重慶城口縣產(chǎn)蛋種雞新城疫抗體水平檢測(cè)

陽(yáng) 勇，張薇薇

（1.重慶市城口縣農(nóng)業(yè)委員會(huì)，重慶 城口 405900；2.重慶市城口縣動(dòng)物衛(wèi)生檢疫檢驗(yàn)監(jiān)督所，重慶 城口 405900）

雞新城疫抗體水平是揭示雞體免疫狀況和感染能力的一項(xiàng)重要指標(biāo)，尤其在非典型新城疫疾病診斷中具有重要價(jià)值。為了有效控制其發(fā)生流行，各大進(jìn)出口雞場(chǎng)均定期對(duì)雞群血清進(jìn)行新城疫免疫抗體水平監(jiān)測(cè)。定期隨機(jī)地抽取雞群中0.5%～1%的雞進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果來(lái)確定免疫程序和免疫時(shí)間，可以很好地控制雞非典型新城疫的發(fā)生。近年來(lái)，重慶市城口縣大力發(fā)展城口山地雞，為了了解城口縣城口山地雞種雞的新城疫抗體水平，本文于2012年7月采用血凝試驗(yàn)（HA）和血凝抑制試驗(yàn)（HI）對(duì)城口縣5個(gè)城口山地雞種雞場(chǎng)的新城疫抗體水平進(jìn)行了檢測(cè)，現(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 200份被檢血清 分別來(lái)源于城口縣良鮮養(yǎng)雞場(chǎng)（A）、高觀鎮(zhèn)施禮養(yǎng)雞場(chǎng)（B）、修齊鎮(zhèn)旭輝養(yǎng)雞場(chǎng)（C）、新聯(lián)盟養(yǎng)雞專業(yè)合作社（D）和金安養(yǎng)雞專業(yè)合作社（E）5個(gè)城口山地雞種雞場(chǎng)。隨機(jī)取樣，按常規(guī)方法進(jìn)行翅靜脈采血，每只1～2mL，分離血清置4℃條件下備用。1.1.2 已知血清 雞新城疫陽(yáng)性血清、陰性血清均由西南大學(xué)榮昌校區(qū)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室提供，陽(yáng)性血清抑制效價(jià)為1∶128。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)抗原 雞新城疫活疫苗（La Sota），齊魯動(dòng)物保健品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)是1112014-1。

1.1.4 0.5%雞紅細(xì)胞懸浮液 按文獻(xiàn)資料的方法配制。

1.1.5 稀釋液 0.85%滅菌生理鹽水，臨用時(shí)配制。

1.1.6 常規(guī)儀器 96孔微量U型反應(yīng)板、100 μL微量加樣器、MM-1微型混合器，由西南大學(xué)榮昌校區(qū)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)教研室提供。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 La Soto系疫苗接種雞胚制備抗原 將疫苗用滅菌生理鹽水作10倍稀釋，在10日齡易感雞胚尿囊內(nèi)接種0.1mL，凡接種后72～120h內(nèi)死亡且病變顯著的雞胚，分別收集其尿囊液于消毒試管內(nèi)，保存于冰箱中備用。

1.2.2 雞新城疫病毒紅細(xì)胞凝集（HA）試驗(yàn) 首先用100mL微量加樣器向96孔微量U型反應(yīng)板第1～10孔各加入稀釋液25μL；接著向第l孔內(nèi)加入雞新城疫病毒液25μL，并作倍比稀釋至第9孔，從第9孔中棄去25 μL，第10孔不加病毒液作對(duì)照；再用微量加樣器向每孔內(nèi)加入稀釋液25 μL，然后每孔分別加入0.5%雞紅細(xì)胞懸液25 μL。加樣完畢后于微型混合器上振蕩1 min，室溫下放置30～60min后觀察結(jié)果。操作術(shù)式見(jiàn)表1。

表1 雞新城疫病毒紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA） μL

從表1得出：HA試驗(yàn)的凝集價(jià)為1∶640。

1.2.3 雞新城疫病毒紅細(xì)胞凝集抑制（HI）試驗(yàn) 分別對(duì)每份被檢血清進(jìn)行試驗(yàn)，首先用100μL微量加樣器向96孔微量U型反應(yīng)板第1～8孔各加稀釋液25 μL，第9孔加稀釋液50 μL，第10孔加稀釋液25 μL，第9、10孔分別作紅細(xì)胞對(duì)照；然后在第1孔內(nèi)加被檢血清25 μL，并作倍比稀釋至第8孔，再?gòu)牡?孔中棄去25 μL；接著用100μL微量加樣器從1～8孔和第10孔中加入4個(gè)血凝單位的抗原液25μL；再將96孔微量U型反應(yīng)板在微型混合器上振蕩1min，置室溫下30min；然后再在每孔中分別加入0.5%雞紅細(xì)胞懸液25 μL。加樣完畢后，又在微型混合器上振蕩1 min，置室溫下30～60 min后觀察結(jié)果。試驗(yàn)同時(shí)作陰性血清、陽(yáng)性血清對(duì)照。操作術(shù)式見(jiàn)表2。

表2 雞新城疫病毒紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI） μL

從表2得出：該被檢血清紅細(xì)胞的凝集抑制效價(jià)為1∶80。

2 試驗(yàn)結(jié)果

本試驗(yàn)檢測(cè)了城口縣5個(gè)城口山地雞種雞場(chǎng)共200份產(chǎn)蛋雞的血清樣品，其新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果列于表3。從表3得知：在5個(gè)城口山地雞種雞場(chǎng)的6000只產(chǎn)蛋雞中隨機(jī)檢測(cè)了200只雞的新城疫抗體水平，其抽檢率為3.3%；各個(gè)種雞場(chǎng)的新城疫抗體水平各不相同。

表3 城口縣200份產(chǎn)蛋種雞血清新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論與分析

3.1 首免日齡對(duì)新城疫抗體水平產(chǎn)生有影響 C和E雞場(chǎng)的首免日齡分別是第7日和第8日，A、B、D雞場(chǎng)的首免日齡分別為第6日、第5日、第4日，從檢測(cè)結(jié)果可以看出，首免日齡在第7～8日的雞場(chǎng)的抗體水平較高。據(jù)有關(guān)報(bào)道，按常規(guī)免疫程序于7～10日齡進(jìn)行初次免疫，母源抗體滴度較高的雛雞，首次免疫時(shí)間必須推遲，否則會(huì)導(dǎo)致免疫不全或免疫失敗，本試驗(yàn)與之相符。

3.2 采血時(shí)間與最后一次新城疫免疫的時(shí)間間隔不同，抗體水平也不一樣，并且不同的疫苗達(dá)到峰值的時(shí)間以及維持時(shí)間也不一樣 據(jù)報(bào)道，接種Ⅳ系疫苗，HI抗體在接種后第5d開(kāi)始上升，接種后第11 d達(dá)到峰值，持續(xù)6d保持高滴度抗體水平；接種Ⅰ系疫苗，HI抗體在接種后第4d開(kāi)始上升，接種后第9d達(dá)到峰值；接種油乳劑滅活苗，HI抗體在接種后第5d開(kāi)始上升，接種后第11d達(dá)到峰值，持續(xù)16d保持高滴度抗體水平。試驗(yàn)中C、E雞場(chǎng)的采血時(shí)間與最后一次新城疫免疫的時(shí)間間隔是18 d、25 d；A、D、B雞場(chǎng)的采血時(shí)間與最后一次新城疫免疫的時(shí)間間隔是30d、35d、40d，與報(bào)道相符。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)5個(gè)種雞場(chǎng)產(chǎn)蛋雞的抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，得出C和E雞場(chǎng)的抗體水平較高，其余3個(gè)雞場(chǎng)的抗體水平較低。據(jù)報(bào)道，HI效價(jià)低于3log2時(shí)，必須加強(qiáng)免疫，才能起到良好的保護(hù)作用；HI效價(jià)在4log2～5log2時(shí)，只對(duì)部分雞只產(chǎn)生保護(hù)作用；在5log2～7log2時(shí)，不能抵抗強(qiáng)毒入侵，所以種雞的HI抗體水平應(yīng)在7log2以上。

4 結(jié)論

抽樣檢測(cè)了城口縣5個(gè)種雞場(chǎng)的200只雞的新城疫抗體水平，結(jié)果顯示各雞場(chǎng)的抗體水平不盡相同。

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