血液生化指標技術(shù)在科朗黃麻雞育種上的應(yīng)用（一）

劉敬壽　黃國潤　陳細明　寧中華

摘 要：采用紫外分光光度計法分別在412 nm和670 nm處測定不同顏色的蛋殼溶液的吸光值，同時測定血清中不同生化指標的含量。結(jié)果表明，原卟啉在4種顏色的蛋殼血清中的含量差異達到極顯著水平（P<0.01）；原卟啉在不同顏色的蛋殼中的含量與其相應(yīng)血清中含量為極顯著負相關(guān)（P <0.01）。利用原卟啉在不同類型雞血清中的含量及反光值的不同，對其后代幼雛進行選育，以便檢查該方法在育種上的準確性。

關(guān)鍵詞：原卟啉；育種；色素；血清

中圖分類號：S831.2 文獻標識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.004

改革開放30年來，國民經(jīng)濟迅速發(fā)展，國內(nèi)總體消費水平不斷提高，人們對雞蛋品質(zhì)及雞肉品質(zhì)的要求亦日益提高，與此同時，各主要育種公司為了滿足市場的需求，紛紛加快對優(yōu)良種雞的選育，種雞場對孵化率越來越重視。其中蛋品質(zhì)是衡量蛋雞生產(chǎn)性能的重要指標[1]，同樣也是蛋雞育種重要的選種指標。新科技的進展促進了動物育種的實踐，現(xiàn)在的我們處在一個新的時代，即生物技術(shù)時代。雖然對生物技術(shù)怎樣改變動物育種難以絕對化，但是，可以樂觀的預言：人類將很快創(chuàng)造出“設(shè)計動物”，即用基因來建造。但是，生物技術(shù)的進展對動物育種的影響范圍和程度將取決于它們的有效性、實用性以及成本。因此在分子生物技術(shù)難以在實際大規(guī)模的生產(chǎn)中應(yīng)用時，我們可以用血液中生化指標對育種進行實踐操作，即測定某一特定品種血清中某種特定指標的含量，對后代群體的育種選育從幼雛的血液測定開始，從而減少飼料、人力等資源[2]。中國農(nóng)業(yè)大學寧中華教授已經(jīng)著手開始利用此方法對紫殼蛋雞的選育。我國一些地方雞種中這種蛋的比例較高，在20世紀70年代以前出口到香港等地非常受歡迎。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗雞群來自北農(nóng)大種禽有限公司的褐殼雞群、紫殼雞群、白來航雞群、粉殼蛋雞群，每組選取30只抽血，用作標準曲線的制定，同時抽取臺山科朗現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司的黃麻雞群血樣300份。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

美國VARIAN公司生產(chǎn)的CaryEclipse型熒光分光度計；法國生產(chǎn)的JouanA13毛細管高速離心機；肝素抗凝劑：取一支12 500 U肝素抗凝劑，用0.68%氯化鈉溶液稀釋至25 mL（500 U·mL-1）；5%硅藻土生理鹽水懸浮液：稱取5 g硅藻土，以生理鹽水配制成100 mL；4∶1乙酸乙酯-冰乙酸混合液；0.5 mol·L-1鹽酸。

1.3 試驗步驟

（1）試驗各管按表1配制。

（2）分別渦旋混合15 s，然后1 369.55×g離心10 min。

（3）取3 mL上清液，各加0.5 mol·L-1的鹽酸4 mL，再混合5 min，吸去上層有機溶劑，取下層鹽酸溶液，狹縫寬度為20 nm，在激發(fā)慮片408 nm和散射慮片604 nm下測定吸光強度。

（4）取抗凝血0.03 mL于毛細管內(nèi)，再將盛血的毛細管放入高速離心機中離心，12 000 r·min-1，取出后測定每個血樣的紅細胞體積，然后用步驟（3）中得到的血樣吸收值除以每個血樣的紅細胞壓積，得到每單位紅細胞中游離原卟啉的相對含量。

1.4 試驗樣品的前處理

采用Ito等[3]的方法，將雞蛋蛋殼在80 ℃的條件下烘干12 h，將烘干的蛋殼進行稱質(zhì)量，然后研碎。每個個體取0.25 g蛋殼用4 mL溶解液（甲醇與濃鹽酸按2∶1的比例混合而成）溶解，將溶解液避光靜置12 h，以1 369.55×g離心45 min。最后用紫外分光光度計分別在412 nm和670 nm處測定蛋殼溶解液的吸光值。

1.5 標準曲線的制作

取原卟啉0.36 mg，膽綠素0.26 mg，分別溶于6 mL溶劑（甲醇∶濃鹽酸=2∶1）中，漩渦震蕩，避光溶解12 h，這樣分別制備成原卟啉標準原液和膽綠素標準品原液。使用5 mL大槍頭在若干空白的10 mL管中加入3 mL溶劑（甲醇∶濃鹽酸=2∶1），然后進行梯度稀釋，用同樣的方法分別制備成最高稀釋至512倍的原卟啉和膽綠素溶液。最后，用紫外分光光度計分別在412 nm和670 nm處測定蛋殼溶解液的吸光值。

1.6 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計方法

利用SAS 6.12軟件進行相關(guān)性分析、回歸分析和差異性檢測。數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標準差來表示。

2 結(jié)果與分析

從圖1中可以看出，4種顏色的蛋殼反光值有一個總的趨勢，即從白色蛋到褐殼蛋的反光值逐漸的降低，但是不同顏色的蛋殼反光值之間很難確定有一個明顯的界限，因此，很難用反光值作為某種顏色蛋殼的判定標準，只能將其作為某種蛋殼顏色的特征。

在育種工作的實際操作過程中，由于雞蛋顏色的確定是在母雞達到一定日齡后產(chǎn)蛋才能實現(xiàn)，所以那些不需要的雞群個體在此期間要耗費大量的人力、飼料等，從而大大增加了我們育種的成本，造成不必要的浪費，因此需要一種在分子生物技術(shù)不能大規(guī)模應(yīng)用的條件下，可以提前確定所需要個體的方法。

從表2可以發(fā)現(xiàn)，血清中原卟啉的相對含量從白殼蛋雞到褐殼蛋雞呈逐漸降低的趨勢，差異達到極顯著水平（P<0.01），而且這一趨勢與原卟啉在不同顏色的蛋殼中的含量趨勢是相反的。

在分子生物技術(shù)以前，最早有人提出利用血型作為育種上早期選擇的依據(jù)，各種動物的血型系統(tǒng)不同，表現(xiàn)型與基因型也不同，某系統(tǒng)的等位基因數(shù)為n，則其基因型數(shù)為n（n+1）/2[4-5]。在理論上，血型組合數(shù)為各血型系統(tǒng)基因數(shù)的乘積，但實際上數(shù)目很大。所以，除一卵雙生外，所有血型系統(tǒng)的基因型都相同的個體是很難見到的[6]。在此啟發(fā)下，我們可以用血液中生化指標對育種進行實踐操作，即測定某一特定品種血清中某種特定的含量對后代群體從幼雛開始測定，從而減少飼料、人力等資源[7-8]。臺山科朗現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司正在利用蛋殼中原卟啉總含量與血清中原卟啉含量的對應(yīng)關(guān)系，對尚未開產(chǎn)的純系雞群進行抽血檢測，測定其中含量后，與標準曲線進行比對，針對將來市場需要，確定留種雞只個體將來產(chǎn)蛋的顏色，利用早期選擇來減少后期的飼養(yǎng)成本。

3 結(jié)論與討論

血清中原卟啉的相對含量從白殼到褐殼蛋雞是逐漸降低的，差異達到極顯著水平（P<0.01），而且這一趨勢與原卟啉在各種顏色的蛋殼中的含量趨勢是相反的?？偭坎煌哪懢G素與原卟啉再按不同的比例沉積到蛋殼中[9]，就會形成深淺不同的各種顏色的蛋殼[10]。因此，我們可以用血液中生化指標對育種進行實踐操作，從而減少在育種中的經(jīng)濟浪費，提高育種工作效率 [11]。隨著科朗現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司在血清中某種物質(zhì)含量的利用技術(shù)的不斷成熟，在分子育種手段不能大規(guī)模應(yīng)用于現(xiàn)代育種的現(xiàn)實約束下，科朗育種將首先探索出一條新的育種路徑。

參考文獻：

[1] 牛金明.褐色種蛋殼色深淺與其孵化率的關(guān)系[J].中國家禽，2000，22（3）：31.

[2] 王克華，曲亮. 如皋黃雞產(chǎn)蛋性能與遺傳參數(shù)分析[J].中國畜牧雜志，2006，46（9）：12-14.

[3] Dal Barto L. Salmonella situation in lation americal with special reference to brazil[R].Germany，2011.

[4] 王金玉，陳國宏. 數(shù)量遺傳與動物育種[M].南京：東南大學出版社，2004：261-262.

[5] 王謙. 優(yōu)質(zhì)黃羽肉雞開產(chǎn)日齡選擇方法的研究[D].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學，2004.

[6] 孫宏進. 對發(fā)展優(yōu)質(zhì)地方家禽產(chǎn)業(yè)的思考[J].中國禽業(yè)導刊，2002（16）：261-262.

[7] 李國清. 雞球蟲病血[M].北京：中國農(nóng)業(yè)大學出版社，1988.

[8] 塞弗. 禽病學[M]. 蘇敬良，譯.第11版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：178.

[9] 吳清民. 獸醫(yī)傳染學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：252-255.

[10] 陳寬維，韓威. 我國黃羽肉雞育種成績及發(fā)展趨勢[J]. 中國家禽，2010，32（Z2）：30-34.

[11] 王伯法. 病理學技術(shù)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.