富硒板黨酒對(duì)衰老大鼠睪丸的影響*

譚文波，袁德培，楊付明

（湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，湖北恩施445000）

富硒板黨酒是以優(yōu)質(zhì)白酒和全國(guó)地理標(biāo)志產(chǎn)品-富硒板黨為主料，輔以枸杞、肉桂、蜂蜜、一級(jí)冰糖精制而成，具有補(bǔ)中益氣、強(qiáng)身壯體、健心養(yǎng)顏、滋陰壯陽，促進(jìn)人體新陳代謝，增強(qiáng)肌體免疫力，防癌抗癌之功能?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明板黨具有明確的抗氧化抗衰老作用［1］，而硒有促進(jìn)男性生殖和延年益壽之功效［2］。目前有關(guān)富硒板黨酒抗衰老與促生殖的研究尚無報(bào)道，為此，本文通過觀察富硒板黨酒對(duì)衰老大鼠睪丸結(jié)構(gòu)和機(jī)能代謝的影響，來探討其保健養(yǎng)生功能。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

富硒板黨酒（恩施本草藥業(yè)有限公司），大鼠睪酮、SOD、GSH-Px、MDA ELISA試劑盒（上海豐翔生物科技有限公司）。

1.2 主要儀器

UV-2450分光光度儀，GL-20GII型高速低溫離心機(jī)，Multikan MK3酶標(biāo)儀，DW40-120低溫冰箱，Neusoft-770SS顯微鏡，BS224S電子分析天平，HFJ-10內(nèi)切式勻漿機(jī)。

1.3 動(dòng)物分組及給藥

5月齡健康清潔級(jí)Wistar雄性大鼠30只，體重280～320 g（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心）。隨機(jī)分為3組（n＝10）：對(duì)照組、模型組和實(shí)驗(yàn)組。模型組和實(shí)驗(yàn)組按0.025 ml／g頸背皮下注射5%D-半乳糖生理鹽水溶液，對(duì)照組頸背皮下注射等量生理鹽水，同時(shí)實(shí)驗(yàn)組按5 ml／kg灌服富硒板黨酒，對(duì)照組和模型組灌服等量生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥42 d。

1.4 血清睪酮及睪丸指數(shù)的檢測(cè)

末次給藥2 h后，將各組大鼠稱重，摘眼球取血約1 ml，高速低溫離心機(jī)以3 200 r／min離心4 min，取血清按試劑盒說明書檢測(cè)血清睪酮（testosterone，T）的含量。采血后脫頸椎處死，取雙側(cè)睪丸稱重，計(jì)算睪丸指數(shù)，即睪丸指數(shù)（mg／g）＝睪丸質(zhì)量（mg）／鼠體質(zhì)量（g）。

1.5 睪丸組織SOD、GSH-Px、MDA含量的檢測(cè)

取右側(cè)睪丸置于冰冷的生理鹽水中漂洗，去血，拭干，稱重，放人勻漿器中，加入9倍于其重量的冷生理鹽水進(jìn)行勻漿（勻漿時(shí)間每次 10 s，間隙30 s，連續(xù)5～6次，均在冰水中進(jìn)行）。將制備好的10%的組織勻漿以3 000 r／min離心10～15min，取適量離心好的勻漿上清液按試劑盒說明測(cè)定睪丸組織超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量。

1.6 睪丸組織學(xué)觀察

取左側(cè)睪丸置10%中性甲醛溶液中固定24 h后，梯度酒精脫水，石蠟包埋，冠狀切面制備5μm厚的石蠟切片，HE染色，光鏡觀察。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 富硒板黨酒對(duì)各組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量的影響

與對(duì)照組比，模型組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量顯著下降（P＜0.01）；與模型組比，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸指數(shù)和血清T含量明顯增加 （P＜0.01，表 1）。

Tab.1 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testis index and the content of T in serum of each group rats（±s，n＝10）

Tab.1 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testis index and the content of T in serum of each group rats（±s，n＝10）

T：Testosterone**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model group

Group Testis index（mg／g） T（ng／L）Control 7.64±0.51 0.50±0.08 Model 4.36±0.48** 0.30±0.06**Test 6.14±0.57＃＃ 0.47±0.07＃＃

2.2 富硒板黨酒對(duì)各組大鼠睪丸組織SOD、GSH-Px、MDA含量的影響

與對(duì)照組比，模型組大鼠睪丸組織SOD和GSH-Px含量顯著下降，MDA含量明顯增加（P＜0.01）；與模型組比，實(shí)驗(yàn)組大鼠睪丸組織SOD、GSH-Px含量明顯增加，MDA含量明顯下降 （P＜0.01，表 2）。

Tab.2 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on the content of SOD，GSH-Px and MDA in each group rats testicular tissue（±s，n＝10）

Tab.2 Effect of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on the content of SOD，GSH-Px and MDA in each group rats testicular tissue（±s，n＝10）

SOD：Superoxide dismutase；GSH-Px：Glutathione peroxidase；MDA：Malondialdehyde**P＜0.01 vs control group；＃＃P＜0.01 vs model group

Group SOD（U／g） GSH-Px（nmol／g） MDA（nmol／g ）Control 196.23±6.07 170.58±7.24 6.74±1.26 Model 127.95±4.86**129.87±7.15**11.39±1.87**Test 170.72±5.61＃＃159.52±8.48＃＃ 7.85±1.72＃＃

2.3 富硒板黨酒對(duì)各組大鼠睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

對(duì)照組大鼠睪丸生精小管圓而飽滿，管壁各級(jí)生精細(xì)胞及支持細(xì)胞分層排列有序，管腔中無脫落細(xì)胞，可見大量成熟精子，間質(zhì)細(xì)胞成群排列在生精小管間隙（圖1A）；模型組大鼠睪丸生精小管管徑大小不一，管壁細(xì)胞層數(shù)減少排列紊亂，部分管腔阻塞或塌陷，可見脫落細(xì)胞，成熟精子數(shù)量明顯減少，間質(zhì)細(xì)胞輪廓不清（圖1B）；實(shí)驗(yàn)組生精小管基膜基本完整，管壁增厚變圓，可見各個(gè)發(fā)育階段的生精細(xì)胞和支持細(xì)胞，管腔中無脫落細(xì)胞，有較多成熟精子，間質(zhì)細(xì)胞成群分布于生精小管之間的疏松結(jié)締組織內(nèi)（圖1C）。

Fig.1 Effects of rich selenium-banqiao-codonopsis pilosula wine on testicular tissuemorphological change of each group（HE×400）

3 討論

神經(jīng)內(nèi)分泌衰老學(xué)說認(rèn)為：下丘腦-腺垂體-性腺軸功能衰退是人類衰老的主要環(huán)節(jié)，人類的衰老與性腺結(jié)構(gòu)和功能的退化密切相關(guān)。男性從50歲開始，睪丸組織生精細(xì)胞、支持細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞就開始出現(xiàn)退行性變，引起這一改變的主要原因是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)［3］。艾明仙等研究證明，富硒板黨能提高血漿和組織抗氧化酶系的活性，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)終產(chǎn)物MAD的產(chǎn)生［4］。藥物化學(xué)研究證實(shí)富硒板黨含硒量高達(dá)0.28 mg／kg，硒作為谷胱甘肽過氧化酶的基本組成部分，有促進(jìn)體內(nèi)過氧化物分解，維持細(xì)胞正常形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能的作用［5］。

本研究發(fā)現(xiàn)，D-半乳糖導(dǎo)致大鼠睪丸組織抗氧化酶SOD和GSH-Px含量顯著下降，細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化損傷，MDA含量明顯增加，使生物大分子交聯(lián)聚合，引起生精細(xì)胞、支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞變性、壞死，細(xì)胞數(shù)量減少，結(jié)構(gòu)破壞，排列紊亂，產(chǎn)生精子和分泌睪酮能力下降，最終睪丸出現(xiàn)萎縮 ，睪丸指數(shù)明顯下降。而富硒板黨酒顯著改善衰老大鼠睪丸組織SOD和GSH-Px的活性，減少自由基對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子的攻擊，使MDA產(chǎn)生減少，細(xì)胞毒性作用減弱，從而維護(hù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能，延緩睪丸的萎縮。因此，富硒板黨酒能延緩睪丸退變，維持生殖功能，提高生活質(zhì)量。

［1］ 黃麗亞，張 宏，余 潔.板黨對(duì)岡田酸致大鼠阿爾茨海默病抗氧化作用［J］.中國(guó)公共衛(wèi)生，2008，24（9）：1105-1106.

［2］ 尉俊仁，馮 佩，章子貴.硒對(duì)氟致大鼠睪丸與附睪中某些酶活性變化的影響［J］.毒理學(xué)雜志，2012，26（1）：4-8.

［3］ 黃和賢，曹文富，彭 爽，等.延衰合劑對(duì)D-半乳糖所致亞急性衰老小鼠睪丸及血清睪酮的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（12）：2239-2241.

［4］ 艾明仙，黃麗亞.富硒板黨對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶及抗氧化酶影響［J］.中國(guó)公共衛(wèi)生，2007，23（6）：736-737.

［5］ 郭貴華，楊 麗，沈振華，等.硒對(duì)砷染毒致雄性大鼠生殖損害的拮抗作用［J］.咸寧學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，22（6）：461-464.