TNF—α和IL—6及IL—11在小兒急性腸套疊中測定及臨床意義

潘定坤

【摘 要】目的：測定血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）及白介素-11（IL-11）在小兒急性腸套疊中的濃度變化，探討TNF-α和IL-6及IL-11濃度變化在急性腸套疊發(fā)病中的作用及其臨床意義。方法：選擇25例小兒急性腸套疊患兒和19例對照組健康兒童，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測治療測腸套疊組術(shù)前、術(shù)后及對照組血清中TNF-α和IL-6及IL-11的濃度變化。結(jié)果：對照組血清TNF-α和IL-6及IL-11分別（42.67±12.34） pg/ml，（6.23±2.48） pg/ml，（13.25±5.34） pg/ml；小兒急性腸套疊灌腸復(fù)位前血清TNF-α和IL-6及IL-11分別為（283.1±145.36）pg/ml，（55.92±17.39） pg/ml，（53.69±18.33） pg/ml；灌腸復(fù)位成功后24小時TNF-α和IL-6及IL-11分別為（129.73±87.99）pg/ml、（18.64±6.93）pg/ml，（25.61±7.38）pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。且復(fù)位成功后TNF-α和IL-6及IL-11持續(xù)增高與復(fù)發(fā)密切相關(guān)。結(jié)論：TNF-α和IL-6及IL-11在小兒急性腸套疊發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，對于急性腸套疊的輔助診斷及判斷愈后有著重要的意義。

【關(guān)鍵詞】急性腸套疊；血清腫瘤壞死因子-α；白介素-6；白介素-11（IL-11）

嬰幼兒時期最常見的急腹癥就是小兒急性腸套疊，其發(fā)病率位居小兒外科急性腸梗阻的首位，嚴(yán)重威脅嬰幼兒身體健康，雖然很多學(xué)者對其發(fā)病機(jī)理做了大量的研究工作，也取得了很大進(jìn)展，但具體機(jī)制仍不明了。我們應(yīng)用ELISA法測神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者血清內(nèi)的NF-α和IL-6及IL-11表達(dá)情況，分析三者在腸套疊的發(fā)生和發(fā)展中的作用，以便為預(yù)防腸套疊的發(fā)生和復(fù)發(fā)提供一定的理論依據(jù)和途徑。

1 資料與方法

1.1一般資料 隨機(jī)收集我院兒科2008年10月至2009年6月具有典型臨床表現(xiàn)且經(jīng)彩超診斷確診的小兒急性腸套疊25例，分別于灌腸復(fù)位前、復(fù)位后24小時（h）抽取外周靜脈血2ml置于非抗凝管中。同時選擇健康對照組19例，無個人家庭過敏性疾病及其他變態(tài)反應(yīng)性疾病史，空腹抽取外周靜脈血2ml。所有標(biāo)本分別測定其血清中的TNF-α和IL-6及IL-11濃度。

1.2方法

用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）具體步驟嚴(yán)格依ELISA試劑盒產(chǎn)品說明書步驟進(jìn)行。將50μl的TNF-α和IL-6及IL-11標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加入預(yù)包被的酶標(biāo)板上，反復(fù)作標(biāo)準(zhǔn)品對倍稀釋建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。加入100 μl標(biāo)本于待測孔，混勻，37℃溫育120m in，洗滌；每孔中加入第一抗體工作液50ul，混勻，37℃溫育60 m in，洗滌；每孔加入酶標(biāo)抗體工作液100ul，混勻，37℃溫育60 m in，洗滌；每孔中加入底物工作液100ul，37℃避光溫育10min；然后每孔加入終止液50μl，在492nm處測吸光值（OD），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中人TNF-α和IL-6及IL-11濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析， 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ±s），組間比較采用t檢驗(yàn)和方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1腸套疊患兒灌腸復(fù)位治療前、后和對照組TNF-α和IL-6及IL-11水平變化腸套疊患兒和正常對照組血清相比TNF-α和IL-6及IL-11明顯增高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)前血清TNF-α和IL-6及IL-11濃度隨明顯高于術(shù)后者組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05，見表1。

2.2 腸套疊患兒復(fù)發(fā)和TNF-α和IL-6及IL-11水平的關(guān)系

在灌腸復(fù)位成功25例腸套疊患兒中，有5例24小時TNF-α持續(xù)高濃度，其中復(fù)發(fā)4例，復(fù)發(fā)率為80%； TNF-α降低的20例中復(fù)發(fā)2例，未復(fù)發(fā)18例，復(fù)發(fā)率僅為10%。有6例24小時IL-6持續(xù)高濃度，其中復(fù)發(fā)4例，復(fù)發(fā)率為66.67%；IL-6降低的119例中復(fù)發(fā)2例，未復(fù)發(fā)17例，復(fù)發(fā)率僅為10.53%。有3例24小時IL-11持續(xù)高濃度，其中復(fù)發(fā)2例，復(fù)發(fā)率為66.67%； IL-11降低的22例中復(fù)發(fā)3例，未復(fù)發(fā)19例，復(fù)發(fā)率僅為13.64%。

3 討論

小兒急性腸套疊的發(fā)病原因比較復(fù)雜，與小兒年齡、性別、病毒感染、機(jī)體的免疫狀態(tài)、飲食結(jié)構(gòu)及習(xí)慣的改變等都有密切關(guān)系，但是具體機(jī)制尚不清楚。胃腸的正常協(xié)調(diào)運(yùn)動有賴于神經(jīng)、免疫、內(nèi)分泌等因素組成的發(fā)雜網(wǎng)絡(luò)的聯(lián)合調(diào)節(jié)。而腸套疊是腸管痙攣和舒張失調(diào)為病理生理基礎(chǔ)的胃腸運(yùn)動功能紊亂性疾病，其中胃腸道炎癥和免疫反應(yīng)在腸套疊的形成中起著重要的作用。作為人體內(nèi)最大的淋巴器官，腸道局部的免疫炎癥反應(yīng)機(jī)制復(fù)雜。當(dāng)局部產(chǎn)生炎癥反應(yīng)時免疫細(xì)胞及由免疫細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)影響腸道平滑肌功能，改變胃腸運(yùn)動狀態(tài)進(jìn)而誘導(dǎo)腸套疊的發(fā)生。

腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是由脂多糖刺激單核-巨噬細(xì)胞分泌的一種內(nèi)源性致熱原蛋白質(zhì)。TNF-α不僅誘導(dǎo)發(fā)熱反應(yīng)，同時是具有誘導(dǎo)多種生物活性的炎性細(xì)胞因子，誘發(fā)腫瘤的發(fā)生且還可致腫瘤壞死的作用，在炎癥與腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。TNF-a具有強(qiáng)烈的刺激收縮腸道平滑肌，誘導(dǎo)多種炎癥介質(zhì)釋放，引起腸道炎癥和高反應(yīng)性等作用。研究表明TNF-α可以通過Nox2， MAPKs， NF-κB等通路促進(jìn)其表達(dá)[5]，當(dāng)給予其COX-2抑制劑時，起作用減弱。白介素是由活化的淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞及某些基質(zhì)細(xì)胞分泌的在炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)中起到十分重要作用的的多功能、高活性小分子多肽類物質(zhì)，其功能是在細(xì)胞間傳遞信息，刺激T和B淋巴細(xì)胞活化、增殖、分化。白細(xì)胞數(shù)量較多，其中IL-6和IL-11極為重要，在細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著多種效應(yīng)，同樣也調(diào)節(jié)著TNF-a和前列腺素等炎性因子的釋放[6-7]。為了確定TNF-α和IL-6及IL-11在急性腸套疊變化，我們應(yīng)用ELISA檢測了腸套疊組術(shù)前、術(shù)后及對照組血清中TNF-α和IL-6及IL-11的濃度變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組比，急性腸套疊患兒灌腸復(fù)位前TNF-α和IL-6及IL-11明顯升高，復(fù)位后急劇下降，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）.同時發(fā)現(xiàn)復(fù)位后24小時TNF-α和IL-6及IL-11濃度仍然較高者其復(fù)發(fā)率明顯較高。其結(jié)果與一些學(xué)者的報(bào)道大致相似，表明TNF-α和IL-6及IL-11在小兒急性腸套疊的發(fā)展中起著重要的作用。

總的來說TNF-α和IL-6及IL-11表達(dá)水平與小兒急性腸套疊的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，為預(yù)防急性腸套疊的的復(fù)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，指導(dǎo)臨床。但是由于本組研究收集的病例數(shù)量有限，且小兒急性腸套疊發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，TNF-α和IL-6及IL-11在急性腸套疊的具體作用機(jī)制和臨床上應(yīng)用仍有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1] Lee CW， Lin CC， Lee IT， et al. Activation and induction of cytosolic phospholipase A2 by TNF-α mediated through Nox2， MAPKs， NF-κB， and p300 in human trachealsmooth muscle cells[J]. J Cell Physiol， 2011， 226（8）：2103-14.

[2] Damera G， Zhao H， Wang M， et al. Ozone modulates IL-6 secretion in human airway epithelial andsmooth muscle cells[J]. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol， 2009， 296（4）：L674-83.

[3] Lee HT， Park SW， Kim M， et al. Interleukin-11 protects against renal ischemia and reperfusion injury[J]. Am J Physiol Renal Physiol， 2012， 303（8）：F1216-24.