乳腺癌HER—2基因擴(kuò)增顯色原位雜交與免疫組化檢測方法對比研究

張文

[摘要] 目的 探討乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增顯色原位雜交與免疫組織化學(xué)檢測方法對比。方法 選擇153例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者組織蠟塊行免疫組化、顯色原位雜交檢測。結(jié)果 CISH基因擴(kuò)增與HER-2 IHC（+++）表達(dá)結(jié)果符合率較高，二者明顯相關(guān)（均P<0.01）。結(jié)論 CISH檢測 HER2基因擴(kuò)增結(jié)果與IHC檢測蛋白過表達(dá)及FISH結(jié)果高度一致，可作為乳腺癌HER2基因擴(kuò)增檢測的一項(xiàng)安全可靠的技術(shù)。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；HER-2；免疫組化；顯色原位雜交

[中圖分類號] R737.9 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 2095-0616（2013）05-143-02

研究報道指出，約20%～30%的乳腺癌患者能夠檢測到HER-2基因擴(kuò)增及過表達(dá)，該指標(biāo)的研究對判斷預(yù)后具有重要作用，同時也是乳腺癌患者靶向治療藥物-赫賽汀使用的唯一指標(biāo)[1]。CISH是近年來發(fā)展的一種新的檢測乳腺癌HER-2基因狀態(tài)的方法，為了對IHC及CISH兩種檢測方法進(jìn)行研究和對比，筆者選取了153例乳腺癌患者，回顧相關(guān)資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年6月～2012年10月，在本院經(jīng)病理學(xué)診斷的153例乳腺癌患者。年齡25～76歲，平均（48.2±7.8）歲。標(biāo)本用10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟切片（4 ?m），脫蠟入水，備用。

1.2 HER-2 IHC檢測

1.2.1 試劑 選用福州邁新生物技術(shù)有限公司的即用型非生物素免疫組化EnVision檢測試劑盒（KIT-9901）。

1.2.2 操作步驟 按照乳腺癌的HER-2免疫組化試劑盒的說明書操作。高壓修復(fù)；滴加50 ?L 3%過氧化氫，室溫孵育10 min，PBS沖洗；滴加一抗，室溫孵育60 min，PBS沖洗；滴加1滴聚合物，室溫孵育20 min，PBS沖洗；滴加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，溫育30 min；滴加100 ?L DAB顯色液，沖洗；蘇木素復(fù)染，封片。

1.2.3 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) （-） 完全沒有著色或少于10%癌細(xì)胞有胞膜著色；（+）：>10%的癌細(xì)胞呈現(xiàn)微弱、不完整的胞膜著色；（++）>10%的癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的胞膜著色；（+++）：>10%的癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的、完整的胞膜著色。

1.3 HER-2 CISH檢測

1.3.1 試劑 美國Zymed公司生產(chǎn)的地高辛標(biāo)記的HER-2原癌基因原位雜交探針和試劑盒（SPOT-Light HER-2 CISHTM試劑盒）。

1.3.2 操作步驟 按照Zymed SPOT-Light HER-2 CISHTM試劑盒說明書操作。切片蒸餾水洗后置加熱預(yù)處理液內(nèi)煮沸15 min；胃蛋白酶孵化15 min，脫水，涼干；每片滴加15?L地高辛標(biāo)記的HER-2探針，雜交膜封片，原位雜交儀內(nèi)95℃變性5 min；37℃濕盒孵育過夜；次日SSC沖洗液沖洗5 min；浸入濃度為3%雙氧水的甲醇溶液，放置10 min；濃度為0.01%的Tween-20 PBS液沖洗3遍；滴加CAS-BLOCK，室溫下孵育10 min；滴加鼠抗人的地高辛抗體，溫育30 min；DAB顯色30 min，沖洗；蘇木素復(fù)染，脫水，封片。

1.3.3 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) 在400倍顯微鏡下觀察，超過半數(shù)的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)存在1～5個信號點(diǎn)為無基因擴(kuò)增；超過半數(shù)的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)存在6～10個信號點(diǎn)為低度基因擴(kuò)增；超過半數(shù)的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)存在10個以上信號點(diǎn)，或是信號點(diǎn)聚集成團(tuán)狀、簇狀則為高度基因擴(kuò)增[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，采用x2檢驗(yàn)法檢驗(yàn)差異，當(dāng)P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HER-2 IHC檢測結(jié)果

陽性信號定位在細(xì)胞膜之上，為黃色（圖1）。153例乳腺癌標(biāo)本IHC檢測HER-2蛋白表達(dá)30例（-），32例（+），47例（++），44例（+++）。

1-1：×100倍；1-2：×400倍

圖1 HER-2 IHC蛋白表達(dá)乳腺癌的陽性信號定位在細(xì)胞膜，為黃色

2.2 兩種檢測方式的關(guān)系

CISH基因擴(kuò)增與HER-2 IHC（+++）表達(dá)結(jié)果符合率較高，為98%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01）。見表1。

3 討論

HER-2基因狀態(tài)不僅是預(yù)測乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素，同時還是赫賽汀靶向治療和輔助化療的重要參考指標(biāo)。檢測HER-2基因目前在實(shí)驗(yàn)室最為常用的方法有IHC、顯色原位雜交、熒光原位雜交[3-4]。IHC方法評估HER-2蛋白表達(dá)是目前首選的方法，但極易受到包括標(biāo)本固定液差異、切片制作時溫度、抗體特異性以及評判人員主觀因素等的影響，結(jié)果差異較大。FISH被譽(yù)為“金標(biāo)準(zhǔn)”[5]，結(jié)果可靠，受影響小，但只能在熒光顯微鏡下觀察，且設(shè)備、試劑昂貴、切片不能長期保存，國內(nèi)病理實(shí)驗(yàn)室使用較少。CISH是建立在DNA技術(shù)上的一種HER-2基因檢測方法，該方法通過普通顯微鏡能夠?qū)蛘Ｅc否和組織學(xué)形態(tài)的變化一起進(jìn)行觀察，切片能長期保存，具有簡單、快速、成本低、信號穩(wěn)定的特點(diǎn)。大量研究均證實(shí)了CISH與FISH的檢測結(jié)果具有高度的一致性（85%～100%）[6]。

據(jù)相關(guān)研究顯示，基因擴(kuò)增顯色原位雜交與免疫組化檢測具有較高的一致性，其符合率最高可達(dá)95%以上[7]。而本研究中，兩種方法對于IHC（+++）者的檢測結(jié)果一致性較高，兩組結(jié)果沒有顯著差異（P>0.05）。根據(jù)本研究結(jié)果，乳腺癌HER-2基因CISH檢測的敏感性及特異性都較高。

綜上所述，CISH檢測HER-2基因擴(kuò)增結(jié)果與IHC檢測蛋白過表達(dá)及FISH結(jié)果高度一致，可作為乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增檢測的一項(xiàng)安全可靠的技術(shù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王文義，王桂芝，張明智.熒光原位分子雜交技術(shù)檢測乳腺癌組織中HER-2基因的表達(dá)[J].醫(yī)藥論壇雜志，2011，13（7）：123-126.

[2] 安杰，符鼎，郭建昇，等.熒光原位雜交和免疫組化法檢測乳腺癌HER-2基因擴(kuò)增及蛋白表達(dá)的對比研究[J].山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2009，11（5）：211-212.

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[5] 柳光宇.曲妥珠單抗用于乳腺癌輔助治療的基本原則與策略[J].中國癌癥雜志，2009，06（3）：211-212.

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[7] 趙麗娟.ER、PR、pS2、C-erbB-2、Ki-67在乳腺癌新輔助化療前后的表達(dá)與化療療效的相關(guān)性研究[D].四川大學(xué)，2009：287-288.

（收稿日期：2013-01-24）