HPLC 法測定通竅消炎丸中綠原酸的含量

劉家海

（河南省寧陵縣食品藥品檢驗所，寧陵476700）

HPLC 法測定通竅消炎丸中綠原酸的含量

劉家海

（河南省寧陵縣食品藥品檢驗所，寧陵476700）

目的 建立通竅消炎丸中綠原酸的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜條件為：色譜柱：Eclipse XDB-C18；流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；流速：1.0 ml·min-1；檢測波長：327nm。結(jié)果綠原酸在0.2556～0.7668mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.9999），平均回收率為98.75%，RSD＝1.26%（n＝6）。結(jié)論本方法操作簡便，專屬性強，結(jié)果準確，可用于通竅消炎丸的質(zhì)量控制。

綠原酸；高效液相色譜法；通竅消炎丸

通竅消炎丸，是由金銀花、辛夷、細辛、蒼耳子、白芷、當(dāng)歸等數(shù)十味藥材加工制成的復(fù)方制劑，具有辛芳開竅，活血止痛之功效，用于肺脾氣虛，邪滯鼻竅或氣滯血瘀，濕濁留滯鼻竅引起的鼻竇炎，上額竇炎，癥見鼻塞、流涕、頭痛等［1］。沒有定量指標，本文處方中金銀花的有效成分綠原酸為指標［2］，建立了通竅消炎丸中綠原酸的高效液相色譜測定方法，操作簡便，省時，準確，可作為通竅消炎丸的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，AUW-220D電子分析天平，5210DT超聲處理器；綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200413）；乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。通竅消炎丸（商丘市中醫(yī)院）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6mm×150mm，5um）

流動相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）為流動相；流速1.0 ml·min-1；檢測波長327nm；進樣量10μl。

2.2 線性關(guān)系考察取綠原酸對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。按照“2.1”項色譜條件，分別進樣6、8、10、12、14、16、18μl，記錄綠原酸峰面積值，以峰面積積分值（Y）對照品進樣量（X）進行線性回歸，得回歸方程：Y＝221.29X＋450.26r＝0.9999。結(jié)果表明，綠原酸對照品進樣量在0.2556～0.7668mg范圍內(nèi)與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.3 對照品溶液的制備取綠原酸對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加50%甲醇適量，振搖使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液及陰性對照溶液的制備取本品約10.0g，研細，精密稱定，置50ml量瓶中，加入50%甲醇適量，超聲處理30分鐘（功率250W，頻率35KHz），放冷，加50%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5ml，置25ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另取缺金銀花的其他味藥按處方工藝制成陰性制劑，按上述方法制備陰性對照溶液。

2.5 干擾實驗取上述3種溶液，按照上述色譜條件，分別注入高效液相色譜儀，進樣測定，記錄色譜圖，結(jié)果表明供試品溶液在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，有相應(yīng)的色譜峰，而陰性對照溶液在此保留時間無干擾。色譜圖見圖1。

A對照品溶液

圖1 高效液相色譜圖

2.6 精密度實驗取同一對照品溶液，重復(fù)進樣5次，每次10μl，記錄峰面積，RSD＝0.93%（n＝5），表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗取同一對照品溶液，分別在0、1、2、3、4、5、6、7、8h進樣測定，RSD＝1.02%，供試品溶液在8小時內(nèi)峰面積基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實驗稱取6份已測得綠原酸含量的供試品（含量為0.8067mg／g），每份約5.0g，精密稱定，置50ml量瓶中，另分別精密加入對照品溶液（濃度為0.8002mg／ml）5.00ml，制備成供試品溶液，分別測定綠原酸的含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（%）

2.8 樣品測定取3批樣品，按“2.4”項下方法制備供試液，各進樣10μl，按外標法計算綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品中綠原酸的含量

3 討論

綠原酸是金銀花的有效成分，本文建立的高效液相色譜法測定綠原酸的含量，該方法操作簡便，雜質(zhì)對測定無干擾，重復(fù)性好，對控制該制劑的內(nèi)在質(zhì)量具有重要意義。

本文參考有關(guān)文獻［3-4］，針對本制劑的制備工藝及輔料的特性和影響因素，比較了供試品加入50%甲醇直接超聲處理30min，60min；浸泡1h后超聲處理30min，60min；加熱回流30min，40min，60min等處理方法對綠原酸進行提取分離，實驗證明，超聲處理30min提取較為完全，且操作簡便快捷，故采用超聲提取30min。

［1］河南省食品藥品監(jiān)督管理局．河南省醫(yī)療機構(gòu)配制劑標準［S］．2007：3．

［2］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典［S］．2010年版．一部．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：205．

［3］王麗英，王東文，王勇敢．HPLC法測定清肺消咳顆粒中綠原酸的含量［J］．中國藥師，2008，11（4）：432-434．

［4］袁欣．HPLC法測定不同廠家銀黃膠囊中綠原酸和黃芩苷的含量［J］．中國藥師，2007，10（07）：679-680．

De t e r mina tio n o f Chlo r o ge nic Acid in To n gqiao xiao y an Pill b y HPL C

Liu Jiahai

(N ingling Institute for Food and D rug Control,N ingling County,Henan p rovince,476700,China)

Objective To set up a method of chlorogenic acid determination in Tongqiaoxiaoyan pill．Methodshe content of chlorogenic acid was determined by HPLC．The chromatographic system consisted of C18 column，using acetonitrile-0.4%phosphate solution（13∶87）as mobile phase．The content was detected at a waveleng of 327 nm，the flow rate was 1.0ml·min-1．ResultsThe chlorogenic acid have a good tincar rolatim in the range of 0.2556～0.7668mg（r＝0.9999），the average recovery was 98.75%and RSD＝1.26%（n＝6）．ConolusionThe established method is simple，sensitive and accuracy．It can be used for quality control of Tongqiaoxiaoyan pill．

Chlorogenic acid；HPLC；Tongqiaoxiaoyan pill

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.20.106

1672-2779（2013）-20-0157-02

楊 杰

2013-08-10）