威靈壯骨膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

馬凌風(fēng)

摘 要：目的：建立威靈壯骨膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對處方中的補(bǔ)骨脂和威靈仙進(jìn)行了定性鑒別研究；采用HPLC法測定淫羊藿苷的含量，選用Cromasil C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；乙腈-水（25：75）為流動相，檢測波長270nm，流速1.0ml/min。結(jié)果：TLC法可鑒別出補(bǔ)骨脂和威靈仙的特征斑點(diǎn)，專屬性強(qiáng)，分離度好；淫羊藿苷濃度在0.021～0.192mg/ml 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r=0.9994），平均回收率為99.38%，RSD=1.61%。結(jié)論：該方法簡便可行，可用于威靈壯骨膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：壯骨；HPLC；淫羊藿苷

1 儀器與試藥

日本島津高效液相色譜儀，泵LC-10ATVP，檢測器SPD-10AVP，EZ色譜工作站；淫羊藿苷對照品（供含量測定用，批號：110737-200414，中國藥品生物制品檢定所），補(bǔ)骨脂素對照品（供含量測定用，批號：110739-200511，中國藥品生物制品檢定所），齊墩果酸對照品（供含量測定用，批號：110709-200304，中國藥品生物制品檢定所）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純；樣品：威靈壯骨膠囊（自制，批號120101，120102，120103）。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 補(bǔ)骨脂的鑒別

取樣品5g，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加氨水2ml，靜置1小時，加三氯甲烷20ml，超聲30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素對照品，加乙酸乙酯制成每1ml中1mg的溶液，作為對照品溶液。再按處方量及制備工藝要求制成不含補(bǔ)骨脂的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下（254nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無干擾。

2.1.2 威靈仙的鑒別

取樣品10g，研細(xì)，加乙醇50ml，加熱回流2小時，濾過，濾液濃縮至20ml，加鹽酸3ml，加熱回流1小時，加水10ml，放冷，加石油醚（60～90℃）25ml振搖提取，石油醚蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇10ml溶解，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對照品，加無水乙醇制成每1ml含0.45mg的溶液，作為對照品溶液。再按處方量及制備工藝要求制成不含威靈仙的陰性對照樣品，同法制成陰性對照溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20：3：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，且陰性無干擾。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

Cromasil C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱；乙腈-水（25：75），檢測波長270nm，流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10μl，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取淫羊藿苷對照品5.32mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含淫羊藿苷濃度為0.2128mg/ml的母液，精密吸取5ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物約0.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20ml，稱定重量，超聲處理（功率250W，25kHz）1小時，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備

按威靈壯骨膠囊的制備工藝制成不含淫羊藿的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備成陰性對照溶液。

2.2.5 專屬性試驗(yàn)

取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時間的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間無干擾，見圖1。

2.2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取淫羊藿苷對照品母液（濃度：0.2128mg/ml）1、3、5、7、9ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。精密吸取上述溶液各10μl注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖。以峰面積（A）和濃度（C）作線性回歸，得回歸方程為A= 1746301C+1248，r=0.9994。結(jié)果表明淫羊藿苷進(jìn)樣濃度在0.021～0.192mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn)

取淫羊藿苷對照品溶液（濃度：0.106mg/ml），連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μl，記錄峰面積，計算RSD為0.81%。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別于0、1、1、3、4、5h注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，峰面積的RSD為0.95%。結(jié)果表明供試品溶液5小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品，按供試品溶液的配制方法配制6份供試品溶液，按上述方法測定淫羊藿苷的含量，結(jié)果淫羊藿苷的平均含量為每粒1.20mg，RSD為1.63%。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測含量的同一批樣品約333mg（淫羊藿苷的含量為每粒1.20mg），共6份，分別精密加入一定量的淫羊藿苷對照品，按上述供試品溶液制備方法制得供試品溶液6份，再按上述色譜條件測定。計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

2.2.11 樣品測定

取不同批號的3批樣品，按擬定的含量測定方法測定，以外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 本文通過實(shí)驗(yàn)，確定了威靈壯骨膠囊中補(bǔ)骨脂和威靈仙的薄層色譜鑒別方法，陰性對照表明其他成分對本法無干擾，說明該方法專屬性較強(qiáng)，結(jié)果可靠。

3.2 淫羊藿為本品的君藥，主要含黃酮類化合物、淫羊藿苷、木脂素、生物堿、揮發(fā)油等成分，有補(bǔ)腎壯陽；祛風(fēng)除濕；強(qiáng)筋鍵骨的功效，其中淫羊藿苷具有抗骨質(zhì)疏松作用和保護(hù)激素誘導(dǎo)的HBMEC損傷等作用[2，3]，故本品采用淫羊藿苷為考察對象，采用高效液相色譜測定淫羊藿中淫羊藿苷的含量，專屬性強(qiáng)，分離度好，準(zhǔn)確度高，可用于威靈壯骨膠囊的質(zhì)量控制，根據(jù)測定結(jié)果，暫定本品含淫羊藿以淫羊藿苷計每粒不得低于0.8mg。

參考文獻(xiàn)

[1]姜明章，馮景輝，孫大勇，等.穿龍骨刺膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].齊魯藥事，2011，30（3）：142-145.

[2]張金娟，文娛，張貴林，等.淫羊藿苷對骨質(zhì)疏松模型小鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)指標(biāo)的影響[J].貴州醫(yī)藥，2010，34（5）：404-405.

[3]王佰亮，李子榮，婁晉寧，等.淫羊藿苷對糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J].中國微循環(huán)，2009，13（6）：461-464.