參歸片對腦缺血損傷的保護(hù)作用*

石永平，汪 匯，王懷新，王金達(dá)，王汝歡，張雁芳，崔文玉，段 煉，汪 ?！?/p>

（1.北京賽德維康醫(yī)藥研究院，北京100039；2.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院附屬醫(yī)院，北京100071；3.軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所，北京100850）

復(fù)方黨參片是我國最早應(yīng)用的防治急性高原反應(yīng)的中藥復(fù)方，30多年來廣泛應(yīng)用于軍隊(duì)和國家重大工程建設(shè)中，取得了顯著的軍事效益和社會效益。參歸片（新復(fù)方黨參片）是在復(fù)方黨參片的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床使用情況，優(yōu)化而得的具有緩解體力疲勞和提高缺氧耐受力的復(fù)方制劑，獲國家發(fā)明專利［1］。主要由黨參、丹參、北沙參、當(dāng)歸和西洋參等組成。前期研究發(fā)現(xiàn)［2-4］，參歸片具有緩解體力疲勞和提高機(jī)體耐缺氧能力，且有效劑量低于復(fù)方黨參片；能有效減輕高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的程度、減輕高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的癥狀、降低高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)的發(fā)生率，并能顯著改善受試者的肺通氣功能和手指運(yùn)動能力，具有較好的防治高原脫習(xí)服和高原反應(yīng)作用。本文旨在進(jìn)一步探討參歸片對急性腦缺血的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

參歸片（北京賽德維康醫(yī)藥研究院提供，批號：20110701）；尼莫地平（天津市中央藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：110701）；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20111201）、丙二醛（MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20111206）；其他試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

TU-1900雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；稱量天平（上海醫(yī)用分析儀器廠）；水浴鍋（上海愛郎儀器有限公司）；臺式高速離心機(jī)（上海醫(yī)用分析儀器廠）。250 ml磨口廣口瓶，秒表，1ml注射器、剪刀等。

1.3 動物

SD雄性大鼠，體重180～220 g，昆明雌性小鼠，體重18～22 g，均購于北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實(shí)驗(yàn)中心（合格證號：SCXK-（軍）2007-004）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 小鼠斷頭腦缺血實(shí)驗(yàn)［5-7，9］昆明小鼠 40只，隨機(jī)分為4組（n＝10）：分別為正常組和參歸片0.16、0.33、1.00 g／kg組，正常組給與等量生理鹽水，連續(xù)灌胃30 d，末次灌胃1 h后，各組動物自頸部逐只斷頭，立即秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間。

1.4.2 大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈腦缺血實(shí)驗(yàn)［6-8］SD大鼠48只，隨機(jī)分成6組（n＝8），分別為正常組、模型組、尼莫地平（0.15 g／kg）組和參歸片低、中、高（0.072、0.149、0.45 g／kg）劑量組，各組分別連續(xù)灌胃給予各自受試物7 d（正常組和模型組給與等量生理鹽水）進(jìn)行腦缺血實(shí)驗(yàn)；各組大鼠末次給予受試物1 h后，準(zhǔn)確稱重，用2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，仰臥固定于手術(shù)夾板上，行頸部正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動脈，用動脈夾結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈造成腦缺血模型。結(jié)扎1 h后，斷頭取腦，稱取濕重，計(jì)算腦指數(shù)（腦指數(shù)＝腦濕重×100／體重）。準(zhǔn)確稱重置于-20℃保存的腦組織按質(zhì)量體積比1∶9的比例與 Tris-硫酸制備10%腦組織勻漿，4 000 r／min，離心10min，取上清測SOD活性和MDA含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析進(jìn)行多組間顯著性檢驗(yàn)，兩組間樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組間樣本均數(shù)比較采用Dunnett’s檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 參歸片對急性腦缺血性缺氧小鼠喘息時間的影響

與正常對照組相比，參歸片低劑量組對斷頭小鼠喘氣時間無顯著性延長（P＞0.05，表1），參歸片中、高劑量組能顯著延長斷頭小鼠喘氣時間（P＜0.05，P＜0.01），表明參歸片能提高斷頭小鼠缺血缺氧能力，并呈現(xiàn)出劑量依賴性關(guān)系。

Tab.1 Effectof Shengui tableton breathing time in acute cerebral ischemiamice（±s，n＝10）

Tab.1 Effectof Shengui tableton breathing time in acute cerebral ischemiamice（±s，n＝10）

*P＜0.05，**P＜0.01 vs control

Group Dose（g／kg） Gasping time（s ）Control 0 18.6±2.0 Low 0.16 20.2±1.4 Middle 0.33 21.6±2.3*High 1.00 24.3±2.2**

2.2 參歸片對腦缺血大鼠腦指數(shù)的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦指數(shù)顯著升高（P＜0.01，圖1），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組能顯著降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.01），表明尼莫地平能減輕腦缺血引起的腦水腫；參歸片低、中、高三個劑量組能劑量依賴性的降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.05，P＜0.01），表明參歸片能減輕腦缺血引起的腦水腫。與尼莫地平組相比，參歸片中、高劑量組降低大鼠腦指數(shù)無顯著性差異，表明參歸片中、高劑量組減輕腦缺血引起的腦水腫作用與尼莫地平組相當(dāng)。

Fig.1 Effects of Shengui tablet on cerebral index in cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

2.3 參歸片對腦缺血大鼠腦組織中SOD活性的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦組織中SOD活性顯著降低（P＜0.01，圖2），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組大鼠腦組織中SOD活性顯著增強(qiáng)（P＜0.01），表明尼莫地平具有提高腦缺血大鼠腦組織中SOD的作用；參歸片低、中、高三個劑量組大鼠腦組織中SOD活性顯著提高（P＜0.01），表明參歸片能提高缺血大鼠腦組織中SOD活性（P＜0.01）。參歸片低、中、高三個劑量組與尼莫地平組提高缺血大鼠腦組織中SOD活性的效果一致。

Fig.2 Effects of Shengui tablet on superoxide dismutase activityin cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

2.4 參歸片對腦缺血大鼠腦組織中MDA含量的影響

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與正常組相比，模型組大鼠腦組織中MDA含量顯著升高（P＜0.01，圖3），表明造模成功。與模型組相比，尼莫地平組大鼠腦組織中MDA含量顯著減低，表明尼莫地平能降低缺血大鼠腦組織中MDA含量的升高；參歸片低、中劑量組大鼠腦組織中MDA含量無顯著性變化（P＞0.05），但高劑量組大鼠腦組織中MDA含量顯著降低（P＜0.01），表明參歸片能降低腦缺血大鼠腦組織中MDA含量的升高。與尼莫地平組相比，參歸片高劑量組大鼠腦組織中MDA含量無顯著差異，表明參歸片高劑量組降低缺血大鼠腦組織中MDA的作用與尼莫地平組相當(dāng)。

Fig.3 Effects of Shengui tableton the contentofmalondialdehyde in cerebral ischemia rats（±s，n＝8）

3 討論

腦缺血、缺氧是嚴(yán)重危害人類健康的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具有發(fā)病率高、死亡率高、復(fù)發(fā)率高、致殘率高等特點(diǎn)，因此，預(yù)防本類疾病的發(fā)生具有重要的意義。目前較為確定的治療腦缺血急性期的神經(jīng)保護(hù)化學(xué)藥物有NMDA受體拮抗劑、鈣拮抗劑、糖皮質(zhì)激素和其他抗感染藥物等，但存在著治療療效不佳或者伴隨著嚴(yán)重的不良反應(yīng)等缺點(diǎn)［9］。而中藥在治療急性腦缺血性中風(fēng)等疑難雜癥方面具有其獨(dú)特的治療學(xué)優(yōu)勢，受到人們的認(rèn)可。

斷頭急性缺血性缺氧對機(jī)體是一種劣性刺激，影響機(jī)體的氧化供能，導(dǎo)致機(jī)體心、腦等重要器官能量衰竭而死亡。小鼠斷頭后，腦供血中斷，腦組織內(nèi)貯存一定能量，可使斷頭小鼠腦功能維持一段時間，表現(xiàn)為張口喘氣，隨著能量耗竭，活動便停止。本實(shí)驗(yàn)中參歸片中、高劑量組能顯著延長斷頭小鼠張口喘氣時間。表明參歸片具有提高腦組織缺血缺氧的耐受能力或提高腦組織對氧等能量的利用率，對于缺血性缺氧的腦損傷具有保護(hù)作用。

在腦缺血狀態(tài)下，腦指數(shù)的升高是由于毛細(xì)血管通透性增加，大量血漿成份外滲，尤其水分及小分子物質(zhì)，是引起腦組織明顯水腫的原因所在。在雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎腦缺血模型中，參歸片低、中、高劑量組可顯著降低大鼠腦指數(shù)的升高（P＜0.05或P＜0.01）。表明參歸片具有減輕缺血性腦血管通透性增高和腦水腫的作用，對腦缺血及腦組織缺血性損傷具有一定的保護(hù)作用。SOD是廣泛存在于需氧代謝細(xì)胞中的一種自由基清除劑，在自由基的產(chǎn)生與清除平衡中起著重要作用；MDA是脂質(zhì)過氧化作用的終產(chǎn)物，其含量高低可以反映脂質(zhì)過氧化水平，在一定程度上間接反映細(xì)胞損傷的程度［10-11］。參歸片低、中、高劑量組均能顯著提高腦組織中SOD活性，高劑量組能顯著降低腦組織中MDA的含量，表明參歸片改善自由基代謝，減輕自由基對神經(jīng)元的氧化損害，有效清除腦組織中自由基堆積，抑制自由基引起的繼發(fā)性腦損傷，保護(hù)缺血神經(jīng)元。

綜上所述，參歸片對缺血性腦保護(hù)作用可能與其清除自由基、減少氧化反應(yīng)的發(fā)生、降低缺血腦損傷血管的通透性和提高腦組織對血氧的利用率、降低耗氧量等途徑有關(guān)。至于參歸片對缺血性腦損傷的保護(hù)作用及其可能的進(jìn)一步作用機(jī)制，有待通過更多的研究來揭示。

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