胃癌組織中腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1的表達水平及對細胞外基質(zhì)作用的研究

烏力吉白乙，湯媛宇，王宏偉

（1.內(nèi)蒙古民族大學醫(yī)學院病歷科，內(nèi)蒙古通遼028000；2.內(nèi)蒙古通遼市科爾沁區(qū)第一人民醫(yī)院病歷科 028000）

胃癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，而癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移則是其治療的主要難點。近年有研究［1］顯示，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1與胃癌細胞的各種生物學行為具有顯著的相關(guān)性，同時可能影響細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的表達水平，而后者也與癌細胞的分化、浸潤和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切［2］。本次研究選取38例胃癌患者的胃癌組織與38例正常胃黏膜組織，觀察胃癌組織中KISS-1的表達水平與胃癌浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系及其對細胞外基質(zhì)的作用，旨在探討其對胃癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的影響，為今后胃癌的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年10月至2012年6月在通遼市科爾沁區(qū)第一人民醫(yī)院進行胃癌根治術(shù)的38例胃癌患者手術(shù)后預留的新鮮胃癌組織標本，手術(shù)前均未接受化學或放射治療。其中，男23例，女15例，年齡34～79歲，平均（58.6±11.2）歲。分化程度：分化型癌14例，未分化癌24例；浸潤深度：T1～T2（未侵及肌層）27例，T3～T4（侵及肌層）11例；無淋巴轉(zhuǎn)移者25例，有淋巴轉(zhuǎn)移者13例。收集同期胃潰瘍手術(shù)切除后經(jīng)病理檢查確認的正常胃黏膜組織38例。

1.2 KISS-1檢測 每份標本取0.1g加入總RNA抽提試劑（TRIzol）中充分裂解，分離核酸與核蛋白，按TRIzol RNA提取試劑盒說明書進行后續(xù)步驟，用分光光度計測定所得的總RNA的濃度及純度。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）一步法進行基因檢測，以流式細胞術(shù)檢測KISS-1蛋白表達量。TRIzol和RT-PCR試劑盒均購自上海江萊生物科技有限公司。

1.3 ECM檢測 所有標本均以10%甲醛固定，采用石蠟包埋切片。鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法即SP法（streptavidin perosidase）染色按試劑說明書進行。以磷酸緩沖液（PBS）替代一抗作為陰性對照，以已知陽性切片為陽性對照。層粘連蛋白（LN）及Ⅳ型膠原根據(jù)顯色范圍和腺體周邊完整程度歸為連續(xù)線狀型、間斷線狀型、碎片型和完全缺失型。纖維連接蛋白（FN）則與陰性對照進行對比分析，有陽性產(chǎn)物沉積則為陽性。胃癌細胞、基底膜和間質(zhì)中FN表達分別記為細胞FN、基膜FN及間質(zhì)FN。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織中KISS-1表達水平 KISS-1mRNA在胃癌組織中的陽性率為56.2%，表達水平為（0.57±0.06），其在正常胃黏膜組織中的陽性率為87.1%，表達水平為（0.83±0.02）。顯示KISS-1在胃癌組織中的表達水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達水平，二者比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。同時，KISS-1在不同浸潤深度及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達量亦有顯著性差異（P＜0.05），見表1。

2.2 KISS-1對ECM表達的作用 此外，在不同KISS-1陽性水平下，ECM的主要成分：LN、Ⅳ型膠原及FN的表達情況也表現(xiàn)出明顯差異，KISS-1表達與ECM表達呈現(xiàn)正相關(guān)。不同KISS-1陽性水平下ECM表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 KISS-1在不同病理學特征組中的表達水平比較

表2 不同KISS-1陽性水平下ECM的表達水平比較［n（%）］

3 討 論

腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因KISS-1是Kostadima等［3］在1996年從人黑色素瘤細胞株中率先發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因。KISS-1在正常組織中有廣泛表達，而其表達缺失被認為與乳腺癌、胰腺癌、肝癌、胃癌等惡性腫瘤細胞的局部浸潤和遠處轉(zhuǎn)移等主要生物學行為具有顯著相關(guān)性［4］。

本研究顯示，KISS-1在胃癌組織中的表達水平明顯低于在正常胃黏膜組織中的表達水平，表明KISS-1的表達水平可能與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及癌細胞的生物學行為具有高度相關(guān)性，KISS-1高表達時可抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，低表達時則促使腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移［5］。同時，在不同浸潤深度和是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織中，KISS-1的表達也顯示出明顯差異。KISS-1表達的陽性率越低，胃癌細胞的侵犯越深，且KISS-1在存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，顯示KISS-1也影響了胃癌細胞的淋巴轉(zhuǎn)移［6］。其作用機制可能在于KISS-1基因通過降低細胞質(zhì)內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）的活性，減少其與基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）啟動子的結(jié)合，從而降低癌細胞的浸潤性和機動性［7-8］。

一般認為，腫瘤的實質(zhì)對細胞外基質(zhì)起決定作用，后者又反過來影響腫瘤細胞的形態(tài)、極性及運動，影響其局部浸潤和遠處轉(zhuǎn)移等主要生物學行為［9］。LN、Ⅳ型膠原及FN是ECM的主要成分。研究證實，正常胃組織中，LN及Ⅳ型膠原表現(xiàn)為連續(xù)線型分布，在胃癌組織中則表現(xiàn)為斷裂缺損。此外，在正常胃組織中各種基膜都存在完整的FN分布，而胃癌組織中細胞FN和基膜FN表達呈明顯下降［10-11］。本研究發(fā)現(xiàn)，不同KISS-1陽性水平下，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達水平具有明顯差異，KISS-1的表達水平越高，LN、FN和Ⅳ型膠原的表達水平也相應提高。提示KISS-1可通過對ECM表達的影響間接作用于腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程［12］。

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