生長相關(guān)癌基因α與趨化素樣因子超家族2在胃癌組織的表達(dá)

阮正英 陳 豪 羅 斌 浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 臺州317523

范廣民 浙江省臺州市中心醫(yī)院 應(yīng)香嵐 浙江省臺州市腫瘤醫(yī)院

生長相關(guān)癌基因α與趨化素樣因子超家族2在胃癌組織的表達(dá)

阮正英 陳 豪 羅 斌 浙江省臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院 臺州317523

范廣民 浙江省臺州市中心醫(yī)院 應(yīng)香嵐 浙江省臺州市腫瘤醫(yī)院

胃癌 趨化因子 生長相關(guān)癌基因α 趨化素樣因子超家族2

研究表明，趨化因子及其受體可能在腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中起著重要的作用[1-2]。趨化因子生長相關(guān)癌基因（growth-related oncogene，GRO）和趨化素樣因子超家族（chemokine-like factor superfamily member，CKLFSF）可能參與了腫瘤的生物學(xué)行為[3]，但與胃癌的關(guān)系目前尚不清楚。本研究通過檢測胃癌組織GROα和CKLFSF2表達(dá)，探討其與胃癌的發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年3月—2012年8月在臺州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院、臺州市腫瘤醫(yī)院和臺州市中心醫(yī)院住院、術(shù)后經(jīng)病理確診胃癌患者63例，男40例，女23例，年齡48～89歲，平均（67.6±7.1）歲；其中低分化腺癌18例，乳頭狀腺癌13例，黏液腺癌和腺鱗癌各8例，管狀腺癌5例，未分化癌4例，鱗癌3例，印戒細(xì)胞癌和類癌各2例。取胃癌組織為觀察組，癌旁正常胃黏膜組織為正常對照組。

1.2 試劑和方法 兔抗人免疫組化試劑GROα多克隆抗體購自美國Biomedical Technologies公司，抗人CKLFSF2多克隆抗體購自上海天鴻生物科技有限公司，二抗山羊抗兔免疫組化試劑盒和DAB染色試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。免疫組化技術(shù)測定GROα和CKLFSF2表達(dá)，具體步驟參考文獻(xiàn)[4]方法。GROα和CKLFSF2的抗體稀釋濃度分別為1∶100和1∶25。

1.3 結(jié)果判定 胞漿呈現(xiàn)棕黃色表達(dá)判定為陽性細(xì)胞，結(jié)構(gòu)清晰，著色明顯高于背景。每高倍視野陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性，≥5%為陽性；～25%為（+），～50%為（++），～100%為（+++）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用χ2檢驗，GROα與CKLFSF2蛋白表達(dá)的相關(guān)性采用spearman等級相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和正常胃黏膜組織GROα表達(dá) GROα蛋白主要表達(dá)于胃癌組織和正常胃黏膜組織的細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕黃色。胃癌組GROα陽性率顯著高于對照組（P＜0.01），見表1。伴有腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組GROα陽性率顯著高于不伴有轉(zhuǎn)移者（P＜0.05)；其陽性率與性別、年齡、腫塊大小、分化程度和臨床分期無明顯關(guān)系（P均＞0.05），見表2，圖1～2（封二）。

2.2 胃癌組織和正常胃黏膜組織CKLFSF2蛋白表達(dá) CKLFSF2蛋白主要表達(dá)于胃癌組織和正常胃組織的細(xì)胞漿內(nèi)，呈棕黃色。胃癌組CKLFSF2陽性率顯著低于對照組（P＜0.05），見表1。其陽性率與性別、年齡、腫塊大小、分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性無明顯關(guān)系（P均＞0.05），見表2，圖3～4（封二）。

2.3 胃癌組織GROα與CKLFSF2表達(dá)的相關(guān)性胃癌組 GROα與 CKLFSF2表達(dá)均為陽性者占30.16%，其中CKLFSF2表達(dá)陰性組GROα的陽性率78.79%，CKLFSF2表達(dá)陽性組 GROα的陽性率63.33%，GROα表達(dá)陰性組 CKLFSF2的陽性率61.11%，GROα表達(dá)陽性組 CKLFSF2的陽性率33.33%。spearman等級相關(guān)分析顯示，兩者表達(dá)強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.480，P＜0.01），見表3。

表1 兩組胃黏膜組織GROα和CKLFSF2表達(dá)比較 例

表2 胃癌組GROα和CKLFSF2陽性率與臨床病理特點的關(guān)系 例

表3 胃癌組GROα和CKLFSF2的等級相關(guān)性

3 討論

胃癌與幽門螺桿菌感染有關(guān)，趨化因子在此可能起到一定的作用，有證據(jù)顯示，胃癌患者血清中白細(xì)胞介素6與幽門螺桿菌感染相關(guān)[5]。趨化因子是一種小分子量的促炎癥因子，涉及到炎癥細(xì)胞的浸潤、血管發(fā)生、血細(xì)胞生成、腫瘤及自身免疫性疾病。在腫瘤的生物學(xué)行為中，趨化因子及其受體表現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)作用，涉及到腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移。不同的趨化因子所起的作用不同，有的趨化因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長[6-7]，有的卻起著相反的作用[8]。

GROα屬于CXC趨化因子超家族成員，具有廣泛的促炎作用，還可能是一些慢性自身免疫性疾病新的治療靶點[9]。隨著研究的深入，越來越多的證據(jù)顯示其與惡性腫瘤存在一定的相關(guān)性，可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移[10-11]。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織GROα蛋白陽性率明顯高于腫瘤周圍未受影響的正常黏膜組織，與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而與性別、年齡、腫塊大小、臨床分期和分化程度的生物學(xué)特性無相關(guān)性。提示GROα在胃癌組織表達(dá)增強(qiáng)，對腫瘤的生長可能有促進(jìn)作用，還可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CKLFSF作為一種新型的細(xì)胞因子，位于人16號染色體上，其表達(dá)譜較廣。該家族包括CKLF和CKLFSF1-8共9個基因，在免疫、生殖、造血、腫瘤的發(fā)生等發(fā)揮重要作用[10-11]。目前研究主要集中在CKLF-1的生物學(xué)特性方面，認(rèn)為它能通過下調(diào)Bax和Caspase-3及上調(diào)Bcl-2的途徑誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖及抑制凋亡[10]，促進(jìn)癌組織的生長。相反，CKLFSF則可能起著抑制腫瘤生長的作用。食管、賁門癌黏膜組織CMTM4和CMTM8蛋白陽性表達(dá)率均低于癌旁正常黏膜組織[11]。以上說明CKLFSF可能是潛在的抑癌因子，但CKLFSF2在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中所起作用如何，則鮮見報道。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組CKLFSF2陽性率明顯低于癌旁正常黏膜組織，提示其可能具有抑癌作用。研究還發(fā)現(xiàn)，CKLFSF2與患者的性別、年齡、腫塊大小、臨床分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性無相關(guān)性。

綜上所述，胃癌組織GROα表達(dá)增加，可能對胃癌組織的生長有促進(jìn)作用，還與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移有關(guān)；而CKLFSF2表達(dá)下降，可能有抑制胃癌組織生長作用。本研究顯示，趨化因子影響腫瘤的生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等生物學(xué)特性，檢測胃癌組織趨化因子GROα和CKLFSF2有助于判斷患者病情和預(yù)后。隨著研究的深入，以趨化因子及其受體為靶點可能有望成為一種新的治療方法。但其機(jī)制仍然不清，是否與組織學(xué)分型和幽門螺桿菌感染有關(guān)等，尚有待于進(jìn)一步研究。

［1］Xing YN，Xu XY，Nie XC，et al.Role and clinicopathologic significance of CXC chemokine ligand 16 and chemokine（C-X-C motif）receptor 6 expression in gastric carcinomas［J］.Hum Pathol，2012，43（12）：2299-2307.

［2］ Yasumoto K，Yamada T，Kawashima A，et al.The EGFR ligands amphiregulin and heparin-binding egf-like growth factorpromote peritonealcarcinomatosisin CXCR4-expressing gastric cancer［J］.Clin Cancer Res，2011，17（11）：3619-3630.

［3］Doll D，Keller L，Maak M，et al.Differential expression of the chemokines GRO-2，GRO-3,and interleukin-8 in colon cancer and their impact on metastatic disease and survival［J］.Int J Colorectal Dis，2010，25（5）：573-581.

［4］羅斌，王世夫，應(yīng)香嵐，等.趨化因子在結(jié)腸癌發(fā)病中的作

用［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2011，17（4）：346-348.

［5］ Hui-Lee Wong，Charles S.Rabkin，Xiao-Ou Shu，et al. Systemic Cytokine Levels and Subsequent Risk of Gastric Cancer in Chinese Women［J］.Cancer Sci，2011，102（10）：1911-1915.

［6］Wang JP，Hu WM，Wang KS，et al.Expression of C-X-C chemokine receptor types 1/2 in patients with gastric carcinoma:Clinicopathological correlations and significance［J］.Oncol Lett，2013，5（2）：574-582.

［7］ Mukherjee D，Zhao J.The Role of chemokine receptor CXCR4 in breast cancer metastasis［J］.Am J Cancer Res，2013，3（1）：46-57.

［8］Meijer J，Ogink J，Kreike B，et al.The chemokine receptor CXCR6 and its ligand CXCL16 are expressed in carcinomas and inhibit proliferation［J］.Cancer Res，2008，68（12）：4701-4708.

［9］Lisi S，Sisto M，Lofrumento DD，et al.A potential role of the GRO-α/CXCR2 system in Sj?gren's syndrome:regulatory effects of pro-inflammatory cytokines［J］.Histochem Cell Biol，2013，139（2）：371-379.

［10］Zhang T，Xiong J，Shen CY，et al.Effects of chemokinelike factor 1 on the proliferation and apoptosis of human vascular smooth muscle cell［J］.中華醫(yī)學(xué)雜志（英文版），2012，92（29）：2069-2074.

［11］查鵬，姜冠潮，王俊.食管、賁門癌組織中CMTM4、8的表達(dá)及意義［J］.山東醫(yī)藥，2009，49（6）：21-22.

2013-04-11

浙江省溫嶺市科技局基金資助項目（No.2011-1-82）

通迅作者：羅斌，E-mail:luobinzg@163.com