動(dòng)物組織中抗生素殘留研究進(jìn)展

張亞莉,哈 婧,趙 靜,張妍君

(1.河北科技大學(xué)理學(xué)院，河北石家莊 050018；2.河北科技大學(xué)化學(xué)與制藥工程學(xué)院，河北石家莊 050018)

抗生素是指由細(xì)菌、放線(xiàn)菌、真菌等微生物經(jīng)過(guò)培養(yǎng)而得到的產(chǎn)物，或用化學(xué)半合成方法制造的相同或類(lèi)似的物質(zhì)，在低濃度下對(duì)其他微生物有抑制生長(zhǎng)或殺滅作用?，F(xiàn)在臨床常用的抗生素有微生物培養(yǎng)液中提取物以及用化學(xué)方法合成或半合成的化合物。從化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)而言主要包含β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氯霉素類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、多肽類(lèi)、抗腫瘤類(lèi)、林可霉素類(lèi)等[1]。近年來(lái)，由于盲目濫用抗生素的現(xiàn)象日益嚴(yán)重，不但不能達(dá)到預(yù)期目的，而且使細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)，造成畜產(chǎn)品中抗生素殘留增加。其危害主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面[2-4]：耐藥性增加及腸道菌的紊亂；產(chǎn)生過(guò)敏性反應(yīng)及中毒；干擾激素平衡及癌變；急性中毒；污染環(huán)境以及生態(tài)毒性。抗生素殘留問(wèn)題已經(jīng)引起社會(huì)的高度重視[5]。動(dòng)物中抗生素類(lèi)殘留的檢測(cè)方法主要有3類(lèi)：理化檢測(cè)法、微生物檢測(cè)法、免疫分析法。本文重點(diǎn)講述近幾年來(lái)動(dòng)物組織中抗生素殘留的理化檢測(cè)法。抗生素殘留的理化檢測(cè)方法是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來(lái)測(cè)定其含量。如高效液相色譜法、氣相色譜法、質(zhì)譜法、薄層層析法(TLC)及聯(lián)用技術(shù)等。此類(lèi)方法能對(duì)抗生素進(jìn)行定性、定量測(cè)定，靈敏度較高，但一般都需要昂貴的儀器設(shè)備、大量復(fù)雜的前期處理、熟練的技術(shù)人員和較長(zhǎng)的分析周期。

1 動(dòng)物組織中抗生素殘留的理化檢測(cè)法

1.1 色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)[6-8]集成了色譜分離和質(zhì)譜結(jié)構(gòu)鑒定的優(yōu)點(diǎn)，是目前最為引人注目的一種新型分析手段。例如：高效液相色譜-質(zhì)譜(HPLC-MS)是將高效液相色譜法對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力與質(zhì)譜法具有的高選擇性、高靈敏度以及能夠提供分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)。其原理是將混合樣品注入色譜儀后，經(jīng)色譜柱得到分離。從色譜儀流出的被分離組分依次通過(guò)接口進(jìn)入質(zhì)譜儀的離子源處并被離子化，然后離子在加速電壓作用下進(jìn)入質(zhì)量分析器中進(jìn)行質(zhì)量分離，分離后的離子按質(zhì)量大小，先后由收集器收集并記錄質(zhì)譜圖。根據(jù)質(zhì)譜峰的強(qiáng)度和位置可對(duì)樣品的成分和結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)的專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度和準(zhǔn)確度較高，但儀器的專(zhuān)用性強(qiáng)，技術(shù)要求和測(cè)定成本高。

HORIE等采用HPLC-MS法測(cè)定動(dòng)物組織和魚(yú)肉中大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的殘留，平均回收率為70.4%～93.2%，肉和魚(yú)中的最低檢出限為0.01 μg/g[9]。熊春蘭等采用HPLC-MS法檢測(cè)了水產(chǎn)品中38種獸藥殘留，38種獸藥在水產(chǎn)品中的基質(zhì)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性系數(shù)(r)均大于0.99；在4個(gè)不同濃度加標(biāo)水平下，平均回收率為43%～123%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.0%～26.4%，日間RSD值為1.6%～28.9%[10]。王鳳美等采用UPLC-MS法對(duì)動(dòng)物源性食品中12種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素殘留進(jìn)行測(cè)定[11]。岳振峰等和孫雷等采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)了動(dòng)物組織中13種林可胺類(lèi)及大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物殘留，檢測(cè)限均為1 μg/kg[12-13]。張敬平等建立了雞肝中6種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素螺旋霉素、替米卡星、紅霉素、泰樂(lè)菌素、吉他霉素和竹桃霉素的液相色譜-電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)方法[14]。方法的檢出限為1～ 10 μg/L，在0.05～ 0.7 μg/mL范圍內(nèi)峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.996；樣品在0.5，0.1 μg/g添加水平下，回收率范圍為78.5%～93.4%，精密度<7.2%，方法靈敏，實(shí)用性強(qiáng)。趙東豪等建立了以高效液相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)豬肉中替米考星、紅霉素、泰樂(lè)菌素、吉他霉素、羅紅菌素及交沙霉素6種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的多殘留分析方法，6種藥物的回收率為62.2%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.7%～16%[15]。朱世超等利用HPLC-MS /MS法測(cè)定了水產(chǎn)品中7種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素殘留量，方法檢出限為1 μg/kg[16]。KWOK等利用HPLC-電噴離子化-MS/MS技術(shù)，先用鹽酸沉淀腎臟組織中的蛋白質(zhì)，釋放出氨基糖苷類(lèi)物質(zhì)，利用固相萃取(SPE)來(lái)除去牛奶中的蛋白質(zhì)，色譜柱為Zorbax C柱，同時(shí)檢測(cè)了樣品中的鏈霉素、雙氫鏈霉素、新霉素和慶大霉素，測(cè)定質(zhì)量濃度為0.05～10 μg/mL時(shí)，回收率為60%～80%[17]。

祝偉霞等建立了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)檢測(cè)肌肉、肝臟、腸衣、蜂蜜中氯霉素殘留的方法，最小檢測(cè)濃度為0.05 μg/kg，檢測(cè)限為0.01 μg/kg(S/N≥3)，該方法的平均回收率為72.0%～90.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%～9.7%[18]。王新麗采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)肉中氯霉素殘留，氯霉素檢測(cè)的線(xiàn)性范圍為0.1～50μg/L，相關(guān)系數(shù)為0.998 2；加標(biāo)水平為0.5，2.5μg/kg時(shí)，平均回收率大于96%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于14%，魚(yú)肉中氯霉素的定量檢測(cè)下限為0.025μg/kg[19]。高華鵬等建立了快速測(cè)定鰻魚(yú)中氯霉素藥物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法[20]。結(jié)果表明：氯霉素在0.02～1.0μg/kg范圍內(nèi)線(xiàn)性良好，相關(guān)系數(shù)(r)為0.996 5；在0.05，0.1，0.5μg/kg添加水平條件下，氯霉素加標(biāo)回收率為86.6%～92.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于7%(n=5)，本方法對(duì)氯霉素檢出限和定量限分別為0.003和0.011μg/kg。研究人員用高效液相色譜-電噴霧三級(jí)四極桿質(zhì)譜負(fù)離子模式對(duì)雞肉組織中的氯霉素殘留進(jìn)行檢測(cè)，最小檢測(cè)濃度為0.10μg/kg，加標(biāo)回收率為74.3%～84.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.9%～12.7%[21-22]。謝文等用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜電噴霧檢測(cè)法(LC-ESI-MS/MS)同時(shí)測(cè)定蝦、禽肉中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考?xì)埩袅?，添加同位素?nèi)標(biāo)氯霉素-d5，該方法線(xiàn)性范圍為0.1～1.6μg/kg[23]。研究人員分別采用GC-MS檢測(cè)肉中的氯霉素，方法的最低檢測(cè)限達(dá)到0.08μg/kg[3，24-25]。李鵬等用色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法檢測(cè)了動(dòng)物組織中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的殘留量，其中氯霉素的檢出限達(dá)到了0.03μg/kg[26]。謝孟峽等用固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定動(dòng)物組織中氯霉素的殘留量，用硅膠和C18固相萃取柱通過(guò)對(duì)提取、凈化富集條件的優(yōu)化，凈化后的提取物用BSTFA衍生化和氣相色譜-質(zhì)譜-負(fù)化學(xué)電離源選擇離子定量檢測(cè)[27]。該方法對(duì)不同基體樣品的加標(biāo)回收率為80%～100%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于20%，方法檢出限為0.1μg/kg。MASAHIKO等采用液相色譜-大氣壓光離子質(zhì)譜(LC-APPI-MS)法測(cè)定魚(yú)肉中氯霉素，樣品的最低檢出限為0.1μg/kg[28]。瞿進(jìn)文等建立了液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定魚(yú)肉中氯霉素殘留的檢測(cè)方法，回收率為92.8%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%～9.3%，檢出限低于0.01μg/kg[29]。

GRY等采用HPLC-MS法測(cè)定氟喹諾酮類(lèi)抗生素在豬腎中的殘留[30]；范瑩瑩等提出了高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定豬肉中5種青霉素類(lèi)藥物殘留的方法[31]；白國(guó)濤等則采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法測(cè)定了牛肉中9種頭孢菌素類(lèi)藥物殘留[32]；趙善倉(cāng)等建立和發(fā)展了畜產(chǎn)品4種硝基呋喃類(lèi)抗生素代謝物殘留的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(UPLC-MS/MS)快速檢測(cè)方法[33]；孫良娟等和劉正才等用UPLC-MS/MS法對(duì)水產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)及磺胺類(lèi)抗生素藥物殘留進(jìn)行快速測(cè)定[34-35]；任雪冬等利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定畜禽肉中10種磺胺類(lèi)獸藥殘留的不確定度評(píng)定[36]；白麗麗等利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)了蝦中9種磺胺類(lèi)藥物的殘留，9種磺胺類(lèi)藥物的加標(biāo)回收率為75.3%～95.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為4.5%～13.5%，該方法比較適用于磺胺類(lèi)藥物殘留的檢測(cè)[37]；王樹(shù)槐等利用HPLC-MS法檢測(cè)動(dòng)物組織中的鹽酸克侖特羅，其中質(zhì)譜檢出限為0.01～5μg/kg[38]；王秋平等介紹了近幾年來(lái)鹽酸克倫特羅的研究現(xiàn)狀[39]；HPLC-MS也可測(cè)定恩氟沙星、呋喃唑酮在尼羅河羅非魚(yú)體內(nèi)的代謝產(chǎn)物[40]。美國(guó)食品與藥物管理局對(duì)動(dòng)物組織中的鹽酸克倫特羅的檢出限為0.2～0.6μg/kg[2]?？梢?jiàn)，HPLC-MS法能夠達(dá)到檢測(cè)的要求。另外，劉承偉等利用高效液相色譜-瑞利散射光譜法聯(lián)用技術(shù)測(cè)定了大鼠血清中的奈替米星[41]；王維霞等利用液相色譜-熒光法進(jìn)行了禽肉中7種氟喹諾酮類(lèi)藥物殘留的研究[42]。

1.2 高效液相色譜法( HPLC)

HPLC法是目前測(cè)定抗生素殘留比較理想的方法，它具有靈敏度高、分離速度快等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)抗生素殘留能夠準(zhǔn)確定性和定量，但樣品的前處理過(guò)程較為復(fù)雜[43-44]。FENNELL等用KH2PO4-Na2SO4溶液(pH值為8.8)提取牛奶和動(dòng)物組織中的慶大霉素，鄰苯二甲醛衍生化，HPLC-UVD檢測(cè)(330 nm)，獲得的檢測(cè)限分別為0.6 μg/kg和1 μg/kg[45]。POSYNIAK等在檢測(cè)豬肉、肝和腎中慶大霉素和新霉素殘留時(shí)用氯甲酸芴甲酯柱前衍生化，HPLC-FD檢測(cè)(激發(fā)波長(zhǎng)為260 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為315 nm)，獲得檢出限達(dá)0.01 mg/kg[46]。該研究比較了三氯乙酸和NaOH溶液的提取效率，結(jié)果表明2種提取方法回收率差異小，但前者提取時(shí)間短且凈化方便。侯亞莉等用50%(體積分?jǐn)?shù))的三氯乙酸沉淀蛋白，上清液過(guò)MCX固相萃取小柱，洗脫液氮?dú)獯蹈?，?jīng)FMOC-Cl柱前衍生化，正己烷脫脂，用熒光檢測(cè)器檢測(cè)慶大霉素，回收率為80.4%～82.8%，檢測(cè)限為25 μg/kg[47]。羅瑞峰等用酸性氧化鋁基質(zhì)固相分散提取豬肉中的鏈霉素，前處理中避免了因樣品的均化、離心和濃縮等造成的鏈霉素?fù)p失，獲得檢出限為5 μg/kg[48]。VINAS等研究了NQS柱后衍生，熒光檢測(cè)器檢測(cè)食品中鏈霉素和雙氫鏈霉素殘留，用5%(體積分?jǐn)?shù))三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，在液相色譜條件中通過(guò)固定相中酰氨和三甲基硅烷配合基作用有效避免了拖尾峰，獲得了更好的定量結(jié)果[49]。董曉慶等用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)，ODS-C18柱凈化，NQS柱前衍生化，HPLC-UVD檢測(cè)，在肌肉、肝臟和腎臟中鏈霉素的最低檢測(cè)限為120，123，218 μg/kg[50]。

楊元等采用高效液相色譜法-紫外檢測(cè)器，一次同時(shí)進(jìn)樣測(cè)定動(dòng)物源性食品(包括豬、牛、雞、魚(yú)肌肉組織及肝臟、腎臟組織)中林可霉素、四環(huán)素、土霉素等7種抗生素的殘留量[51]。池利民等采用HPLC測(cè)定豬肉中四環(huán)素族抗生素殘留，當(dāng)Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液的pH值為4.5時(shí)，四環(huán)素族抗生素回收率最高，最大吸收波長(zhǎng)為355 nm，最低檢測(cè)限為100 μg/L，3個(gè)添加水平的回收率為68.5%～ 94.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.5%～ 9.1%[52]。修麗華等用高效液相色譜法測(cè)定畜、禽肉中土霉素的殘留量，加標(biāo)回收率為96.0%～108.2%，線(xiàn)性系數(shù)為0.999 9，檢出限為0.08 mg/kg，分析時(shí)間僅為9 min，完全能夠滿(mǎn)足分析要求，具有廣泛的應(yīng)用前景[53]。王玉春等用高效液相色譜法成功地進(jìn)行了人工飼養(yǎng)淡水魚(yú)體內(nèi)的四環(huán)素、金霉素、土霉素等殘留物的定量檢測(cè)，平均回收率約為98.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差平均約為4.6%[54]。王魯勤等通過(guò)確立流動(dòng)相比例和回收率驗(yàn)證，建立了一種高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定畜禽肉中土霉素、四環(huán)素、金霉素殘留的分析方法[55]。陶大勇等對(duì)阿拉爾市市場(chǎng)銷(xiāo)售的豬肝臟中土霉素、四環(huán)素、金霉素等藥物的殘留量進(jìn)行監(jiān)測(cè)[56]。金雁等建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定豬肉樣品中克倫特羅、沙丁胺醇、土霉素、四環(huán)素殘留量的檢測(cè)方法，方法簡(jiǎn)便、快速、定量準(zhǔn)確、精密度高[57]。研究人員參照文獻(xiàn)并進(jìn)行改進(jìn)，采用高效液相色譜法對(duì)張家口市市售的鯉魚(yú)、鯽魚(yú)、草魚(yú)、鯰魚(yú)隨機(jī)抽樣，對(duì)其肌肉組織中所含的土霉素、四環(huán)素進(jìn)行了測(cè)定[58-60]。PENA等采用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法(HPLC-FD)測(cè)定鮭魚(yú)肌肉中四環(huán)素類(lèi)抗生素，檢測(cè)限是5.50 μg/kg[61]。WEN等利用固相萃取-高效液相色譜-紫外檢測(cè)法(SPME-HPLC-DAD)對(duì)魚(yú)肉中四環(huán)素類(lèi)抗生素殘留進(jìn)行檢測(cè)，使目標(biāo)物的提取率更高，樣品前處理簡(jiǎn)便快捷[62]。陳輝華等采用HPLC法對(duì)魚(yú)肉中3種四環(huán)素類(lèi)和5種氟喹諾酮類(lèi)獸藥殘留進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，平均加標(biāo)回收率為81%～96%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為2.5%～10.5%[63]。葛云芝等采用HPLC同時(shí)測(cè)定了雞肉中3中四環(huán)素類(lèi)抗生素的殘留，雞肉組織樣品在500 μg/kg添加水平下回收率為86.2%～89.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.854%～1.213%(n=10)，方法的定量限為10 μg/kg[64]。

張立軍等采用HPLC法檢測(cè)魚(yú)肉中氟苯尼考?xì)埩袅?，精密?10%，平均回收率為93.1%～95.2%，該方法能夠有效分離和準(zhǔn)確測(cè)定魚(yú)類(lèi)水產(chǎn)品中氟苯尼考?xì)埩袅?，方法靈敏度和準(zhǔn)確度滿(mǎn)足工作要求[65]。PILAF等建立了檢測(cè)動(dòng)物性食品中氯霉素殘留的液相色譜法，其檢出限為0.7 μg/kg[66]。郭霞等建立了同時(shí)檢測(cè)魚(yú)肌肉組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留的高效液相色譜檢測(cè)法，氟苯尼考胺和氟苯尼考的檢測(cè)限分別為5 μg/kg和10 μg/kg，定量限分別為10 μg/kg和20 μg/kg[6]。結(jié)果表明，所建立的檢測(cè)方法具有靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)。

MASAKAZU等用HPLC法同時(shí)測(cè)定動(dòng)物中5種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，線(xiàn)性范圍為2.5～100 ng，平均回收率為70.8%～90.4%，檢出限為0.05 μg/kg[68]。MORIZONO等利用高效液相色譜法測(cè)定動(dòng)物組織中的β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素殘留[69]。

1.3 氣相色譜法(GC)

氣相色譜法是以氣體作為流動(dòng)相的色譜法，相比于其他色譜法，GC法的靈敏度較高、分析速度快，但由于抗生素分子質(zhì)量都比較大，不易氣化，因而需要衍生化，操作過(guò)程比較復(fù)雜[70-71]。1974年，美國(guó)分析化學(xué)協(xié)會(huì)(AOAC)年會(huì)上JACOBSON等人提出，用乙酸乙酯提取動(dòng)物組織中的抗生素，用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的NaCl的正丁烷去除脂類(lèi)，通過(guò)硅藻土色譜柱提純凈化，加入四甲基硅烷(TMS)衍生化，電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定，回收率為80%，檢出限<1 μg/kg，提高了檢出限[72]。

林秋萍等研究了肌肉中氯霉素殘留量的氣相色譜測(cè)定方法，最小檢出限為1.1 μg/kg，回收率為70.1%～100%[73]。劉永濤等建立了測(cè)定尼羅羅非魚(yú)和南美白對(duì)蝦中氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素殘留量的毛細(xì)管電子捕獲氣相色譜(GC-ECD)法，本方法氯霉素在1.0～500.0 μg/L、氟甲砜霉素和甲砜霉素在5.0～500.0 μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.998 3，加標(biāo)水平在0.2～10.0 μg/kg時(shí)，回收率為83.30%～101.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～12.6%，氯霉素、氟甲砜霉素和甲砜霉素的檢測(cè)限分別為0.1，0.2，0.2 μg/kg[74]。白艷玲等研究了水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的氣相色譜分析方法，方法的最低檢出量達(dá)到0.02 μg/kg，質(zhì)量濃度在2.5～5 000.0 ng/mL范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r=0.999 5，加標(biāo)水平為1.0～10.0 μg/kg時(shí)回收率為86.3%～95.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.0%～9.0%[75]。這表明該方法具備靈敏度高、樣品提取簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。王建華等研究報(bào)道了測(cè)定魚(yú)肉中氯霉素和甲砜霉素殘留量的毛細(xì)管氣相色譜法，當(dāng)添加水平為5～20 μg/kg時(shí)，回收率為80%～108%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.5%～11%[76]。

1.4 薄層層析法(TLC)

薄層層析法是把待分離的樣品溶液點(diǎn)在薄層的一端，利用吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力大小不同將樣品成分彼此分離。此法可以在同一塊板上同時(shí)分離多個(gè)樣品，且成本較低，缺點(diǎn)是靈敏度較低[77]。紫外檢測(cè)法、Vis/熒光檢測(cè)法和BAG檢測(cè)法是TLC的常用檢測(cè)方法，有目視法和光密度法2種形式。研究人員以堿化的乙腈(pH值為8.5)作為提取劑，建立了動(dòng)物組織(肝臟和肌肉)中紅霉素、泰樂(lè)菌素、竹桃霉素和螺旋霉素的TLC檢測(cè)法[78]。

1.5 毛細(xì)管電泳法(CE)

毛細(xì)管電泳法是一類(lèi)以毛細(xì)管為分離通道、以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品中各組分之間遷移速度和分配行為上的差異進(jìn)行分離的一類(lèi)液相分離技術(shù)。目前藥物分析中，毛細(xì)管電泳常見(jiàn)的分離模式是毛細(xì)管區(qū)帶電泳和膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜，具有分析時(shí)間短、檢出限低、易于自動(dòng)化、可檢測(cè)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[79]。余長(zhǎng)柱等采用毛細(xì)管電泳柱后衍生激光誘導(dǎo)熒光的方法測(cè)定了卡那霉素類(lèi)抗生素，檢出限為36～52 μg/L，用于動(dòng)物組織中卡那霉素類(lèi)抗生素殘留檢測(cè)時(shí)，其回收率為90.2%～95.3%[80]。李向麗等結(jié)合CE技術(shù)，建立了家兔肌肉、肝臟中泰樂(lè)菌素測(cè)定方法，結(jié)果顯示，在0.05～10.00 μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，檢測(cè)限為0.02 μg/mL，回收率為80.0～95.0%[81]。田志仁等應(yīng)用毛細(xì)管電泳檢測(cè)方法檢測(cè)了動(dòng)物源食品及生物產(chǎn)品中β-內(nèi)酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)、四環(huán)素類(lèi)、喹諾酮類(lèi)和氯霉素類(lèi)抗生素[82]。

1.6 熒光分光光度法

熒光分光光度法是一種靈敏度高、選擇性好、簡(jiǎn)單快速的分子發(fā)射光譜分析法，近幾年來(lái)發(fā)展很快[83]。倪永年等利用分光光度法同時(shí)測(cè)定了兔血清中的4種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，4種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的的線(xiàn)性范圍分別為1.0～20.0，2.0～ 20.0，2.0～ 20.0，1.0～ 18.0 μg/ mL[84]。此結(jié)果同高效液相色譜法測(cè)得結(jié)果相比并沒(méi)有很大差別。

1.7 其他理化測(cè)定方法

抗生素含量測(cè)定方法還有紫外分光光度法、酸堿滴定法、碘量法、羥胺比色法、重氮化滴定法、重量分析法等[85-86]?！吨袊?guó)人民共和國(guó)藥典》主要收載了滴定分析法，包括一般化學(xué)滴定法和電位滴定法，該法具有快速、準(zhǔn)確、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的化學(xué)分析方法。

2 展 望

抗生素殘留是影響動(dòng)物性食品安全的重要因素之一，既威脅著人們的生命安全，又影響動(dòng)物性食品的出口，各國(guó)對(duì)殘留限量要求越來(lái)越嚴(yán)格。1986年，聯(lián)合國(guó)成立“食品獸藥殘留立法委員會(huì)”，目的是制定世界或地區(qū)性法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)。美國(guó)從1998年1月開(kāi)始實(shí)施“公害分析臨界控制點(diǎn)”(HACCP)，明確規(guī)定了食物中的有害物質(zhì)(包括細(xì)菌、藥殘等)的臨界值，超標(biāo)的一律不準(zhǔn)上市。1997年，中國(guó)也發(fā)布了獸藥殘留標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)抗生素殘留分析技術(shù)提出了更高的要求。相比較上述方法，未來(lái)抗生素殘留檢測(cè)更迫切地需要樣品前處理簡(jiǎn)便、檢出限低、選擇性高、分析自動(dòng)化程度高、周期短，以及高通量、多殘留的樣品分析方法[87-89]。

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