ATB NEW細(xì)菌鑒定儀對布魯桿菌病診斷的局限性

李靜，姚文海，張蕊

(新疆維吾爾自治區(qū)傳染病醫(yī)院檢驗(yàn)科，新疆烏魯木齊 830013)

布魯桿菌病(Brucellosis，簡稱布病)是由布魯桿菌引起的一種人畜共患的急、慢性傳染病，主要由得病的牲畜(牛、羊、豬等)，經(jīng)過消化道、呼吸道、生殖器官、眼結(jié)膜和損傷皮膚等途徑傳播。人患病后病情復(fù)雜，癥狀與多種疾病類似，臨床難以鑒別，容易發(fā)生誤診［1-2］。人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)是有鞭毛的革蘭陰性需氧菌，屬蒼白桿菌屬，為條件致病菌，臨床比較少見。目前，實(shí)驗(yàn)室對布魯桿菌感染的診斷檢查主要依靠血清學(xué)檢查和病原菌檢查，其中，細(xì)菌學(xué)檢測是診斷布病的金標(biāo)準(zhǔn)［3］。本研究對900例確診的布病病人血標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和鑒定，對ATB NEW細(xì)菌鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌的標(biāo)本用手工法復(fù)檢，并隨機(jī)抽取10例樣本用VITEK 2細(xì)菌鑒定儀復(fù)檢，對檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回顧性分析。

1 資料和方法

1.1 一般資料

900例布病病人均來源于本院2009年5月至2011年8月臨床根據(jù)衛(wèi)生部地方病防治司頒布的布病診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］確診的住院和門診患者。臨床癥狀以發(fā)熱(高燒)為主，并伴有肝脾腫大和關(guān)節(jié)酸疼。居住地區(qū)分布全疆，主要集中于畜牧業(yè)較發(fā)達(dá)的疆內(nèi)地區(qū)，各地區(qū)之間無明顯差異。

1.2 細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定

臨床留取布病患者的靜脈血5～10 ml接種于法國梅里埃公司生產(chǎn)的血培養(yǎng)瓶中，放置全自動血培養(yǎng)儀Bacd/Alert 60中進(jìn)行培養(yǎng)，陽性報警后轉(zhuǎn)種血平皿或巧克力平皿培養(yǎng)。細(xì)菌鑒定采用法國梅里埃公司生產(chǎn)的ATB NEW細(xì)菌鑒定儀。

對經(jīng)ATB NEW鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌的所有標(biāo)本用手工生化反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢，具體反應(yīng)為:氧化酶試驗(yàn)，觸酶試驗(yàn)，硝酸鹽還原試驗(yàn)，葡萄糖、阿拉伯糖和半乳糖分解試驗(yàn)，硫化氫、精氨酸雙水解試驗(yàn)，動力試驗(yàn)，吲哚試驗(yàn)，明膠和DNA水解試驗(yàn)。

同時隨機(jī)抽取10例經(jīng)ATB NEW鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌的標(biāo)本，用VITEK 2細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行確認(rèn)。

2 結(jié) 果

900例布病病人血標(biāo)本經(jīng)全自動血培養(yǎng)儀Bacd/Alert 60培養(yǎng)，170例陽性標(biāo)本經(jīng)ATB NEW細(xì)菌鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌;血培養(yǎng)瓶報警時間為3～5 d，傳種在血平板和巧克力平板上生長緩慢，48 h出現(xiàn)針尖樣大小菌落、革蘭染色為陰性的短小桿菌。

170例陽性標(biāo)本用手工生化反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢，結(jié)果顯示:所有標(biāo)本氧化酶試驗(yàn)、觸酶試驗(yàn)陽性，還原硝酸鹽，分解葡萄糖，有時不分解阿拉伯糖和半乳糖，硫化氫陰性，動力試驗(yàn)陽性，吲哚試驗(yàn)、明膠和DNA水解試驗(yàn)陰性，與布魯桿菌生化反應(yīng)特征一致。

隨機(jī)抽取的10例經(jīng)ATB NEW鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌的標(biāo)本，用VITEK 2細(xì)菌鑒定儀復(fù)檢，均為馬耳他布魯桿菌。

3 討 論

1985年WTO布病專家委員會根據(jù)病原性、宿主特性和表型特征的不同，將布魯菌屬分為馬爾他布魯菌(B．melitensis)、流產(chǎn)布魯菌(B．a(chǎn)bortus)、綿羊布魯菌(B．ovis)、豬布魯菌(B．suis)、犬布魯菌(B．canis)和沙林鼠布魯菌(B．neotomae)6個種［5］。布魯菌為革蘭陰性短小球桿菌，兩端鈍圓，偶見兩極濃染，無動力，無芽孢，無莢膜，常單個存在;對營養(yǎng)要求較高，生長緩慢，初次分離時需5%～10%的二氧化碳，培養(yǎng)基中需含有維生素B1、煙酸、生物素等物質(zhì);生化反應(yīng)為氧化酶、觸酶試驗(yàn)陽性，還原硝酸鹽，分解葡萄糖，有時不分解阿拉伯糖和半乳糖;硫化氫、精氨酸雙水解實(shí)驗(yàn)陽性。

人蒼白桿菌是人體正常菌群之一，屬條件致病菌，在免疫抑制及免疫力低下人群中可致病。它是具有平行邊和圓端的桿菌，通常單個出現(xiàn)，細(xì)胞染色為革蘭陰性。以周生鞭毛運(yùn)動;專性好氧，嚴(yán)格呼吸代謝，以氧為末端電子受體;最適生長溫度為20～37℃，在營養(yǎng)瓊脂上的菌落無色;觸酶、氧化酶陽性，吲哚陰性，不水解七葉靈、明膠和DNA;能利用各種氨基酸、有機(jī)酸和碳水化合物為碳源。

由于兩種細(xì)菌均為革蘭陰性桿菌，氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽性，形態(tài)和生化反應(yīng)相近，因而極易混淆，僅以硫化氫、精氨酸雙水解、動力試驗(yàn)陽性作為兩者的鑒別依據(jù)，而馬爾他布魯菌硫化氫又為可陰可陽，若生化反應(yīng)不典型時，容易發(fā)生錯誤鑒定。

本研究通過對確診的900例布病病人進(jìn)行血培養(yǎng)，170例陽性樣本轉(zhuǎn)種血平板，繼續(xù)培養(yǎng)48 h獲得了針尖大小的菌落;通過革蘭染色發(fā)現(xiàn)，其不能很好地被堿性復(fù)紅染色，著色弱，染色后呈現(xiàn)細(xì)沙狀，為革蘭陰性小桿菌或球桿狀，不形成芽胞，有時易被忽略;經(jīng)ATB NEW細(xì)菌鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌患者血培養(yǎng)結(jié)果與臨床診斷不符，與流行病學(xué)及臨床癥狀表現(xiàn)特征明顯不一致。用手工生化反應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢，結(jié)果顯示:生化反應(yīng)特征與布魯桿菌一致，鑒定為布魯桿菌;同時隨機(jī)抽取了10例標(biāo)本用VITEK 2細(xì)菌鑒定儀確認(rèn)，結(jié)果為馬耳他布魯桿菌。

由于全自動細(xì)菌鑒定儀的普遍使用，使臨床微生物的鑒定更加客觀和規(guī)范，然而由于所選用的細(xì)菌鑒定儀的計算機(jī)細(xì)菌庫容和鑒定板條中生化反應(yīng)數(shù)量的限制，有可能使同一細(xì)菌在不同的細(xì)菌鑒定儀上的鑒定結(jié)果不一致，給臨床的診斷和治療造成困難。本研究結(jié)果顯示，170例ATB NEW細(xì)菌鑒定儀鑒定為人蒼白桿菌病例均為誤報，提示臨床上如發(fā)現(xiàn)ATB NEW細(xì)菌鑒定儀上鑒定為人蒼白桿菌的標(biāo)本，應(yīng)及時用手工或用庫容較大的全自動細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行復(fù)檢，以免發(fā)生錯誤診斷;若用手工方法復(fù)檢，硝酸鹽還原試驗(yàn)，硫化氫、精氨酸雙水解試驗(yàn)，動力試驗(yàn)可以作為人蒼白桿菌與布魯桿菌鑒別診斷的生化反應(yīng)試驗(yàn)。

總之，血培養(yǎng)是布病診斷較可靠的實(shí)驗(yàn)室方法之一，本研究結(jié)果顯示，血培養(yǎng)對布魯桿菌的檢出率為18.9%，與文獻(xiàn)報道基本一致，與病程的不同階段有關(guān)［4］;對血培養(yǎng)陰性的布病疑似病人，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)史和臨床癥狀，用血清學(xué)方法，如琥紅平板試驗(yàn)(rose bengal plate agglutination test，RBPT)和布病試管凝集試驗(yàn)(serum tube agglutination test，SAT)等［6-7］進(jìn)行確認(rèn)，多種方法相互補(bǔ)充，綜合判斷，為臨床對布病的診斷和治療提供依據(jù)。

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