干細(xì)胞治療肝硬化進(jìn)展

周新人，王 方

(蘭州軍區(qū)蘭州總院安寧分院感染科，甘肅蘭州 730070)

干細(xì)胞治療肝硬化進(jìn)展

周新人，王 方

(蘭州軍區(qū)蘭州總院安寧分院感染科，甘肅蘭州 730070)

各種病因?qū)е碌母斡不瘒?yán)重影響著患者的生命健康，目前尚缺乏有效治療方法。近年來，干細(xì)胞移植治療終末期肝病成了一種新的治療手段，該技術(shù)過程相對簡單，將制備好了的干細(xì)胞通過選擇好的途徑移植到患者肝臟內(nèi)，分化出更多的健康肝細(xì)胞，從而改善患者肝功能。本文即對干細(xì)胞及其臨床移植治療肝硬化進(jìn)展作一綜述。

干細(xì)胞;肝硬化;進(jìn)展

中國是肝炎、肝硬化疾病高發(fā)國家，各種病因?qū)е碌慕K末期肝病如晚期肝硬化、重癥肝病、急慢性肝功能衰竭等，嚴(yán)重影響著患者的生命健康，按照傳統(tǒng)的方法，治療終末期肝病最好的方法就是進(jìn)行肝移植，但受肝源緊缺、免疫排斥反應(yīng)和高額費(fèi)用等限制，很多患者很難得到醫(yī)治。近年來，全球掀起了有關(guān)干細(xì)胞的研究熱潮，為疾病的治療提供了嶄新的思路。干細(xì)胞移植治療作為一種新的治療手段，已從基礎(chǔ)研究走向臨床應(yīng)用。干細(xì)胞移植治療終末期肝病是世界上最前沿的細(xì)胞移植工程之一，它與傳統(tǒng)肝移植治療方法相比，不存在免疫排斥及倫理問題，同時風(fēng)險(xiǎn)小、痛苦少、費(fèi)用低。該技術(shù)過程簡單，先采集患者自體骨髓血或臍血，然后用先進(jìn)的試劑在無菌條件下將其中的干細(xì)胞分離出來，再靜脈輸入或在微創(chuàng)介入條件下，經(jīng)肝動脈或門靜脈移植到患者肝臟內(nèi)，干細(xì)胞具有自我復(fù)制及多向分化的特質(zhì)，其在肝內(nèi)“落戶”，分化出更多的健康肝細(xì)胞，從而改善患者肝功能?，F(xiàn)將干細(xì)胞及其臨床治療肝硬化作一綜述。

1 干細(xì)胞概述

1.1 干細(xì)胞概念

干細(xì)胞(stem cells，SC)是一類具有多向分化潛能和自我復(fù)制能力(self-renewing)的原始的未分化細(xì)胞，是形成哺乳類動物的各組織器官的原始細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞。干細(xì)胞在形態(tài)上具有共性，通常呈圓形或橢圓形，細(xì)胞體積小，核相對較大，細(xì)胞核多為常染色質(zhì)，并具有較高的端粒酶活性。干細(xì)胞的發(fā)育受多種內(nèi)在機(jī)制和微環(huán)境因素的影響。目前人類胚胎干細(xì)胞已可成功地在體外培養(yǎng)。最新研究發(fā)現(xiàn)，成體干細(xì)胞可以橫向分化為其他類型的細(xì)胞和組織，為干細(xì)胞的廣泛應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。

1.2 干細(xì)胞分類

根據(jù)干細(xì)胞所處的發(fā)育階段分為胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cell，EScell)和成體干細(xì)胞(somatic stem cell)。根據(jù)干細(xì)胞的發(fā)育潛能分為3類:全能干細(xì)胞(totipotent stem cell，TSC)、多能干細(xì)胞(plurotent stem cell)和單能干細(xì)胞(unipotent stem cell)。胚胎干細(xì)胞包括ES細(xì)胞、EG細(xì)胞(embryonic germ cell);成體干細(xì)胞包括神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem ce11，NSC)、血液干細(xì)胞(hematopoietic stem cell，HSC)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesen chymal stem cell，MSC)，表皮干細(xì)胞(epidexmis stem cell)等。另外，2012年諾貝爾獎得主山中伸彌的研究成果使得人們不用從人類胚胎細(xì)胞中獲取干細(xì)胞，而可以使皮膚細(xì)胞等完全分化的細(xì)胞重新轉(zhuǎn)化成干細(xì)胞，成為IPS。

1.2.1 臍血干細(xì)胞(umbilical cord blood stem cells，CBSC):胎盤是胎兒和母親血液交換的場所，含有非常豐富的血液微循環(huán)。人在母親子宮內(nèi)發(fā)育的階段，胎盤是首先形成的器官之一。胎盤中含有大量的早期干細(xì)胞，包括數(shù)量豐富的造血干細(xì)胞。這些干細(xì)胞在胎盤中行使著造血的功能。胎兒出生后剝離的胎盤內(nèi)所含的造血干細(xì)胞，可以分化形成各種血細(xì)胞(紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板等)的祖宗，注射到體內(nèi)可以發(fā)揮造血功能。臍血又稱胎盤血或臍帶血，是胎兒出生時臍帶內(nèi)和胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液。2000年，Erices等［1］報(bào)道臍血中含有豐富的造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell/mesenchymal progenitor cell，MSC/MPC)。臍血干細(xì)胞是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一類具有與骨髓干細(xì)胞相同的多向分化潛能的原始祖細(xì)胞［2］。臍血干細(xì)胞具備自我更新和增殖的能力，并能在特定因素的影響或誘導(dǎo)下，向各種細(xì)胞或組織分化。同時，臍血具有淋巴細(xì)胞抗原性弱、功能相對不成熟、移植后發(fā)生移植物抗宿主病的風(fēng)險(xiǎn)較低等特點(diǎn)，并且來源廣，不受倫理和道德的限制，因此是干細(xì)胞移植的重要來源之一，具有廣泛應(yīng)用于臨床組織工程學(xué)的巨大潛能。

研究發(fā)現(xiàn)，人臍帶血中含有間充質(zhì)干細(xì)胞，在一定的條件下能向肝細(xì)胞定向分化［3］。張芳婷等［4］將臍血單個核細(xì)胞(MNC)與受損傷小鼠肝臟共培養(yǎng)以探討人臍血干細(xì)胞是否可以在體外模擬的肝損傷微環(huán)境中轉(zhuǎn)化為肝細(xì)胞。其研究結(jié)果證實(shí)在臍血單個核細(xì)胞與受損傷肝臟共培養(yǎng)的條件下，臍血干細(xì)胞有向肝細(xì)胞分化的趨向。范燁等［5］觀察肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)作用下，臍血干細(xì)胞在體內(nèi)向肝細(xì)胞分化的情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HGF可以促進(jìn)臍血干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化，并發(fā)揮肝細(xì)胞功能。張永紅等［6］觀察黃芪注射液在體內(nèi)外促進(jìn)臍血干細(xì)胞向肝細(xì)胞的分化，以及增強(qiáng)臍血干細(xì)胞移植治療大鼠肝衰竭的效果，提示黃芪在體內(nèi)及體外均可以促進(jìn)人臍血干細(xì)胞生長并分化為肝細(xì)胞，減輕肝臟損害，增強(qiáng)臍血干細(xì)胞移植治療肝衰竭的效果。黃韜等［7］證實(shí)臍血在CCl4導(dǎo)致的肝臟損傷的特殊微環(huán)境內(nèi)能分化為肝細(xì)胞，并表達(dá)白蛋白，其表達(dá)強(qiáng)度與輸入的干細(xì)胞數(shù)量有關(guān)。

上述臍血干細(xì)胞體內(nèi)誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞的研究成果主要是鼠源性的，那么在人體內(nèi)臍血干細(xì)胞是否能夠分化為成熟的肝細(xì)胞，或在體外給予合適的微環(huán)境的刺激，利用外界的微環(huán)境所提供的信號定向分化為肝細(xì)胞，以期為肝細(xì)胞移植和生物人工肝提供一種新的肝細(xì)胞來源。唐曉鵬［8］探討了臍帶血單個核細(xì)胞定向分化為肝細(xì)胞的能力及條件。采集臍帶血分離單個核細(xì)胞后，在實(shí)驗(yàn)組加入成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)及促進(jìn)肝細(xì)胞生長因子(HGF)或成纖維細(xì)胞生長因子加胎肝上清液培養(yǎng)，對照組只加成纖維細(xì)胞生長因子培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長分化狀況，免疫組化檢測兩組人甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)。結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組可見類圓形及多邊形細(xì)胞，呈類肝細(xì)胞形態(tài)，對照組大多為梭形細(xì)胞，未見多邊形細(xì)胞;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞甲胎蛋白和白蛋白免疫組化染色為陽性，對照組未見甲胎蛋白和白蛋白陽性細(xì)胞。成纖維細(xì)胞生長因子的誘導(dǎo)分化效果優(yōu)于胎肝上清液。實(shí)驗(yàn)結(jié)論，臍帶血單個細(xì)胞在成纖維細(xì)胞生長因子或胎肝上清液的誘導(dǎo)下可以定向分化為能分泌甲胎蛋白和白蛋白的類肝細(xì)胞。Kakinuma等［10］采用去除臍血中的紅細(xì)胞，獲得有核細(xì)胞，以含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中加入重組人纖維細(xì)胞生長因子1(FGF-1)、重組人纖維細(xì)胞生長因子2(FGF-2)、重組人白血病抑制因子(LIF)、重組人肝細(xì)胞因子(SCF)、重組人肝細(xì)胞生長因子(HGF)、重組人抑瘤素M(OSM)誘導(dǎo)，經(jīng)過7 d的培養(yǎng)，檢測出ALB mRNA，14 d和21 d時ALB mRNA表達(dá)更多，第21天的表達(dá)是第7天的40倍，培養(yǎng)21 d時還檢測出CK18、CK19和CS。沒有加入因子的對照組很少細(xì)胞貼壁，不表達(dá)ALB mRNA。表明在培養(yǎng)基中加入細(xì)胞因子FGF-1/2、LIF、SCF、HGF及 OSM 可誘導(dǎo)臍血干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞，而且還可以作為肝移植的細(xì)胞來源。熊中華等［10］初步探索了人臍血來源肝細(xì)胞的可能。其研究采用密度梯度離心法結(jié)合直接貼壁法分離獲得人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞，并冷凍保存，復(fù)蘇后在肝細(xì)胞生長因子和成纖維細(xì)胞生長因子4的誘導(dǎo)下，臍血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞可進(jìn)一步分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞，已分化肝細(xì)胞可影響并誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞分化。免疫組化分析證實(shí)該類細(xì)胞表達(dá)肝細(xì)胞特異性標(biāo)志和肝細(xì)胞特異的生物學(xué)活性，如表達(dá)CK8＆18，分泌白蛋白，胞漿內(nèi)有糖原貯存。

1.2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs):BMSC具有強(qiáng)大的增殖能力和多向分化潛能，且取材方便、安全性高，研究表明來源于中胚層的BMSC可跨越胚層界限，向來源于內(nèi)胚層及外胚層的組織和細(xì)胞分化。目前臨床上開展的干細(xì)胞治療肝硬化以BMSC為多，Kusheda等［11］發(fā)現(xiàn)BMSCs能分化成為成熟肝細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞。Schwartzet等12］證實(shí)成體骨髓干細(xì)胞在體外可被誘導(dǎo)分化為肝干細(xì)胞及肝細(xì)胞，為肝細(xì)胞的增殖找到了重要的肝外來源。Terai等［13］提出將BMSCs移植入肝病患者，發(fā)揮其多分化潛能，使其在肝臟中定植并分化為成熟肝細(xì)胞來替代受損肝臟細(xì)胞發(fā)揮作用。Herzog等［14］證實(shí)在接受骨髓干細(xì)胞移植后的動物和人的肝臟中存在帶有供體基因標(biāo)記的肝細(xì)胞。由干細(xì)胞分化而來的肝細(xì)胞樣細(xì)胞，其細(xì)胞形態(tài)、表面分子標(biāo)志或基因表達(dá)的相似性仍不能構(gòu)成真正意義上肝干細(xì)胞分化，還需要鑒定有無肝干細(xì)胞功能的分化，白蛋白、甲種胎兒球蛋白等是肝干細(xì)胞的主要標(biāo)志物。Snvkers等［15］的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)分化后的干細(xì)胞不僅有形態(tài)上的分化，也有功能上的分化。BMSCs在一定刺激因子影響下可以向骨組織細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肝細(xì)胞、上皮細(xì)胞、胰島細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等成熟組織細(xì)胞分化［16］。骨髓造血干細(xì)胞和BMSCs都有向肝細(xì)胞分化的能力，都能分化出肝干細(xì)胞樣細(xì)胞，但是二者的分化潛能有很大不同。造血干細(xì)胞容易分化為甲種胎兒球蛋白表達(dá)增強(qiáng)、白蛋白表達(dá)減少的肝干細(xì)胞樣細(xì)胞［17］;BMSCs也容易分化為成熟的肝干細(xì)胞樣細(xì)胞，且白蛋白表達(dá)增多，但不表達(dá)早期肝細(xì)胞的特異性基因［18］。因此，造血干細(xì)胞和BMSCs是主要用于自體移植的骨髓干細(xì)胞。造血干細(xì)胞主要分布在成體骨髓，在胚胎卵囊、胚肝、臍血中也有分布，在外周循環(huán)血液中也存在少量外周造血干細(xì)胞，但最容易獲取足量造血干細(xì)胞的組織是成體骨髓［19］。Sakaida等［20］給肝硬化小鼠動物模型移植 BMSCs，發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬肽酶9的表達(dá)減少，而轉(zhuǎn)分化的肝細(xì)胞增多，一定程度上改善了肝硬化的程度。最近又有相關(guān)研究證實(shí)BMSCs具有抑制肝纖維化的作用［21］。BMSCs容易分離、操作簡單、對實(shí)驗(yàn)條件要求低，可自體取材、獲取無肝組織再損傷、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，目前BMSCs和骨髓造血干細(xì)胞被認(rèn)為是治療肝病最合適的干細(xì)胞［22］。

2 干細(xì)胞的調(diào)控

給出適當(dāng)?shù)囊蜃訔l件，對干細(xì)胞的增殖和分化進(jìn)行調(diào)控，使之向指定的方向發(fā)展。

2.1 內(nèi)源性調(diào)控

干細(xì)胞自身有許多調(diào)控因子可對外界信號起反應(yīng)從而調(diào)節(jié)其增殖和分化，包括調(diào)節(jié)細(xì)胞不對稱分裂的蛋白，控制基因表達(dá)的核因子等。另外，干細(xì)胞在終末分化之前所進(jìn)行的分裂次數(shù)也受到細(xì)胞內(nèi)調(diào)控因子的制約。

2.1.1 細(xì)胞內(nèi)蛋白對干細(xì)胞分裂的調(diào)控:干細(xì)胞分裂可能產(chǎn)生新的干細(xì)胞或分化的功能細(xì)胞。這種分化的不對稱是由于細(xì)胞本身成分的不均等分配和周圍環(huán)境的作用造成的。細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白，特別是細(xì)胞骨架成分對細(xì)胞的發(fā)育非常重要。如在果蠅卵巢中，調(diào)控干細(xì)胞不對稱分裂的是一種稱為收縮體的細(xì)胞器，包含有許多調(diào)節(jié)蛋白，如膜收縮蛋白和細(xì)胞周期素A。收縮體與紡錘體的結(jié)合決定了干細(xì)胞分裂的部位，從而把維持干細(xì)胞性狀所必需的成分保留在子代干細(xì)胞中。

2.1.2 轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控:在脊椎動物中，轉(zhuǎn)錄因子對干細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)非常重要。比如在胚胎干細(xì)胞的發(fā)生中，轉(zhuǎn)錄因子Oct4是必需的。Oct4是一種哺乳動物早期胚胎細(xì)胞表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子，它誘導(dǎo)表達(dá)的靶基因產(chǎn)物是FGF-4等生長因子，能夠通過生長因子的旁分泌作用調(diào)節(jié)干細(xì)胞以及周圍滋養(yǎng)層的進(jìn)一步分化。Oct4缺失突變的胚胎只能發(fā)育到囊胚期，其內(nèi)部細(xì)胞不能發(fā)育成內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)。另外白血病抑制因子(LIF)對培養(yǎng)的小鼠ES細(xì)胞的自我更新有促進(jìn)作用，而對人的成體干細(xì)胞無作用，說明不同種屬間的轉(zhuǎn)錄調(diào)控是不完全一致的。又如Tcf/Lef轉(zhuǎn)錄因子家族對上皮干細(xì)胞的分化非常重要。Tcf/Lef是Wnt信號通路的中間介質(zhì)，當(dāng)與β-Catenin形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物后，促使角質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化為多能狀態(tài)并分化為毛囊。

2.2 外源性調(diào)控

除內(nèi)源性調(diào)控外，干細(xì)胞的分化還可受到其周圍組織及細(xì)胞外基質(zhì)等外源性因素的影響。

2.2.1 分泌因子:間質(zhì)細(xì)胞能夠分泌許多因子，維持干細(xì)胞的增殖，分化和存活。有兩類因子在不同組織甚至不同種屬中都發(fā)揮重要作用，它們是TGFβ家族和Wnt信號通路。比如TGF家族中至少有兩個成員能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)嵴干細(xì)胞的分化。最近研究發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)細(xì)胞衍生的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)不僅能夠促進(jìn)多種神經(jīng)元的存活和分化，還對精原細(xì)胞的再生和分化有決定作用。GDNF缺失的小鼠表現(xiàn)為干細(xì)胞數(shù)量的減少，而GDNF的過度表達(dá)導(dǎo)致未分化的精原細(xì)胞的累積。Wnts的作用機(jī)制是通過阻止β-Catenin分解從而激活Tcf/Lef介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)干細(xì)胞的分化。比如在線蟲卵裂球的分裂中，鄰近細(xì)胞誘導(dǎo)的Wnt信號通路能夠控制紡錘體的起始和內(nèi)胚層的分化。

2.2.2 膜蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間的相互作用:有些信號是通過細(xì)胞-細(xì)胞的直接接觸起作用的。β-Catenin就是一種介導(dǎo)細(xì)胞粘附連接的結(jié)構(gòu)成分。除此之外，穿膜蛋白Notch及其配體Delta或Jagged也對干細(xì)胞分化有重要影響。在果蠅的感覺器官前體細(xì)胞，脊椎動物的胚胎及成年組織包括視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮、骨骼肌和血液系統(tǒng)中，Notch信號都起著非常重要的作用。當(dāng)Notch與其配體結(jié)合時，干細(xì)胞進(jìn)行非分化性增殖;當(dāng)Notch活性被抑制時，干細(xì)胞進(jìn)入分化程序，發(fā)育為功能細(xì)胞。

2.2.3 整合素(integrin)與細(xì)胞外基質(zhì):整合素家族是介導(dǎo)干細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)粘附的最主要的分子。整合素與其配體的相互作用為干細(xì)胞的非分化增殖提供了適當(dāng)?shù)奈h(huán)境。比如當(dāng)β1整合素喪失功能時，上皮干細(xì)胞逃脫了微環(huán)境的制約，分化成角質(zhì)細(xì)胞。此外細(xì)胞外基質(zhì)通過調(diào)節(jié)β1整合素的表達(dá)和激活，從而影響干細(xì)胞的分布和分化方向。

3 干細(xì)胞在肝病方面的臨床應(yīng)用

3.1 干細(xì)胞治療疾病的基本原理

對組織細(xì)胞損傷的修復(fù);替代損傷細(xì)胞的功能;刺激機(jī)體自身細(xì)胞的再生功能。干細(xì)胞的研究將為臨床醫(yī)學(xué)提供更為廣闊的應(yīng)用前景，干細(xì)胞移植治療肝病的研究方興未艾。1999年P(guān)etersen等發(fā)現(xiàn)肝干細(xì)胞和一些肝細(xì)胞可能部分來源于骨髓或與骨髓相關(guān)。他們通過以下實(shí)驗(yàn)檢測了這一思路:(1)將一雄性大鼠的骨髓移植到致死量照射的同源雌性大鼠，并用DNA探針檢測受鼠肝內(nèi)有無雄性來源的Y染色體。(2)用表達(dá)組織相容性抗原Ⅱ類抗原L21-6的Lewis大鼠作為受體，不表達(dá)L21-6的Brown-Norway大鼠作為供體進(jìn)行全肝移植，以確定肝外來源的L21-6陽性細(xì)胞是否能夠定位于移植的肝臟。他們發(fā)現(xiàn)，在骨髓移植后13天，在肝內(nèi)檢測到了Y染色體信號，在這一時間卵圓細(xì)胞開始分化為肝細(xì)胞。如果分化為肝細(xì)胞的卵圓細(xì)胞來自肝臟，那么將不會有肝細(xì)胞表達(dá)陽性的Y染色體信號，但結(jié)果顯示，一些肝細(xì)胞表達(dá)明顯的Y染色體信號，表明它們來源于骨髓供體細(xì)胞。同樣，在全肝移植后發(fā)現(xiàn)，在移植的肝臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)有明顯的L21-6陽性細(xì)胞，表明一些卵圓細(xì)胞來源于肝外，而那些來源于肝內(nèi)的卵圓細(xì)胞則L21-6陰性，實(shí)驗(yàn)表明，骨髓中含有能夠分化為肝細(xì)胞潛能的干細(xì)胞，一些卵圓細(xì)胞有可能來源于骨髓。骨髓中的肝前細(xì)胞可以用于肝衰竭的移植治療而不必考慮組織相容性抗原的配型問題，因?yàn)榛颊咦陨淼墓撬杓?xì)胞就可以用于移植。骨髓細(xì)胞具有以下優(yōu)點(diǎn):(1)可以制備富含干細(xì)胞的骨髓細(xì)胞。(2)通過轉(zhuǎn)導(dǎo)促進(jìn)基因能夠增加骨髓來源的肝細(xì)胞。(3)可用骨髓來源肝細(xì)胞用于生物人工肝;此外HGF也可以通過促進(jìn)包括骨髓干細(xì)胞的肝前細(xì)胞分化用于肝硬化治療。自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝損傷將為肝臟疾病的治療提供新的途徑。自身免疫性肝病是由自身免疫反應(yīng)引起的一種特殊類型的慢性肝病，過去認(rèn)為自身免疫性肝病比較罕見，近年來由于對此類疾病認(rèn)識不斷深入以及有關(guān)免疫學(xué)檢查方法和相關(guān)檢查方法的引進(jìn)和提高，臨床上發(fā)現(xiàn)中國人群中自身免疫性肝病的患者不斷增多。臨床常見的自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化及原發(fā)性硬化性膽管炎。北京304醫(yī)院肝病中心采用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植方案，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有免疫調(diào)控作用，對自身免疫性疾病能進(jìn)行組織修復(fù)和免疫調(diào)節(jié)，從而達(dá)到治療疾病的目的。

3.2 干細(xì)胞移植入肝主要途徑

3.2.1 經(jīng)肝動脈介入移植:經(jīng)肝動脈介入干細(xì)胞移植技術(shù)相對成熟，操作簡單，是干細(xì)胞移植常用方法之一。就是在數(shù)字減影機(jī)下經(jīng)股動脈插管至肝固有動脈，造影觀察后，經(jīng)肝左、右動脈將干細(xì)胞懸液注入肝臟的操作技術(shù)［23］。有學(xué)者從患者髂后上棘抽取骨髓30～50 mL，采用密度梯度離心法分離出骨髓干細(xì)胞，經(jīng)肝動脈介入將骨髓干細(xì)胞移植入肝臟，移植治療后癥狀明顯改善，肝功能和凝血機(jī)制明顯好轉(zhuǎn)。姚鵬等［24］采用自體骨髓干細(xì)胞經(jīng)肝固有動脈介入移植治療60例慢性重癥肝病患者，取得理想療效，未出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，證實(shí)自體骨髓干細(xì)胞移植治療肝病有效、安全，不良反應(yīng)少。對這一技術(shù)的初步探索已取得初步成功，但遠(yuǎn)期臨床效果還亟待進(jìn)一步探索。

3.2.2 經(jīng)門靜脈移植:干細(xì)胞在體內(nèi)向肝細(xì)胞分化需要嗜肝因子及生長因子等刺激因子組成的微環(huán)境，因此門靜脈在理論上是移植的最佳部位。經(jīng)皮經(jīng)肝在超聲下將干細(xì)胞直接注入門靜脈［25-26］，或在X射線透視下將導(dǎo)管插入門靜脈造影后將干細(xì)胞注入門靜脈［27］，能夠使其最大限度地停留在肝臟，為其在體內(nèi)增殖分化提供合適的微環(huán)境，有學(xué)者將干細(xì)胞注入大鼠門靜脈，發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞主要分布在大鼠肝臟，且在由門靜脈小分支逐漸向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)移行，并與肝細(xì)胞緊密結(jié)合排列在一起，證實(shí)經(jīng)門靜脈移植干細(xì)胞具有良好的選擇性分布作用，但同時研究結(jié)果也提示經(jīng)門靜脈移植方式也可以導(dǎo)致門靜脈高壓，肝臟損傷，肺和腦等其他臟器發(fā)生移植細(xì)胞的遷移［28］。Yannaki等［29］用粒細(xì)胞集落刺激因子動員骨髓后收集骨髓干細(xì)胞治療2例肝硬化患者，發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)血管形成增多，Child、MELD評分改善，術(shù)后34周未因?yàn)楦斡不≡褐委煛igashiyama等［30］的相關(guān)研究證實(shí)自體干細(xì)胞移植可以改善肝功能，延緩或阻止肝纖維化的發(fā)生，降低并發(fā)癥發(fā)生。Pai等［31］采用自體干細(xì)胞移植治療9例肝硬化患者也取得相似的療效。

3.2.3 靜脈輸入:將分離好的干細(xì)胞稀釋于50～100 mL生理鹽水中，經(jīng)靜脈緩慢滴入體內(nèi)。干細(xì)胞具有歸巢特性，在有損傷的部位會高濃度聚集，理論上入肝的干細(xì)胞數(shù)量相對會少一些，目前此途徑較少用，只有其他方式不適合或患者要求時可選用。

綜上所述，干細(xì)胞移植治療肝硬化作為一種新的治療手段，已應(yīng)用于臨床，也引起了研究熱潮。不論是自體骨髓干細(xì)胞還是臍血干細(xì)胞，其來源充足，容易獲得，增殖能力強(qiáng)，可定向分化，移植后排斥反應(yīng)低，干細(xì)胞移植技術(shù)成熟，操作相對簡單，安全性高，風(fēng)險(xiǎn)小，數(shù)日可出院，價格低廉，值得臨床推廣。但其作用機(jī)制及移植方式的選擇還有待進(jìn)一步深入研究。

:

［1］Erices A，Conget P，Minguell JJ.Mesenchymal progenitor cellsin human umbilical cordblood［J］.Br J Haematol，2000，109(1):235 -242.

［2］田曉寧.臍血干細(xì)胞的特性及其臨床應(yīng)用［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(36):7197-7200.

［3］陳祖軒，劉漢鋒.人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞有誘導(dǎo)肝樣細(xì)胞研究進(jìn)展［J］.西部醫(yī)學(xué)，2008，20(2):407 -410.

［4］張芳婷，于潔，葉靜，等.人臍血干細(xì)胞分化為肝細(xì)胞的研究［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2005，13(2):177 -179.

［5］范燁，王學(xué)浩，張峰，等.HGF質(zhì)粒體內(nèi)表達(dá)誘導(dǎo)臍血干細(xì)胞向肝系細(xì)胞分化［J］.世界華人消化雜志，2006，14(8):767-771.

［6］張永紅，曾妍，唐曉鵬.黃芪注射液促進(jìn)臍血干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2010，14(1):103-107.

［7］黃韜，李波，林浩銘，等.臍血干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的初步研究［J］.中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2007，14(4):423-427.

［8］唐曉鵬，張旻，陳麗敏，等.臍帶血單個核細(xì)胞體外培養(yǎng)分化為肝細(xì)胞的試驗(yàn)觀察［J］.中國輸血雜志，2006，19(6):435-437.

［9］Kakinuma S，Tanaka Y，Chinzei R，et al.Human umbilical cord blood as a source of transplantable hepaticprogenitorcells［J］.Stem Cells，2003，21(2):217 -227.

［10］熊中華，許倩，陸德云，等.凍存人臍血充質(zhì)干細(xì)胞向類肝細(xì)胞的誘導(dǎo)分化［J］.中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2007，11(7):1252 -1255.

［11］Kushida T，lnaba M，Hisha H，et al.Crucial role of donorderived stromal cells in successful treatment for intractable autoimmune diseases in mrl∕lpr mice by bmt via portal vein［J］.Stem Cells，2001，19(3):226 -235.

［12］Schwartz RE，Reyes M，Koodie L，et al.Multipotent adult progenitor cells from bone marrow differentiate into functional hepatocyte - like cells［J］.J Clin lnvest，2002，109(10):1291-1302.

［13］Terai S，Sakaida，Nishinae H，et al.Lesson from the GFP/CCl4 model-translational research project:the development of cell therapy using autologous bone marrow cells in patients with liver cirrhosis［J］.J Hepatobiliary Pancreat Surg，2005，12(3):203 -207.

［14］Herzog EL，Chai L，Krause DS.Plasticity of marrow - derived stem cells［J］.Blood，2003，102(10):3483 -3493.

［15］Snvkers S，Vanhaecke T，De Becker A，et al.Chronmatin remodeling agent trichostin A:a key-factor in the hepatic differention of human mesenchymal stem cells derived of adult bone marrow［J］.BMC Dev Biol，2007，7(24):1 -15.

［16］Mimeault M，Batra SK.Recent progress on normal and malignat pancreatic stem/progenitor cell research:therapeutic implications for the treatment of type 1 or 2 diabetes mellitus and aggressive pancreatic cancer［J］.Gut，2008，57(10):1456-1468.

［17］王帥，胡大榮，姚鵬，等.肝硬化患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)［J］.中國臨床康復(fù)，2006，10(5):1 -3.

［18］Shu SN，Wei L，Wang JH，et al.Hepatic differentiation capability of rat bone marrow-derived mesenchynal stem cells and hematopoietie stem cell［J］.World J Gastroen-terol，2004，10(19):2818 -2822.

［19］宋向奎，劉健，曹名波，等.經(jīng)肝動脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化30例［J］.中國實(shí)用醫(yī)刊，2010，37(13):72 -73.

［20］Sakaida l，Terai S，Yamamoto N.et al.Transplantation of bone marrow cells reduses CCl4-induced liver fibrosis in mice［J］.Hepatology，2004，40(6):1304 -1311.

［21］Chang YJ，Liu Jw，Li PC，et al.Mesenchymal stem cells facilitate recovery from chemically induced Liver damage and decrease 1iver fibrosis［J］.Life Sci，2009，85(13 - 14):517-525.

［22］劉孫琴，程靜，董明國，等.自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償肝硬化后檢驗(yàn)指標(biāo)的改變和意義［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26(24):4588 -4590.

［23］金波，孟繁平，馮宇，等.肝動脈超選灌注自體骨髓干細(xì)胞治療失代償期乙型肝炎肝硬化的臨床研究［J］.傳染病信息，2011，24(3):143 -146.

［24］姚鵬，胡大榮，王帥，等.自體骨髓干細(xì)胞移植治療慢性重癥肝病 60例［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2005，21(19):2143-2145.

［25］孫厚坦，陳朝旻，趙威武.超聲引導(dǎo)下經(jīng)門靜脈穿刺干細(xì)胞移植治療肝纖維化［J］.中國介入影像與治療學(xué)，2011，8(4):354 -355.

［26］王方，張靜，周新人，等.經(jīng)門靜脈自體骨髓干細(xì)胞移植治療失代償期肝硬化18例療效觀察［J］.實(shí)用肝臟病雜志，2011，14(3):200 -201，206.

［27］李楠，石玉玲，李娜，等.經(jīng)門靜脈外周血干細(xì)胞移植治療肝硬化失代償期的療效研究［J］.中國全科醫(yī)學(xué)，2010，13(8):852 -854.

［28］Arikura J，lnagaki M，Huiling X，et al.Colonization of albumin-producing hepatocytes derived from transplanted F344rat bone marrow cells in the liver of congenin Nagase's analbumic rats［J］.J Hepatol，2004，41(2):215 -221.

［29］Yannaki E，Anagnospoulos A，Kapetanos D，et al.Lasting amelioration in the clinical course of decompensatral blood stem cells［J］.Experimental Hematol，2006，34(11):1583-1587.

［30］Higashiyama R，lnagaki Y，Hong YY，et al.Bone marrow -derived，cells express matrix metalloproteinases and contribute to regression of liver fibrosis in mice［J］.Hepatology，2007，45(1):213 -222.

［31］Pai M，Zacharoulis D，Milicevie MN，et al.Autologous infusion of expanded mobilized adult bone marroe-derived CD34+cells into patients with alcoholic liver cirrhosis［J］.Am J Gastroenterol，2008，103(8):1952 -1958.

Advances in stem cells in the treatment of cirrhosis of the liver

ZHOU Xin-ren，WANG Fang
(Department of Infection，Lanzhou Military Region General Hospital，Lanzhou730070，China)

［Abstract］Patients with liver cirrhosis caused by various causes serious impact on the life and health，it is lack of effective treatment methods.In recent years，stem cell transplantation in the treatment of end -stage liver disease has become a new treatment method，the relatively simple technology process，the preparation of the stem cells by choosing a good way of transplantation to the patients in the liver，and differentiate into more healthy liver cells，so as to improve liver function.This article namely summarize the clinical transplantation treatment cirrhosis of the liver stem cells and their progress.

［Key words］stem cells;liver cirrhosis;progress

R575.2

A

1671-7295(2013)05-0490-06

周新人，王方.干細(xì)胞治療肝硬化進(jìn)展［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(5):490-495.

10.11724/jdmu.2013.05.21

甘肅自然科學(xué)基金項(xiàng)目(6ZS026-A05-081)

周新人 (1975-)，男，甘肅蘭州人，主治醫(yī)師。E-mail:grkzxr@sohu.com

2013-05-11;

2013-09-04)