非酒精性脂肪肝患者檢測(cè)血清胸腺素β4水平的意義*

董秋艷 韓 濤 王磊峰 董玉萍 劉 瑩 王 博

非酒精性脂肪性肝病(non－alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種與胰島素抵抗（IR）和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷[1]。NAFLD在世界范圍內(nèi)平均患病率為20%～33%[2]。胸腺素β4（Thymosinβ4,Tβ4）是個(gè)高度保守的、由43個(gè)氨基酸殘基組成的多肽，分子質(zhì)量約為4 963 u。它參與人體內(nèi)多種生物學(xué)過(guò)程，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和上調(diào)炎性因子，在細(xì)胞分化和增殖方面起重要作用[3-4]。而NAFLD時(shí)血清Tβ4的水平如何尚少見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在初步探討血清Tβ4與NAFLD的關(guān)系，為臨床診治NAFLD提供新的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年4月—2011年3月在天津市第三中心醫(yī)院門(mén)診治療的NAFLD患者40例，其中男29例，女11例，年齡（43.14±15.19）歲，所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)脂肪肝和酒精性肝病學(xué)組2010年制定的非酒精性脂肪性肝病診療指南[2]。其中26例參與多中心隨機(jī)雙盲實(shí)驗(yàn)研究的患者采用水飛薊賓或多烯磷脂酰膽堿治療，療程均達(dá)到6個(gè)月，觀察非酒精性脂肪性肝病臨床療效并行安全性評(píng)價(jià)。隨機(jī)抽取同期健康體檢肝臟超聲正常者40例作為對(duì)照組，其中男33例，女7例，年齡（42.23±10.65)歲。2組性別（χ2=1.147）和年齡（t=1.196）比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0.05）。

1.2 血樣采集 入選對(duì)象均于清晨采取空腹靜脈血3 mL，注入不含抗凝劑帶分離膠的生化管中，于2 h內(nèi)以3 000 r/min離心15 min，分離血清，置于-80℃冰箱保存待測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法 ⑴血清Tβ4濃度的測(cè)定采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（K9520，Immunodiagnostik AG,Bensheim,Germa?ny）進(jìn)行檢測(cè)。⑵采用全自動(dòng)生化分析儀對(duì)患者血清中三酰甘油(TG)、總膽固醇（CHO）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶線粒體同工酶(ASTm)、γ-谷氨酰胺轉(zhuǎn)肽酶(GGT)、總膽紅素(TBIL)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、空腹血糖(FPG)等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x± s)表示,2組間的比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方（χ2）檢驗(yàn)。診斷實(shí)驗(yàn)的靈敏度、特異度及AUC采用ROC曲線，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組生化指標(biāo)的比較 NAFLD組患者血清中TG、ALT、ASTm、GGT、TBIL、ALP、ALB、FPG與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01）,其他生化指標(biāo)2組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05),見(jiàn)表1。

2.2 2組血清Tβ4水平的比較 NAFLD組血清Tβ4為(2.635 4±2.633 1)mg/L，對(duì)照組為(9.282 7±4.663 5)mg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=7.241，P＜0.01）。

Table 1 Comparison of biochemical parameters between two groups表1 2組生化指標(biāo)的比較(n=40,x±s)

2.3 治療前后各項(xiàng)生化指標(biāo)的比較 NAFLD組患者治療后血清中 TG、ALT、ASTm、GGT、TBIL、ALP、ALB、FPG與治療前相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01）,其他生化指標(biāo)2組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見(jiàn)表2。

Table 2 Comparison of biochemical parameters before and after treatment in 26 patients with NAFLD表2 26例NAFLD患者治療前后生化指標(biāo)的比較(n=26,±s)x

2.4 治療前后血清Tβ4水平的比較 26例NAFD患者血清Tβ4的水平治療后(3.7434±1.8871)mg/L,高于治療前的(2.085 4±1.150 5)mg/L,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.486，P＜0.01）。

2.5 血清ALT、Tβ4水平的ROC曲線圖 以B超作為NAFLD診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，分別做出血清ALT、Tβ4水平的ROC曲線圖。在血清ALT水平的曲線上取靈敏度+特異度之和最大值點(diǎn)（40.10 U/L）作為預(yù)測(cè)NAFLD的cut-off值，AUC為0.717（95%CI為0.596~0.838），靈敏度為57.5%，特異度76.7%；以靈敏度+特異度之和最大值點(diǎn)的血清Tβ4值（4.830 5 mg/L）作為預(yù)測(cè)NAFLD的cut-off值，AUC為0.906（95%CI為0.842~0.969），靈敏度為85%，特異度80%；血清Tβ4的AUC明顯大于ALT，血清Tβ4的靈敏度、特異度均顯著高于ALT，見(jiàn)圖1。

圖1 血清ALT、Tβ4水平的ROC曲線圖

2.6 NAFLD組患者血清Tβ4水平與肝功能指標(biāo)的相關(guān)性 NAFLD組患者血清Tβ4水平與其血清ALT含量呈負(fù)相關(guān)（r=-0.330，P＜0.05）。

3 討論

NAFLD是導(dǎo)致肝功能異常的主要原因[5]。疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝（NAFL）,非酒精性單純性脂肪性肝炎（NASH）及其相關(guān)肝硬化、肝細(xì)胞癌[5-6]和亞急性肝功能衰竭[7]。Day等[8]提出NAFLD存在二次打擊的發(fā)病機(jī)制,“第一次打擊”是脂肪積聚和脂肪變性；而氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥性細(xì)胞因子的釋放、線粒體功能異常等因素形成“二次打擊”,誘導(dǎo)了肝臟炎癥反應(yīng)、肝脂肪變性、肝細(xì)胞損傷、炎癥和纖維化。其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確,越來(lái)越多的證據(jù)表明脂肪酸代謝紊亂是NAFLD發(fā)生的基礎(chǔ)[9]，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激-線粒體功能障礙在NAFLD“二次打擊”的病理生理中起著關(guān)鍵性作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，NAFLD患者血清Tβ4的水平明顯降低，說(shuō)明盡管NAFLD患者的ALT、AST升高的水平并不明顯，但其肝臟功能的損傷程度是十分嚴(yán)重的。在臨床上,當(dāng)NAFLD患者的肝臟作為供肝來(lái)源進(jìn)行肝移植時(shí)，雖然肝功能的各項(xiàng)指標(biāo)在正常范圍內(nèi)，但最終會(huì)導(dǎo)致移植肝受體失功。因此，NAFLD患者血清Tβ4的水平可能會(huì)更好地反映肝臟的功能。本研究中血清ALT、Tβ4水平的ROC曲線圖顯示：血清Tβ4水平的靈敏度與特異度明顯高于血清ALT水平。NAFLD患者出現(xiàn)肝功能不良的原因是和其發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)的:當(dāng)發(fā)生NAFLD，出現(xiàn)脂肪酸過(guò)載且線粒體脂肪酸氧化障礙時(shí)，未被氧化的脂肪酸不斷酯化生成三酰甘油，沉積于肝細(xì)胞內(nèi),導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變性。肝臟脂肪的異常積聚和脂肪變性，會(huì)導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體功能的異常，進(jìn)一步加重氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過(guò)氧化，引起惡性循環(huán)，使NAFLD患者的肝細(xì)胞功能?chē)?yán)重受損。

有研究表明，Tβ4能降低氧自由基水平，減緩脂質(zhì)過(guò)氧化，抑制炎性細(xì)胞因子的生成[10]，并促進(jìn)細(xì)胞再生[4]，與創(chuàng)傷愈合[3]、細(xì)胞凋亡[4]、炎癥反應(yīng)[11]、血管生成[12]等均有密切關(guān)系。本研究對(duì)接受水飛薊賓或多烯磷脂酰膽堿治療的26例NAFLD患者血清Tβ4水平進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn):治療后隨著臨床癥狀的緩解和各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的改善，血清Tβ4水平明顯升高。考慮其原因可能是在NAFLD疾病的進(jìn)程中，持續(xù)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致了肝細(xì)胞的損傷，使血清Tβ4水平降低。水飛薊賓或多烯磷脂酰膽堿具有穩(wěn)定細(xì)胞膜、保護(hù)肝細(xì)胞酶系統(tǒng)、清除肝細(xì)胞內(nèi)的活性氧自由基的作用；同時(shí)還可改善肝細(xì)胞脂肪變性，阻止或減輕在肝臟內(nèi)的沉積和浸潤(rùn)，并具有抗炎免疫調(diào)節(jié)及降血脂的作用,使NAFLD患者癥狀、肝功能及肝組織學(xué)明顯改善,從而降低NAFLD患者ALT水平，最終致使血清Tβ4的水平升高。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，26例NAFLD患者接受水飛薊賓或多烯磷脂酰膽堿治療后的血清ALB比治療前降低，推測(cè)其原因可能是NAFLD患者在治療過(guò)程中，經(jīng)過(guò)控制飲食、有效鍛煉，以及考慮到血清白蛋白半衰期相對(duì)較長(zhǎng)等原因，最終使患者治療后的血清ALB下降。

本研究通過(guò)ELISA法檢測(cè)了NAFLD患者血清Tβ4的水平，發(fā)現(xiàn)NAFLD患者血清Tβ4濃度低于健康人，且經(jīng)過(guò)有效治療后明顯升高，血清Tβ4的水平比ALT更靈敏地反映NAFLD患者的肝臟功能。其具體作用機(jī)制尚需進(jìn)一步探討，同時(shí)需要增加治療隨訪例數(shù)，延長(zhǎng)觀察時(shí)間及結(jié)合組織學(xué)資料進(jìn)一步評(píng)價(jià)其價(jià)值。

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