急性上呼吸道感染患者血常規(guī)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞變化的年齡和性別差異分析

周青，周憲賓，張巧鳳，郭鈺琪，郝鈺，王麗，趙向忠，李霞，張洪海，姚成芳

（1山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，山東濟(jì)南250062；2濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272000）

急性上呼吸道感染患者血常規(guī)中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞變化的年齡和性別差異分析

周青1,2，周憲賓1，張巧鳳1，郭鈺琪1，郝鈺1，王麗1，趙向忠1，李霞1，張洪海1，姚成芳1

（1山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，山東濟(jì)南250062；2濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院，山東濟(jì)寧272000）

目的探討急性上呼吸道感染患者血常規(guī)中中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞變化的年齡差異和性別差異及其臨床意義。方法291例呼吸道感染患者和219例正常志愿者，分為六個(gè)年齡組，采用VCS法檢測患者外周血中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的變化狀態(tài)；采用流式細(xì)胞標(biāo)記法檢測外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群的比例變化和TNFα分泌能力，并分析性別和年齡差異。結(jié)果急性呼吸道感染患者外周血中中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和比例均明顯升高，中性粒細(xì)胞比例升高1～2倍是白細(xì)胞升高的主要原因，淋巴細(xì)胞比例明顯下降。該類患者血常規(guī)中中性粒細(xì)胞隨著增齡而升高，增幅也隨之升高；而淋巴細(xì)胞隨著增齡而明顯降低。女性在更年期血常規(guī)中中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的變化明顯低于男性和其他組患者（P＜0.05）。另外，隨著淋巴細(xì)胞比例降低，CD4/CD8隨著年齡的增長而顯著升高，分泌TNFα能力在30～40歲組明顯高于其他年齡組。結(jié)論衰老和激素水平可以影響上呼吸道感染患者血常規(guī)中中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的水平，這一結(jié)果可為臨床病情判斷及針對不同人群采用不同防治方案提供重要依據(jù)。

呼吸道感染；血常規(guī)；T細(xì)胞；細(xì)胞因子；年齡差異；性別差異

急性上呼吸道感染[1]（acute upper respiratory tract infection,AURI）簡稱上感，常指鼻、咽、扁桃體、喉部黏膜的急性炎癥。發(fā)病率占兒科疾病首位。70%～80%以上由病毒所致，另有20%～30%由細(xì)菌引起，可單純發(fā)生或繼發(fā)于病毒感染之后發(fā)生。病原體感染人體后，可引起不同炎癥反應(yīng)，多種細(xì)胞參與防止入侵、殺滅和清除病原體、終止感染等過程，如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等。通過對這些細(xì)胞或者分子的檢測就可以了解病毒或者細(xì)菌感染狀況及人體自身的免疫狀況，但目前對這些血常規(guī)檢測缺少年齡和性別差異分析，在應(yīng)對急性上呼吸道感染時(shí)，對所有人群采用相同的防治方法，導(dǎo)致防治療效偏差。因此，探討急性上呼吸道感染伴有發(fā)熱患者血常規(guī)中中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞變化的年齡差異和性別差異，將對臨床科學(xué)防治急性上呼吸道感染提供重要依據(jù)。

1臨床資料

1.1一般資料呼吸道感染患者291例為2007年7月—2012年7月我院門診患者，男170人，女121人，年齡6～72歲。同時(shí)以219例正常人員做對照。入選標(biāo)準(zhǔn)及分組：診斷符合呼吸道感染的患者。其中＜20歲患者66例(男43例，女23例)、20歲～30歲患者45例(男23例，女22例)、30歲～40歲患者46例(男30例，女16例)、40歲～50歲患者41例(男25例，女15例)、50歲～60歲患者42例(男22例，女20例)、＞60歲患者51例（(男27例，女24例)。對照組219例體檢正常人員，其中＜20歲23例(男13例，女10例)、20歲～30歲44例(男24例，女20例)、30歲～40歲42例(男20例，女22例)、40歲～50歲34例(男18例，女16例)、50歲～60歲39例(男24例，女15例)、＞60歲患者36例（(男20例，女16例)。排除標(biāo)準(zhǔn)：上述患者經(jīng)詢問病史和進(jìn)一步檢查排除了其他感染性疾病或者血液病的患者，排除了懷孕的患者。

1.2儀器與試劑儀器：SYSMEX800i血常規(guī)分析儀，顯微鏡，CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，倒置相差顯微鏡，倒置熒光顯微鏡，高速低溫離心機(jī)(SORVALL SUPER T21,USA)，流式細(xì)胞儀（BECKMAN,USA）；試劑：原裝進(jìn)口SYSMEX稀釋液、染液、鞘液等，RPMI1640培養(yǎng)基（Gibco公司），PMA(phorbolmyristate acetate)、離子霉素（Ionomycin）和莫能霉素（Monensin）均購自Sigma公司。FITC標(biāo)記的CD4抗體、PC5標(biāo)記的CD3抗體和PE標(biāo)記的CD8和TNFa抗體均為美國BD公司產(chǎn)品。

1.3方法

1.3.1血樣處理與血常規(guī)檢測所有患者均于肘靜脈抽血1.5mL，EDTA-K2抗凝，室溫放置于半小時(shí)內(nèi)采用SYSMEX800i血常規(guī)分析儀檢測（包括NEU、LYM、MON、PLT等）。

1.3.2流式細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)采用流式細(xì)胞標(biāo)記技術(shù)檢測患者外周血單個(gè)核細(xì)胞CD3、CD4、CD8、TNFα細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。主要步驟：無菌取外周血制備單個(gè)核細(xì)胞懸液，PBS洗兩遍，取一部分細(xì)胞標(biāo)記CD4-FITC、CD3-PC5、CD8-PE等熒光抗體，檢測外周血CD4/CD8 T細(xì)胞亞群比例變化。另外，剩余細(xì)胞用RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為5× 106個(gè)/mL，接種于24孔板（2mL/孔），分別加入PMA 30mg/L、Ionomycin 1mg/L、Monensin 1.7mg/L，37℃、5%CO2刺激培養(yǎng)4 h。收集脾細(xì)胞，加入大鼠血清4℃避光放置30min，加入抗CD4-FITC、CD3-PC5、PE標(biāo)記的TNFa等熒光抗體，4℃避光30min；細(xì)胞洗滌后加入固定液4℃避光30min；加入穿膜液洗滌細(xì)胞，細(xì)胞重懸于100μL穿膜液中，加入內(nèi)標(biāo)抗體：4℃，避光2～3 h,穿膜液及PBS洗滌后，用于流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)外因子的檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS15.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。

2結(jié)果

2.1 AURI患者中性粒細(xì)胞的年齡與性別差異性變化健康人群隨著年齡的增長其中性粒細(xì)胞沒有顯著差異，但在AURI患者中，中性粒細(xì)胞總數(shù)明顯升高，約是正常群體地兩倍。青少年時(shí)期女性升高幅度明顯高于男性，隨著年齡的增長，呼吸道感染患者中性粒細(xì)胞的升高幅度明顯增加，升高幅度和升高百分率沒有明顯性別差異，見圖1。

圖1 AURI患者中性粒細(xì)胞的的年齡與性別差異變化

2.2 AURI患者淋巴細(xì)胞的年齡與性別差異性變化

在正常人群中，隨著年齡的增長淋巴細(xì)胞比例呈下降趨勢，在各年齡段，女性淋巴細(xì)胞比例略低于男性。在AURI患者中，淋巴細(xì)胞比例隨著增齡明顯下降，其下降幅度與增齡成正比。女性在更年期其淋巴細(xì)胞比例呈大幅下降狀態(tài)（見圖2）。

圖2 AURI患者淋巴細(xì)胞的年齡與性別差異性變化

2.3 AURI患者T細(xì)胞亞群的年齡與性別差異性變化在AURI急性期，中性粒細(xì)胞比值升高和淋巴細(xì)胞比值下降是患者突出的血象變化特征，同時(shí)，我們進(jìn)一步檢測了淋巴細(xì)胞的主體T細(xì)胞亞群的變化特征。研究發(fā)現(xiàn)：隨著增齡T細(xì)胞總數(shù)基本不變，但其亞群的分布發(fā)生變化。CD8+T細(xì)胞減少，而CD4+T細(xì)胞增多，CD4/CD8比值明顯增高，女性比值明顯低于男性（P＜0.05），見圖3。

2.4 AURI患者TNFα分泌性T細(xì)胞亞群的年齡與性別差異性變化隨著AURI淋巴細(xì)胞比值下降和CD4+T細(xì)胞比例升高，CD4+T細(xì)胞亞群分泌炎性因子TNFα的能力也隨之變化。研究發(fā)現(xiàn)：正常人群中CD4+T細(xì)胞分泌TNFα的能力沒有年齡差異，但女性明顯高于男性（P＜0.05）；AURI女性患者隨著增齡CD4+T細(xì)胞分泌TNFα的能力逐漸增加，AURI男性患者CD4+T細(xì)胞分泌TNFα的能力在40歲之前逐漸增加，在40歲達(dá)到高峰。（見圖4）。

圖3 AURI患者CD4+/CD8+T細(xì)胞亞群比值的年齡與性別差異

圖4 AURI患者T細(xì)胞亞群分泌炎性因子TNFα的年齡與性別差異

圖例說明：檢測了各年齡組患者和健康志愿者的外周血T細(xì)胞亞群分泌變化。主要采用熒光抗體標(biāo)記患者外周血CD4+、TNFα、CD3+表達(dá)狀態(tài)，用CD3射門后分析CD4+TNFα+比值變化。(A)：流式分析散點(diǎn)圖；(B)：采用SPSS15.5統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。

3討論

血常規(guī)檢測是AURI最常用的檢測項(xiàng)目之一。其檢測速度快、效率高、操作簡單、價(jià)格便宜，因此普遍應(yīng)用[2,3]。疾病感染與轉(zhuǎn)歸的過程即是人體內(nèi)免疫應(yīng)答的過程。影響人體免疫功能的因素很多，Nagel經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)老年人抑制T細(xì)胞減少，而輔助T細(xì)胞增多。許多研究已證明雌、雄兩性存在免疫應(yīng)答差異[4]。有資料指出[5]，年輕婦女的抑制性細(xì)胞毒性細(xì)胞的比例高于年輕男性。

健康人群中性粒細(xì)胞在成年后至老年基本穩(wěn)定，沒有明顯男女差異。20歲前由于年齡跨度大于其他對照組，所以標(biāo)準(zhǔn)差較大，但女性略高于男性。在呼吸道感染患者中也存在增齡增長趨勢，但是在20～30歲階段男性改變大于女性。在正常人群中，淋巴細(xì)胞比例隨著年齡的增長明顯下降，60歲以下各年齡段女性淋巴細(xì)胞比例略高于男性。在急性感染患者中，女性的淋巴細(xì)胞比例優(yōu)勢在激素急劇變化階段丟失，50歲后相對恢復(fù)。隨著淋巴細(xì)胞比例降低，CD4/CD8隨著年齡的增長而顯著升高，并且分泌TNFα能力明顯升高（P＜0.05）。急性上呼吸道感染發(fā)熱患者在白細(xì)胞升高的同時(shí)，淋巴細(xì)胞比例顯著降低，但炎性CD4+T淋巴細(xì)胞比例相對升高，增幅與增齡呈正相關(guān)。衰老和激素水平的改變影響上呼吸道感染患者血常規(guī)中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的改變，這可為臨床病情分析及針對不同人群提出不同防治方案提供有力的依據(jù)。

[1]戴立人，曾吉，辛建保.呼吸道感染病原學(xué)診斷及臨床對策[J].臨床內(nèi)科雜志，2001,18（5）：398-1100.

[2]馬麗旭.血清C-反應(yīng)蛋白測定在小兒急性呼吸道感染中的應(yīng)用[J].重慶醫(yī)學(xué)，2006，35(13)：1247.

[3]李興華，王榮國.兒科疾病診療標(biāo)準(zhǔn)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997：110-111.

[4]Hirst M.Transitions to informal care in Great Britain during the 1990s[J].JEpidemiolCommunity Health,2002，56(8)：579-587.

[5]李紅梅，仲人前，錢嘵萍，等.年齡、性別在幼鼠胸腺T細(xì)胞增殖中的作用[J].中國免疫學(xué)雜志，2004，20（5）：297-299.

The Age And Gender Differences of Neu trophiles And Lym phocytes In PatientsW ith Acu te Up-resp iratory In fection

Zhou Qing1,2，Zhou Xianbing1，Zhang Qiaofeng1，et a l
（1Shangdong Academy ofMedical Sciences,Jinan 250000,Shandong；2The firstPepole'sHospitalofJining,Jining 272000

Ob jectiveTo approach the age differences and the gender differences of blood routine examination among patients w ith acute respiratory infection,and the significance of these differences.M ethods291 patients w ith acute respiratory nfection and 219 healthy person,for six age groups,use VCSmethod to test the routine blood,use the flow cytome-try to test the change of the CD4+、CD8+T cells and the secreting of TNF,analysis of the gender and age differences.Resu ltsThe number and the ratio of neutrophiles in patients w ith acute respiratory infection rise clearly.The neutrophiles rise 1～2 timeshigher is themian reason of thewbc rise.The numberof lymphocytes reduce.The neutrophiles and its grow ing rate of the patients increased w ith increasing of the age,but the lymphocytes reduce.The females variation rate of neutrophiles and lymphocytes are less thanmale and other groups of the patientswhen they are inmenopause(40～50yearsold).In addition,w ith the reduce of lymphocytes CD4/CD8 increase alongw ith the increase of the age.The secreting of TNF is apparently higher than othergroups.ConclusionAging and hormone levels can affectneutrophilesand lymphocytes in patientsw ith acute up-respiratory infection which can provide the basis for clinical diagnosis and the offering of different treatments fordifferentpeople.

respiratory infection；routine blood tests；T cell；age differences；gender differences

R725.6

：A

：1008-4118（2013）02-0005-04

10.3969/j.issn.1008-4118.2013.02.02

2013-03-20

作者：周青（1981-），女，漢，在讀研究生，主要從事基礎(chǔ)免疫研究。

姚成芳yaocf9941@163.com

國家自然科學(xué)基金，項(xiàng)目編號：30973807；山東省科技攻關(guān)項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：2012GSF11908。