河南漢族人群12個X-STR基因座的遺傳多態(tài)性

劉亞舉，蘇偉民，岳俊濤，史紹杏，郭利紅

（1.許昌市公安局刑事科學技術研究所，河南許昌461000；2.長葛市公安局刑偵大隊，河南長葛461500；3.南陽市公安局刑事科學技術研究所，河南南陽473000；4.河南省公安廳刑事科學技術研究所，河南鄭州450003）

采用Investigator Argus X-12復合擴增系統(tǒng)對河南漢族人群12個X-STR基因座的遺傳多態(tài)性進行調查，獲得了這12個X-STR基因座的河南漢族人群遺傳學數據，旨在為法醫(yī)學應用及群體遺傳學研究提供基礎數據，報道如下。

1 材料與方法

538例河南漢族無關個體紙質血樣取自實驗室日常建庫，每個樣本均有條碼標記，其中男性269名，女性269名。

采用BSD-QP型打孔機按直徑3.2 mm取樣，檢材置于96孔板管孔內，每板中待測樣本90個。采用sbeadex?forensic kit（英國LGC有限公司）提取基因組DNA，參照Investigator Argus X-12試劑盒（德國QIAGEN公司）說明書進行X-STR復合擴增。PCR擴增體系為8 μL，其中反應混合物A（包含Mg2+、dNTP和BSA）1.6μL，引物0.8μL，Taq DNA聚合酶0.2μL，純水4.9μL，模板0.5μL。熱循環(huán)參數：94℃4min；96℃30s，63℃120s，72℃75s，5個循環(huán)；94℃30s，60℃120s，72℃75s，25個循環(huán)；68℃60 min；10℃保溫。然后取1μL擴增產物、DNA size standard 550（標記橙色熒光素BTO）0.5μL和去離子甲酰胺10μL混合，95℃變性3min后，冰浴3min，置3500XL型遺傳分析儀上進行全自動毛細管電泳，Collection軟件收集數據，用GeneMapper ID-X軟件進行等位基因分型。

用PowerMarker v3.25軟件[1-2]分別統(tǒng)計269名男性個體和269名女性個體在12個X-STR基因座的等位基因頻率。用Arlequin v3.5軟件對男性群體和女性群體之間各基因座的等位基因頻率分布差異進行Fisher’s精確檢驗，并對12個X-STR基因座在女性群體中的分布進行Hardy-Weinberg平衡檢驗。用PowerMarker v3.25軟件和Cervus 3.0軟件統(tǒng)計12個X-STR基因座在538名河南漢族無關個體中的等位基因頻率，登陸http://www.chrx-str.org網站[3]使用在線計算功能，用男女合并后數據計算所得等位基因頻率，統(tǒng)計分析各個基因座在男性群體的個人識別率（DPM）、在女性群體的個人識別率（DPF）、雜合度（H）、三聯(lián)體平均非父排除率（MECtrio）、二聯(lián)體平均非父排除率（MECduo）和多態(tài)信息含量（PIC）等群體遺傳學參數[4-5]。

2 結果與討論

對12個X-STR基因座在男性和女性群體中的等位基因頻率分別進行計算，經Fisher’s精確檢驗后，12個X-STR基因座的等位基因在男性和女性群體中的分布差異無統(tǒng)計學意義，故計算12個X-STR基因座在538名無關個體中的等位基因頻率，結果見表1，等位基因分型標準物之外的稀有等位基因（offladder allele）被檢出。采用Arlequin v3.5軟件對12個X-STR基因座在女性群體中的Hardy-Weinberg平衡進行檢驗，發(fā)現(xiàn)各基因座均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），基于總體頻率數據計算12個X-STR基因座的群體遺傳學參數，結果見表2。

本研究中，12個X-STR基因座在河南漢族人群中共檢出180個等位基因，其中DXS10135基因座等位基因數最多，為26個；DXS7423基因座等位基因數最少，為5個。這12個X-STR基因座在河南漢族人群中的H值為0.504 4～0.911 6，PIC值為0.426 2～0.9048。多態(tài)性分析結果表明，12個X-STR基因座中，DXS7423具有中度多態(tài)性，其余11個基因座均具有高度多態(tài)性（PIC＞0.5，H＞0.5）。這12個X-STR基因座在河南漢族男性群體和女性群體中的累積個人識別率（CDP）分別為1-2.2105×10-9、1-2.2049×10-15，在河南漢族三聯(lián)體和二聯(lián)體中的累積平均非父排除率（MEC）分別為1-1.6496×10-6、1-9.3067×10-9。

本研究顯示，Investigator Argus X-12系統(tǒng)在河南漢族人群具有良好的多態(tài)性，其系統(tǒng)效能達到了法醫(yī)DNA檢驗的要求，對法醫(yī)學個人識別和親權鑒定案件，尤其是能夠為疑難復雜特殊親權案件的鑒定提供有效的手段，在河南漢族人群中具有較高的應用價值。

表1 河南漢族人群12個X-STR基因座的等位基因頻率分布（n＝538）

表2 河南漢族人群12個X-STR基因座的群體遺傳學參數（n＝538）

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