斷結(jié)果)。

1.4.2 支原體實(shí)驗(yàn) 將50 ul樣本培養(yǎng)基試劑加入試劑條C-空白孔中，并將所得第二份臨床標(biāo)本立即接種于樣本的液體培養(yǎng)基試劑中，棉拭子插入培養(yǎng)液中充分振洗并放置5 min，然后在瓶壁上擠干拭子，棄拭子后充分混勻接種了樣本的培養(yǎng)基，用加樣器分別準(zhǔn)確量50 ul接種到試劑條余下各孔中(除C-)，然后再往試劑條的每一孔中加一滴無菌石蠟油(約50 ul)蓋上蓋子后將剩余培養(yǎng)液分兩瓶連同試劑條一起置35℃ ～37℃的溫箱中培養(yǎng)，解脲脲原體Uu培養(yǎng)計(jì)數(shù)24 h內(nèi)完成，人型支原體Mh培養(yǎng)計(jì)數(shù)48 h內(nèi)完成。

1.5 判斷原則

1.5.1 沙眼衣原體判斷 質(zhì)控線(C)有一條紅線，檢測線(T)無紅線出現(xiàn)為陰性;質(zhì)控線(C)有一條紅線，檢測線(T)也有一條紅線出現(xiàn)為陽性;質(zhì)控線(C)不出現(xiàn)紅線，結(jié)果無效。

1.5.2 支原體判斷 空白孔應(yīng)為陰性，否則試驗(yàn)無效。對照孔陰性報(bào)告Uu和 Mh培養(yǎng)為陰性;對照孔陽性，有 Uu和(或)Mh生長，24 h試劑由橙黃變紅且清亮為陽性提示有Uu生長，顏色不變?yōu)閁u陰性;繼續(xù)觀察，48 h試劑由橙黃變紅為Mh陽性。藥敏結(jié)果判斷，當(dāng)有支原體生長時，高低濃度藥敏孔黃色為敏感，如低濃度孔變?yōu)榧t色，高濃度為黃色，判為中介;高低濃度都變?yōu)榧t色為耐藥。

2 結(jié)果

2.1 衣原體、支原體陽性檢出率 967例標(biāo)本中，檢測出578例衣原體、支原體感染，檢出率為59.8%。其中檢出單純解脲支原體(Uu)陽性349例(36.1%)，單純?nèi)诵椭гw(Mh)陽性27例(2.8%)及Uu、Mh混合感染陽性105例(10.9%);同時檢出單純沙眼衣原體(CT)陽性49例(5.1%)，CT、Uu陽性16例(1.7%)，CT、Mh陽性 3 例(0.3%)，CT、Uu、Mh陽性5例(0.5%)。結(jié)果見表1。

2.2 患者年齡段分布 578例衣原體、支原體感染患者20歲以下的患者7例，占1.2%;20～40歲的患者416例，占72%;40歲以上的患者155例，占26.8%，結(jié)果見表2。

2.3 支原體藥敏結(jié)果 505例中Uu對10種抗生素敏感率在80%以上的有強(qiáng)力霉素(90.96%)、美滿霉素(89.86%)及交沙霉素(81.64%)三種。CT、Mh及混合感染患者對抗生素的敏感性普遍降低，但強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素具有較強(qiáng)的體外抗菌活性。結(jié)果見表3。

表1 967例衣原體、支原體培養(yǎng)陽性陽性結(jié)果分布情況

表2 578例衣原體、支原體感染不同年齡段分布情況(例，%)

表3 505例支原體感染者藥敏結(jié)果比較(例，%)

3 討論

衣原體、支原體感染率隨著性的性活動的增加呈上升的趨勢?；颊咧饕薪】等诵曰钴S期的中青年群體，年齡主要分布在20～40歲之間，而且多數(shù)病例有不潔性生活史，故應(yīng)加強(qiáng)對青壯年的健康教育，提高人口文化素質(zhì)，法制觀念，性道德及性行為知識和自我保護(hù)意識。

支原體是能在人工培養(yǎng)條件下獨(dú)立生存的最小微生物，支原體是一種介于細(xì)菌和病毒之間原核細(xì)胞型微生物，由于沒有細(xì)胞壁，形態(tài)無定形，不能被革蘭氏染液所著色，姬母染色也不能將支原體與標(biāo)本中的碎片顆粒相區(qū)別，因此支原體不能進(jìn)行鏡下形態(tài)學(xué)檢測。所以支原體培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室診斷的主要方法。

由于支原體是一類無細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，因而對β-內(nèi)酰胺類抑制細(xì)胞壁合成的抗生素(青霉素、頭孢菌素等)不敏感。臨床上多采用大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、四環(huán)素類等干擾蛋白質(zhì)合成的藥物進(jìn)行治療。從藥敏結(jié)果來看，治療解脲支原體的首選藥應(yīng)為四環(huán)素類中強(qiáng)力霉素、美滿霉素和交沙霉素;而在喹諾酮類中，司帕沙星、氧氟沙星、左旋氧氟沙星耐藥性較高，說明本地區(qū)喹諾酮類藥物廣泛用于泌尿道感染，而造成此類藥耐藥性較高，且混合感染患者的耐藥率明顯高于單純Uu和單純Mh感染者。另外支原體對強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素、克拉霉素等的敏感性呈下降趨勢，可能是近年來抗生素的濫用導(dǎo)致了大量耐藥株的不斷出現(xiàn)，使原來敏感的藥物出現(xiàn)耐藥［3，4］。因此盡可能進(jìn)行支原體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)，監(jiān)測抗生素耐藥性的變遷，同時根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用藥物，是減緩耐藥株出現(xiàn)的最有效方法之一。

女性感染支原體后癥狀不明顯，許多女性只會有輕度不適，易被患者忽視，所以沒有及時就醫(yī)，造成女性感染支原體陽性增高。另外很多患者未與性伴侶同時就醫(yī)，或自己買藥用藥，造成了反復(fù)感染，遷延不愈或慢性感染。這是抗生素濫用、療程不規(guī)范及隨意使用抗生素作為預(yù)防用藥造成支原體耐藥菌株增多的重要原因。所以我們在治療疑似支原體感的患者時，應(yīng)對患者及早檢測支原體和進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，選擇高效抗生素，實(shí)施足劑量，足療程用藥，同時還要掌握從低起點(diǎn)用藥，品種不易更換頻繁，用藥時間不得隨意延長等原則，必要時可采取聯(lián)合用藥，以減少耐藥菌株的產(chǎn)生和流行［3］。

根據(jù)近幾年研究資料顯示，各型支原體感染率呈上升趨勢。尤其是Uu+Mh混合感染率增高，其耐藥率升高，可見耐藥性在病原體之間傳播的嚴(yán)重性［4，5］，因此定期檢測泌尿生殖道支原體的感染情況及藥敏情況是非常必要的。

［1］Walter G Gunter S，Stefan J，et al.Ureaplsma urealyticum Meningitis in an adult patient.J.C lin Microbiol，2008，46(3):1141-1143.

［2］Holmes KK，Per M.Sexually Transmitted diseasea.3thed.New York:McGraw-Hill Companise Inc，1999:533-275.

［3］黃金印，羅襯銀.女性泌尿生殖道衣原體支原體檢測及藥敏分析.中國醫(yī)藥指南，2012，10(31):14-15.

［4］郭曉光，王海蘭，韓婷梅.泌尿生殖道解脲脲原體和人型支原體感染情況及藥敏分析.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2010，04(11):2300-2301.

［5］韓婷梅.396例慢性前列腺炎的性病病原體檢測報(bào)告.中原醫(yī)刊，2002，29(05):35.