原發(fā)性布加綜含征相關(guān)致病基因的研究進(jìn)展

賈江坤，申 權(quán)，薛煥洲

(鄭州大學(xué)人民醫(yī)院肝膽外科 河南鄭州 450003)

布加綜含征(Budd Chiarisyndrome，B-CS)系指肝靜脈和/或下腔靜脈肝段血流受阻引起的伴或不伴有下腔靜脈高壓征的肝后性門(mén)脈高壓癥［1］。B-CS的病因?qū)W十分復(fù)雜，并隨地區(qū)、民族、性別、年齡不同而不同，我國(guó)是B-CS高發(fā)地區(qū)，其發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于國(guó)外的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)字，大多集中在河南、山東、安徽、河北、山西、陜西和東北地區(qū)，并有逐漸升高趨勢(shì)。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的進(jìn)展，致病基因的研究越來(lái)越受到重視，原發(fā)性B-CS相關(guān)致病基因的研究也有了新的進(jìn)展，本文就此綜述如下。

1 原發(fā)性B-CS與相關(guān)致病基因的關(guān)系

1.1 FVLeiden突變和原發(fā)性B-CS的關(guān)系 因子v突變?cè)斐煽够罨鞍證(RAPC)現(xiàn)象，即人體1號(hào)染色體的1691位點(diǎn)發(fā)生的點(diǎn)突變，其位點(diǎn)上的G－A突變，導(dǎo)致氨基酸肽鏈506位點(diǎn)上的精氪酸被谷氨酸取代，引起血液高凝狀態(tài)，肝靜脈或下腔靜脈血栓形成而發(fā)病［2］。

Denninger等［3］報(bào)道了首例FVLeiden雜合性突變的B-CS患者，1位21歲的女性。通過(guò)對(duì)其家系的檢查，發(fā)現(xiàn)其母親存在APCR現(xiàn)象，DNA分析顯示患者及其母親均為FVLeiden雜合性突變。國(guó)內(nèi)馮博［4］報(bào)道了對(duì)6例家族性B-CS患者、25例散發(fā)性B-CS患者及31例健康對(duì)照個(gè)體進(jìn)行的FVLeiden突變分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)25例散發(fā)性B-CS患者無(wú)FVLeiden突變陽(yáng)性病例，而6例家族性B-CS患者中有4例為FVLeiden雜合性突變。這些都說(shuō)明FVLeiden突變引起的血液高凝狀態(tài)可能是家族性B-CS患者發(fā)病的內(nèi)因。

Nezakatgoo等［5］報(bào)道了1對(duì)13歲的孿生姐妹均為FVLeiden雜合性突變，同時(shí)發(fā)生B-CS，其中1個(gè)為急性發(fā)作，并導(dǎo)致爆發(fā)性肝衰竭，患者經(jīng)肝移植而治愈，其APCR現(xiàn)象也于肝移植后恢復(fù)正常;另1個(gè)則被診斷為廣泛的靜脈血栓形成，包括下腔靜脈、門(mén)靜脈及肝靜脈的血栓形成，患者經(jīng)過(guò)積極的抗凝治療而成功治愈。對(duì)患者家系的調(diào)查顯示她們的父親及兄長(zhǎng)均是FVLeiden突變的攜帶者。

1.2 FIIG20210A突變與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 凝血酶原即凝血因子II(FII)，是凝血酶的前體蛋白。它對(duì)于平衡機(jī)體促凝和抗凝作用這對(duì)矛盾是十分重要的。一方面，它通過(guò)正性反饋環(huán)促進(jìn)凝血性［6］;另一方面，它也可以通過(guò)蛋白C系統(tǒng)，促發(fā)抗凝活性14710FII定位于llpll—q12，該基因總長(zhǎng)21 kbp，包含14個(gè)外顯子和13個(gè)內(nèi)含子以及5’非翻譯區(qū)和3’端非翻譯區(qū)，它們?cè)诨虮磉_(dá)中起著重要作用［7］。

Poort［8］發(fā)現(xiàn) FII基因 G20210A 突變和FII水平升高有顯著相關(guān)性，該點(diǎn)發(fā)生突變可使靜脈血栓形成危險(xiǎn)性增高3倍，致使靜脈內(nèi)凝血機(jī)制發(fā)生異常，易形成B-CS。

Bucciarelli等［9］于1998年報(bào)道了首例FIIG20210A突變雜合子的 B-CS患者后，又有數(shù)例［10］報(bào)道 FIIG20210A突變及FVleiden突變同時(shí)發(fā)生的B-CS患者，其中Minnema等報(bào)道1例青年女性B-CS患者及其父親均為FⅡG20210A及FVleiden突變雜合子，作者認(rèn)為B-CS的發(fā)生與FIIG20210A突變有一定的關(guān)系，如與其他高危因素同時(shí)存在，則B-CS發(fā)病的危險(xiǎn)性更高。

鄭紅等［11］利用PCR檢測(cè)了53例布-加綜合征患者與106例正常對(duì)照的FVLeiden和FⅡG20210A的突變情況，并加以對(duì)照分析，53例B-CS患者與106例正常對(duì)照FVLeiden和FⅡG20210A基因多態(tài)，均為野生型，未發(fā)現(xiàn)純合突變型與雜合突變型.以為FVLeiden和FⅡG20210A在中國(guó)B-CS形成過(guò)程中的作用極小。

1.3 MTHFRC667T突變與原發(fā)性B-CS的關(guān)系MTHFR基因位于染色體 lp36.3，eDNA序列長(zhǎng)2.2 kb，包含11個(gè)外顯子，長(zhǎng)度從102～432 bp，內(nèi)含子250～1 500 bp［12］。MTHFR內(nèi)存在十余種多態(tài)位點(diǎn)，其中MTHFRC677T突變是由MTHFR基因第677位密碼子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)置換而產(chǎn)生，導(dǎo)致其編碼的丙氨酸(CCU)被纈氨酸(CUU)所取代。MTHFR基因突變可引起MTHFR缺乏或活性降低，使同型半胱氨酸向蛋氨酸的轉(zhuǎn)化出現(xiàn)障礙，血液中HCY濃度上升，可造成內(nèi)皮損傷和功能異常，刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，引起血管舒縮因子平衡紊亂，從而引起靜脈血栓。Li X M等［13］對(duì)41例B-CS患者及80例健康對(duì)照個(gè)體的血漿同型半胱氨酸及MTHFRC667T進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)B-CS病例組的平均血漿同型半胱胺酸水平明顯高于對(duì)照組，表明同型半胱胺酸血癥和MTHFRC667T突變均為B-CS發(fā)病的高危因子。

田浩等［14］對(duì)60例青年肝靜脈型B-CS患者全血提取DNA基因組，PCR-RFLP檢測(cè)MTHFR基因第677位點(diǎn)基因多態(tài)性，結(jié)果BCS組血漿Hcy濃度和MTHFR 677位點(diǎn)多態(tài)性純合子突變率明顯高于對(duì)照組，認(rèn)為青年肝靜脈型 BCS血漿存在高 Hcy濃度狀態(tài)，MTHFR C677T基因的純合子突變與高Hcy血癥有相關(guān)性.

1.4 JAK2V617F的突變與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 JAK2激酶基因第617位的突變發(fā)生在假激酶結(jié)構(gòu)域的JH2區(qū)域，纈氨酸殘基被苯丙氨酸殘基取代。JAK2V617F突變導(dǎo)致其獨(dú)立或高敏感于生長(zhǎng)因子受體，持續(xù)不斷的產(chǎn)生激活信號(hào)，最終導(dǎo)致血液障礙而表現(xiàn)出血液失調(diào)綜合癥［15］。

2007年西班牙學(xué)者報(bào)道1例36歲女性急性B-CS患者同時(shí)具有FVLeiden突變及JAK2V617F突變［16］。最近發(fā)現(xiàn)日本1名年輕女性B-CS患者也存在JAK2V617F 突變［17］。

1.5 因子VII基因多態(tài)性與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 增加的因子七(FVII)和相關(guān)的因素七基因多態(tài)性是眾所周知的動(dòng)脈血栓形成的危險(xiǎn)因素。據(jù)報(bào)，約三分之一的因子七水平變化是由于多態(tài)性與因子 Ⅶ 基因［18］。雖然有一大型系列動(dòng)脈血栓形成與它們關(guān)聯(lián)的研究，但很少有研究報(bào)告了靜脈血栓［19］他們可能的聯(lián)系。

1.6 FⅫVal34Leu與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 FⅫ是一種轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶，在血液中以酶原形式存在。FⅫA亞單位2號(hào)外顯子34號(hào)密碼子突變，使距離凝血酶激活位點(diǎn)僅3個(gè)氨基酸殘基的纈氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?，F(xiàn)Ⅻ34Leu等位基因可改變形成的纖維蛋白結(jié)構(gòu)，對(duì)抗血栓形成，是血栓性疾病的保護(hù)性遺傳因素［20］。

賀穎等［21］應(yīng)用PCR－RFLP方法對(duì)41例B-CS患者與70名健康對(duì)照進(jìn)行了FⅫVal34Leu多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)，4l例B-CS患者該位點(diǎn)變異攜帶者頻率為0，70名健康對(duì)照中也未檢測(cè)到FⅫVal34Leu突變的雜合子，攜帶者頻率亦為0;研究提示FⅫVal34Leu變異與漢族人群B-CS發(fā)病之間缺乏明顯的相關(guān)性。

1.7 一氧化氮合酶基因4a/b VNTR與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 一氧化氮為內(nèi)皮細(xì)胞舒血管因子，催化NO生物合成的酶稱為一氧化氮合酶。人類eNOs基因位于第7號(hào)染色體7q35－36［22］，為單拷貝基因，含26個(gè)外顯子和25個(gè)內(nèi)含子，1994年MiyaIlam等［23］研究了eNOS基因內(nèi)含子4上的27 bp數(shù)目可變的串聯(lián)重復(fù)序列(VNTR)，根據(jù)重復(fù)次數(shù)不同有兩種等位基因，重復(fù)4次為a等位基因，重復(fù)5次為b等位基因。近年來(lái)國(guó)外一些學(xué)者對(duì)eNOS基因4a/bVNTR多態(tài)性進(jìn)行了多種研究，發(fā)現(xiàn)eNOS基因多態(tài)性與許多心、腦血管疾病有關(guān)。

連建華等［24］報(bào)道河南漢族正常人60例，B-CS患者40例，取2組外周血，PCR法擴(kuò)增eNOS基因第4內(nèi)含子的特異片段，對(duì)2組VNTR的基因型頻率與等位基因頻率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析示:eNOS基因VNTR均存在a、b 2種等位基因以及a/b、b/b和a/a 3種基因型.以為eNOS基因4a/b VNTR多態(tài)可能不是河南漢族人B-CS發(fā)病的遺傳性危險(xiǎn)因素。

1.8 VEGF與原發(fā)性B-CS的關(guān)系 血管內(nèi)皮具有重要的內(nèi)分泌功能，正常血管內(nèi)皮主要功能是抑制血管平滑肌收縮、血小板聚集、血管平滑肌細(xì)胞增生等，在血管內(nèi)皮損傷或各種不良因素刺激下，會(huì)引起血管通透性增加、內(nèi)皮結(jié)構(gòu)性損害、內(nèi)皮細(xì)胞脫落、修復(fù)等血管內(nèi)皮功能失調(diào)［25］。

孫玉嶺等［26］血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1在布-加綜合征肝臟中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行了研究。表明VEGF在B-CS患者肝臟中的表達(dá)增強(qiáng)且與肝纖維化的程度呈正相關(guān);VEGF與MVD在B-CS患者肝臟中的表達(dá)呈正相關(guān)，且B-CS患者的肝臟中的MVD遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于肝內(nèi)型門(mén)靜脈高壓患者。認(rèn)為VEGF和TIMP-1在B-CS和肝內(nèi)型門(mén)靜脈高壓的肝臟中的表達(dá)異常可能是B-CS肝纖維化逆轉(zhuǎn)和不同預(yù)后的內(nèi)在原因。

韓新強(qiáng)等［27］探討下腔靜脈膜性阻塞型布-加綜合征患者中血管內(nèi)皮損傷在隔膜形成過(guò)程中發(fā)揮的作用。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)下腔靜脈膜性阻塞(MOVC)和節(jié)段性阻塞患者下腔靜脈血液中VEGF的含量，并與非B-CS對(duì)照組對(duì)比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果MOVC患者下腔靜脈血液中VEGF含量明顯高于節(jié)段性阻塞B-CS患者及非B-CS對(duì)照組患者，節(jié)段性阻塞B-CS患者與非B-CS對(duì)照組患者下腔靜脈血液中VEGF無(wú)明顯差異，認(rèn)為血管內(nèi)皮損傷是下腔靜脈隔膜形成的激發(fā)因素之一。

2 結(jié)語(yǔ)及展望

越來(lái)越多的研究結(jié)果表明B-CS的發(fā)病存在種族差異性［28］。國(guó)外學(xué)者認(rèn)為原發(fā)性B-CS起因于凝血機(jī)制異常，F(xiàn)VLeiden、FIIG20210A、MTHFRC667T、JAK2V617F的突變及凝血因子VII、VIII Val34Leu、一氧化氮合酶基因4a/b VNTR基因多態(tài)性、VEGF的相關(guān)性說(shuō)明BCS發(fā)病可能是不同的發(fā)病機(jī)制綜合作用的結(jié)果。但是，國(guó)外的致病基因國(guó)內(nèi)的大多不支持。我國(guó)B-CS的發(fā)病系多基因遺傳性復(fù)雜疾病。以河南，山東，安徽，江蘇等地區(qū)多發(fā)，有地域性，而且常有父子，兄弟，堂/表兄弟間發(fā)病，有家族聚集性發(fā)病現(xiàn)象，符合多基因遺傳性復(fù)雜疾病的發(fā)病規(guī)律。近年來(lái)我國(guó)學(xué)者對(duì)國(guó)內(nèi)B-CS的致病因素方面亦做了許多有益的探索。肖培瑞等［29］調(diào)查分析了菏澤地區(qū)布加綜合征的地理分布與飲用水碘含量的關(guān)系，表明布-加綜合征的發(fā)生可能與飲水中碘含量過(guò)高有關(guān)，提示了B-CS的發(fā)病可能與環(huán)境因素有關(guān)的一面。這些研究結(jié)果均支持我國(guó)B-CS的發(fā)病系多基因遺傳性復(fù)雜疾病。

全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)正日漸成為破解多基因遺傳性復(fù)雜疾病致病基因的“利器”。隨著人類全基因組計(jì)劃的完成，第三代遺傳標(biāo)記單核苷酸多態(tài)(SNP)被發(fā)現(xiàn)是人類基因組內(nèi)分布最為廣泛的基因序列變異，并被迅速、廣泛應(yīng)用到復(fù)雜疾病的研究中，相繼發(fā)現(xiàn)了許多與復(fù)雜疾病關(guān)聯(lián)的SNPs。隨著國(guó)際人類基因組計(jì)劃測(cè)序完成和基于人類基因組分布最為廣泛的序列變異——SNP的單體型圖譜構(gòu)建完成，人類遺傳學(xué)研究最近正在進(jìn)入一個(gè)新的時(shí)期。所有的這些進(jìn)步使得在全基因組范圍篩檢與疾病關(guān)聯(lián)的SNP方法成為可能。Zuo等［50］的研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用GWAS時(shí)即使DNA成對(duì)等位基因頻率的估計(jì)存在一定的誤差，當(dāng)病例與對(duì)照組間等位基因頻率的差異不小于0.05，足夠的樣本量，至少1個(gè)與疾病相關(guān)的基因位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)的概率將大于0.9。由此可以設(shè)想將GWAS這一突破性新技術(shù)應(yīng)用于我國(guó)B-CS發(fā)病機(jī)制的研究，尋找出我國(guó)B-CS發(fā)病的致病基因?qū)⑹菢O有希望的。

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