乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中拓撲異構(gòu)酶Ⅱ等相關(guān)因素表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系研究

王 蒙，張程達，李 真，劉秀瑋，劉東升，孟 新，張衛(wèi)東

目前乳腺癌已成為女性最常見的惡性腫瘤之一，且其發(fā)病率逐年升高、發(fā)病年齡也趨于年輕化[1]。我國乳腺癌發(fā)病率也呈迅猛上升的趨勢，預(yù)計截至2021年，55～69歲的女性乳腺癌發(fā)病率將會達到100/10萬[2]。有研究表明，遠處轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者治療效果及預(yù)后情況的重要因素和主要致死原因，而淋巴道播散即為一種乳腺癌最重要的轉(zhuǎn)移途徑[3-5]。本研究采用免疫組織化學(xué)-SP法測定了101例乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者病理組織中雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、C-erbB-2基因、拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TopoisomeraseⅡ)及nm23基因等的表達，其中TopoisomeraseⅡ在國內(nèi)外相關(guān)研究中多側(cè)重于其在化療方案方面的意義，對其與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)聯(lián)性的研究相對較少。本研究就以上指標結(jié)合相關(guān)臨床因素，重點探討其與乳腺浸潤性導(dǎo)管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，力求為患者的預(yù)后及診療方案提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支持。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年6月—2011年6月于河南省人民醫(yī)院就診并接受乳腺癌改良根治術(shù)的乳腺癌患者的病歷記錄及病理診斷資料。篩選標準：(1)病理類型為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌；(2)病理診斷項目及臨床相關(guān)資料完整。共101例患者進入統(tǒng)計分析，均為女性。

1.2 試驗試劑 即用型鼠抗人ER、PR、Ki-67、nm23基因、TopoisomeraseⅡ單克隆抗體，均購自北京巾杉金橋生物技術(shù)有限公司；堿性磷酸酶標記羊抗兔或鼠IgG聚合物(二抗)等，購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 研究方法 101例患者標本均為手術(shù)切除的乳腺癌組織。采用免疫組織化學(xué)-SP法對手術(shù)標本進行免疫組化染色,嚴格按照試劑盒說明書進行實驗操作:首先用10%的甲醛溶液固定標本，接下來組織脫水、組織透明、組織浸蠟及切片染色。然后經(jīng)一抗、二抗孵育，3，3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色后封片。

1.4 結(jié)果判定 病理組織學(xué)的分級標準采用改良Bloom-Richardson分級；ER、PR 陽性細胞的判斷標準，TopoisomeraseⅡ、nm23基因及C-erbB-2基因蛋白表達的結(jié)果判定遵照相關(guān)文獻中Hercep Test等評分標準[6-8]。染色評分標準：如果出現(xiàn)顯色不清或者顯色不均勻則判定為0分；染色為淺黃色則判定為1分；染色為棕黃色則判定為2分；出現(xiàn)深褐色染色則判定為3分。綜合的評分標準為：0～1分評為陰性(-)；2～3分評為弱陽性(+)；4～5分評為中度陽性(++)；>5分評為強陽性(+++)[9]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進行分析。對病理檢測采用列聯(lián)表χ2檢驗進行因素分析，檢驗水準為α=0.05。定義乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否為因變量，其他單因素篩選有意義的影響因素為自變量，進行多因素非條件Logistic 回歸分析，計算其OR值及95%CI、相應(yīng)P值等。

2 結(jié)果

2.1 基本情況 101例女性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者68例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者33例，轉(zhuǎn)移發(fā)生率為67%。全組發(fā)病年齡為28～85歲，平均(50.3±8.9)歲。

2.2 相關(guān)激素受體的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析 不同ER、PR的表達梯度患者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。不同C-erbB-2基因的表達梯度患者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C-erbB-2(+++)組的轉(zhuǎn)移發(fā)生率最高，為81.5%；C-erbB-2(-)組的轉(zhuǎn)移發(fā)生率最低，為18.2%(見表1)。

2.3 TopoisomeraseⅡ、nm23基因的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析 TopoisomeraseⅡ(-)患者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率與TopoisomeraseⅡ(+)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。nm23基因(-)患者腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率與nm23基因(+)比較，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05，見表2)。

2.4 多因素Logistic回歸分析 對上述單因素篩選出的具有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)因素進行多因素非條件Logistic 回歸分析，采用篩選變量方法(即Forward Wald法)，進入變量α=0.05。分析結(jié)果顯示，TopoisomeraseⅡ是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險因素，而且是乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的強危險因素(OR>3)；C-erbB-2(OR=1.848，P=0.041)高表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)；而nm23基因(OR=0.151，P=0.008)的回歸系數(shù)β為負值，且OR<1，即為保護因素(見表3)。

表1 相關(guān)激素受體的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系
Table1 The relationship between relevant hormone receptor expressions and axillary lymph node metastasis

轉(zhuǎn)移情況(例)有轉(zhuǎn)移 無轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移發(fā)生率(%)χ2值P值ER1 6580 646 -171160 7 +261072 2 ++13861 9 +++12475 0PR4 5270 210 -261563 4 +341372 3 ++7277 8 +++1325 0C-erbB-214 7180 002 -2918 2 +231069 7 ++21970 0 +++22581 5

注：ER=雌激素受體，PR=孕激素受體

表2 TopoisomeraseⅡ、nm23基因的表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系
Table2 The relationship between TopoisomeraseⅡ，nm23 gene expression and axillary lymph node metastasis

轉(zhuǎn)移情況(例)有轉(zhuǎn)移 無轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移發(fā)生率(%)χ2值P值TopoisomeraseⅡ9 9900 002 -141745 2 +541677 1nm23基因9 4040 002 -34685 0 +342755 7

注：Topoisomerase Ⅱ=拓撲異構(gòu)酶Ⅱ

表3 乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險因素多因素Logistic 回歸分析
Table3 Logistic regression analysis of the risk factors of lymph node metastasis of breast cancer

因素βSEWaldχ2P值OR值95%CInm23基因-1 8920 709 7 132 0 0080 151(0 038，0 604)TopoisomeraseⅡ 2 1830 66010 9510 0018 870(2 435，32 310)C-erbB-2 0 6140 301 4 164 0 0411 848(1 025，3 335)

3 討論

本研究結(jié)果支持C-erbB-2基因的陽性表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有關(guān)。原癌基因C-erbB-2，又名HER-2或者HER-2/neu，屬于人類表皮生長因子受體 (EGFR)家族的第二個成員，位于染色體17q21上，在細胞的信號傳導(dǎo)中發(fā)揮著重要的作用，也是細胞增殖、分化、轉(zhuǎn)移、存活和死亡的重要調(diào)節(jié)因子[10]。曾有相關(guān)研究提出：C-erbB-2基因的表達情況不僅與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的數(shù)目有相關(guān)關(guān)系[11-12]。這均提示C-erbB-2基因的準確檢測可以更好地預(yù)測患者是否會出現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、指導(dǎo)評估乳腺癌患者的預(yù)后，有助于患者及時、準確地選擇針對性治療方案。

本研究中多因素Logistic分析結(jié)果亦納入了TopoisomeraseⅡ和nm23基因，且統(tǒng)計分析顯示Topoisomerase Ⅱ是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險因素，而且是乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的強危險因素。而nm23基因低表達是腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險因素。這兩項指標在國內(nèi)外關(guān)于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面的研究尚且較少，但有國外相關(guān)文獻支持上述結(jié)果[13-14]。

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個極為復(fù)雜且多因素、多步驟、多進程和多基因改變的過程，同許多生物學(xué)的指標均有密切的相關(guān)性[15-16]。這就要求在不斷的探索研究中，綜合考慮多種因素，應(yīng)用多因素分析的方法，結(jié)合各個研究方法之長，才有可能探知這一復(fù)雜的機制及控制方法。患者腋窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移狀態(tài)也可作為指導(dǎo)乳腺癌患者治療方法、手術(shù)術(shù)式、生存預(yù)后的重要指標之一，但是nm23基因及C-erb-2基因等生物學(xué)指標也可是其獨立的影響因素。正確的檢測分析及應(yīng)用這些指標對乳腺癌患者的早診斷、早治療有很大的指導(dǎo)意義[17]。

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