干擾素聯(lián)合阿德福韋酯對(duì)慢性乙肝患者血清IFN-γ/IL-10的影響

鄒同

我國(guó)14億人口中有近9300萬(wàn)為乙型肝炎病毒(HBV)攜帶者，HBV攜帶率為7.18%，現(xiàn)今抗病毒治療以抑制HBVDNA復(fù)制和HBeAg陰轉(zhuǎn)為主要趨勢(shì)。但在抗病毒治療中，初始治療為核苷(酸)類似物(nucleotide analogue，NUC)或干擾素(IFN)單藥治療，但單藥治療往往應(yīng)答率低，并且長(zhǎng)期用藥易發(fā)生病毒變異，造成病毒反彈，產(chǎn)生耐藥［1，2］，影響療效。因此，如何更有效治療慢性乙肝是臨床研究的熱點(diǎn)。Th1/Th2細(xì)胞不平衡應(yīng)答是慢性乙型肝炎感染者體感染慢性化的主要機(jī)理，而這種失衡又體現(xiàn)在Th1/Th2細(xì)胞因子的失調(diào)。因此，改善Th1/Th2的平衡可以逆轉(zhuǎn)慢性化進(jìn)程。本研究通過(guò)研究干擾素聯(lián)合阿德福韋酯對(duì)慢性乙肝患者血清干擾素-γ(IFN-γ)/白細(xì)胞介素-10(IL-10)的影響，分析其治療效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年10月至2011年12月本院的慢性乙型肝炎患者，慢性乙肝的診斷依據(jù)2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)、中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)制定指南診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，共82例，其中男 52例，女30例，年齡 17～61歲，平均年齡(38.1±8.2)歲。隨機(jī)分為兩組，觀察組41例，其中男28例，女13例，年齡17～59歲，平均年齡(39.5±7.9)歲;對(duì)照組41例，其中男23例，女17例，年齡19～61歲，平均年齡(37.4±9.2)歲。兩組患者性別、年齡、病情等無(wú)明顯差異(P＞0.05)，具有可比性。所有患者近3個(gè)月未用過(guò)抗病毒藥物及糖皮質(zhì)激素等影響免疫功能的藥物，排除同時(shí)存在酒精性肝病、自身免疫性肝病等其他肝病者;其他HAV、HCV、HDV、HEV或HIV的合并感染及肝硬化、肝癌等失代償肝病患者;血肌酐異常者;妊娠或哺乳期婦女。

1.2 治療方法 兩組患者均給予保肝、支持及對(duì)癥治療，對(duì)照組給予阿德福韋酯10 mg口服，1次/d;觀察組給予阿德福韋酯10 mg口服，1次/d;干擾素300萬(wàn)U肌內(nèi)注射，隔天1次。療程12個(gè)月。治療結(jié)束后觀察血清ALT恢復(fù)正常率、血清HBeAg轉(zhuǎn)換率、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率(血清HBV-DNA濃度＜1.0×103copies/ml為陰性)。

1.3 HBV-DNA，IFN-α和 IL-10的測(cè)定 空腹采靜脈血5 ml，置于室溫放置2 h或4℃過(guò)夜，于1000 r/min離心20 min，于-20℃冰箱將標(biāo)本放置保存待測(cè)，但應(yīng)避免反復(fù)凍融，采用聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)血清 HBV DNA，檢驗(yàn)靈敏度為1000copies/ml，使用Roche LightCycler檢測(cè)儀，所用試劑為深圳匹基公司生產(chǎn)。采用生物素一親合素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ABC-ELISA)測(cè)定血清IFN-α和IL-10的濃度，試劑盒均由美國(guó)Biotich-nology Systems公司提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示，獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用非參數(shù)檢驗(yàn)中的Wilcoxon秩和檢驗(yàn)不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

所有患者均順利完成12個(gè)月治療，無(wú)中途自行停藥及脫落患者，未發(fā)現(xiàn)耐藥患者，未發(fā)現(xiàn)有肝腎功能損傷者。

2.1 兩組患者ALT復(fù)常率、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率和HbeAg陰轉(zhuǎn)率 治療12月后，觀察組患者的ALT復(fù)常率、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率和HbeAg陰轉(zhuǎn)率均高于對(duì)照組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 兩組IFN-γ和IL-10的比較 兩組治療后均可升高血清IFN-γ、降低IL-10和升高 IFN-γ/IL-10，并且觀察組改善上述指標(biāo)更明顯對(duì)照組(P＜0.05)，見(jiàn)表2。

表1 ALT復(fù)常率、HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率和HbeAg陰轉(zhuǎn)率的比較(%)

表2 兩組IFN-γ和IL-10的比較()

表2 兩組IFN-γ和IL-10的比較()

注:與治療前比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;兩組治療后比較#P＜0.05

/IL-10觀察組 治療前組別 時(shí)間 IFN-γ(ng/L) IL-10(ng/L) IFN-γ 21.5±10.2 31.2±10.8 0.69±10.8治療后 53.7±23.5＊＊# 15.7±8.1＊＊# 3.4±1.1＊＊#對(duì)照組 治療前 20.9±11.1 30.7±10.9 0.68±11.2治療后 39.7±16.7＊＊ 20.3±9.1* 1.96±0.6*

3 討論

慢性乙型肝炎是一種臨床常見(jiàn)的傳染病，肝臟慢性遷延性炎癥可由于HBV持續(xù)復(fù)制而發(fā)生，導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化甚至可以導(dǎo)致癌變?？刂苽魅拘缘闹匾侄问强共《局委?，并且合適的抗病毒治療可以阻斷疾病進(jìn)展、降低并發(fā)癥發(fā)生率。但臨床治療中由于耐藥問(wèn)題的出現(xiàn)，單用一種藥物很難逆轉(zhuǎn)病情，常常需要聯(lián)合用藥。我們采用干擾素聯(lián)合阿德福韋酯聯(lián)合抗病毒。ALT復(fù)常率是反映抗HBV療效的主要生化指標(biāo)，ALT復(fù)常提示肝臟炎癥活動(dòng)減輕;HBV DNA水平是反映HBV復(fù)制的最靈敏指標(biāo)，是評(píng)價(jià)抗HBV療效的最重要指標(biāo)。血清HBV-DNA拷貝數(shù)的下降是在使用抗核苷類藥物治療慢性乙型肝炎時(shí)評(píng)估其療效的主要指標(biāo)，但臨床應(yīng)用表明，乙肝抗病毒效果監(jiān)測(cè)和停藥終點(diǎn)的判定并不能以血液中HBV-DNA拷貝數(shù)下降和轉(zhuǎn)陰作為指標(biāo)。因此在治療時(shí)，需要對(duì)病毒反應(yīng)導(dǎo)致的免疫反應(yīng)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

阿德福韋酯是一種單磷酸腺苷的無(wú)環(huán)核苷類似物，作用機(jī)制在于DNA鏈延長(zhǎng)可由于其活性代謝產(chǎn)物阿德福韋二磷酸鹽通過(guò)與脫氧腺苷三磷酸自然底物競(jìng)爭(zhēng)以及整合到病毒DNA后引起終止，HBV-DNA多聚酶(逆轉(zhuǎn)錄酶)受到抑制，干擾了HBV基因合成［4］。干擾素對(duì)病毒有直接抑制作用，同時(shí)能夠提高機(jī)體清除病毒免疫功能，能夠提高病毒感染細(xì)胞膜上相關(guān)抗原表達(dá)，使乙型肝炎病毒感染的細(xì)胞便于被TC細(xì)胞識(shí)別，干擾素與細(xì)胞表面相關(guān)受體結(jié)合，清除了肝細(xì)胞感染的病毒，并且干擾素抗病毒作用持續(xù)穩(wěn)定［5］。觀察組患者的ALT復(fù)常率、HBVDNA陰轉(zhuǎn)率和HbeAg陰轉(zhuǎn)率均高于對(duì)照組(P＜0.05)。

CD4+Th根據(jù)產(chǎn)生的細(xì)胞因子的不同可分為T(mén)hl和Th2。Th1型細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，主要產(chǎn)生干擾素-γ(IFN-γ)、IL-2、TNF-α等細(xì)胞因子;Th2型細(xì)胞促進(jìn)抗體的產(chǎn)生，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生IL-10、IL-4、IL-5、IL-6等細(xì)胞因子。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為［6］，Thl型細(xì)胞因子可以用IFN-γ與 IL-2代表，Th2型細(xì)胞因子用IL-10代表。Th1/Th2的失衡可以用其產(chǎn)生的細(xì)胞因子表示。Th2類細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)在慢性肝炎患者體內(nèi)產(chǎn)生主導(dǎo)作用，IFN-γ是針對(duì)乙肝病毒感染的宿主的免疫調(diào)節(jié)物，肝炎病毒可在其轉(zhuǎn)錄后水平受到抑制，抗病毒蛋白又可由于IFN-γ結(jié)合細(xì)胞表面相應(yīng)受體誘導(dǎo)細(xì)胞形成，Thl類細(xì)胞的合成隨著Th2類細(xì)胞合成的增加而受到限制，削弱了IFN-γ殺滅HBV的作用，從而抑制病毒的復(fù)制功能受到限制，導(dǎo)致在體內(nèi)HBV持續(xù)存在，從而引起肝炎患者的慢性化［7］。已有研究顯示［8］，Thl型細(xì)胞因子IFN-γ水平在慢性乙型肝炎患者血清中普遍較低，說(shuō)明患者細(xì)胞免疫功能低下，不能有效清除體內(nèi)的HBV。IL-lO是由單核細(xì)胞產(chǎn)生的一種Th2細(xì)胞因子，它能夠抑制Th1細(xì)胞因子的產(chǎn)生有研究顯示［9］，IL-10參與了肝臟的炎性反應(yīng)與乙肝免疫應(yīng)答，慢性肝炎患者血清IL-10水平與ALT水平和HBVDNA水平呈正相關(guān)性。而IFN-γ/IL-10更能反應(yīng)Th1/Th2的平衡關(guān)系。兩組治療后均可升高血清IFN-γ、降低IL-10和升高IFN-γ/IL-10，并且觀察組改善上述指標(biāo)更明顯對(duì)照組(P＜0.05)。研究表明［10］，干擾素聯(lián)合阿德福韋通過(guò)從RNA、DNA不同水平同時(shí)抗病毒而進(jìn)行抗慢性乙肝治療，并調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，使干擾素激發(fā)的體內(nèi)免疫的程度與阿德福韋降低HBV DNA的速度相匹配，從而病毒復(fù)制最大限度地被抑制，多重耐藥和病毒基因變異的機(jī)會(huì)減少，提高機(jī)體抗病毒的特異性免疫，肝臟細(xì)胞的抗病毒能力加強(qiáng)，可以最大程度徹底消除體內(nèi)殘留HBV，防止復(fù)發(fā)。

［1］Marcellin P，Chan g TT，Lim SG，et al.Long-term efficacy and safety of adefovir dipivoxil for the treatment of hepatitis B e antigenposfive chronic hepatitisB.Hepatology，2008，48(9):750-758.

［2］Marcellin P.Bonino F，Lau GK，et al.Sustained of response of hepatitis B e antigen-negative patients 3 years after treatment with peginterferon alpha-2a. Gastroenterology，2009，136(2):2l69-2179.

［3］萬(wàn)謨彬，翁心華.干擾素治療慢性乙型肝炎專家建議.中華傳染病雜志，2010，28(4):193-200.

［4］黃凱，王晶.阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎30例.中國(guó)實(shí)用醫(yī)刊，2012，39(4):88-89.

［5］Fukuds R Iahiaxurs N Nguyen TX，et al.The expression of IL-2 IL-4 and interferon-gamma(IFN-gamma)Mma usingliver biopaiea at diferent phases ofacute exacerbation of chronic hepatitis B.Chin EXP Immunol，20055，100(3):446-451.

［6］Sherman M，Yurdaydin C，Sollano L，et al.Entecavir for treatment of Lamivudine-refractory，HbeAg-positive chronic hepatitis B.Gastroenterology，2006，130(7):2039-2049.

［7］趙磊，劉殿武，王俊英，等.乙型病毒性肝炎患者血清IFN-γ、IL-10、TGF-β1 檢測(cè)的臨床意義 . 河北醫(yī)藥，2012，34(15):2245-2247.

［8］劉駿.盛吉芳.慢性乙型肝炎患者血清Thl/Th2型細(xì)胞因子水平研究.國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2006，33(1):15-18.

［9］周力，王亮.慢性乙型肝炎患者血清細(xì)胞因子檢測(cè)的臨床意義. 中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19(12):2866-2867.

［10］竇曉光，徐道振，翁心華.當(dāng)前聚乙二醇干擾素治療慢性乙型肝炎的熱點(diǎn)與難點(diǎn).中華傳染病雜志，2010，28(4):201-203.