RP－HPLC法同時(shí)測(cè)定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量

黃 婧馬健雄

1.廣西壯族自治區(qū)桂林市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西 桂林 541001；2.廣西金海堂藥業(yè)有限責(zé)任公司新藥研發(fā)中心，廣西 南寧 530313

RP－HPLC法同時(shí)測(cè)定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量

黃 婧1馬健雄2*

1.廣西壯族自治區(qū)桂林市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西 桂林 541001；2.廣西金海堂藥業(yè)有限責(zé)任公司新藥研發(fā)中心，廣西 南寧 530313

目的：建立同時(shí)測(cè)定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷含量的方法，為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供依據(jù)。方法：采用RPHPLC法，色譜柱為Diamonsil－ODSC18（250mm×4.6mm，5μ）；流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸溶液；流速為0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm（0～25min）和280nm（25～50min），柱溫：25℃。結(jié)果：綠原酸在0.516～4.128μg范圍內(nèi)、牛蒡苷在1.980～15.840μg范圍內(nèi)線性良好；綠原酸平均加樣回收率為99.02%，RSD為0.83%，牛蒡苷平均加樣回收率為99.56%，RSD為0.69%；結(jié)論：本方法精密度高，分離度好，可用于同時(shí)測(cè)定維C銀翹片中綠原酸和牛蒡苷的含量。

維C銀翹片；綠原酸；牛蒡苷；RP－HPLC

維C銀翹片是由金銀花、連翹、薄荷、荊芥、淡豆豉、牛蒡子、桔梗等14種原料制成的中西藥復(fù)方制劑，具有辛涼解表、清熱解毒之功效，用于治療風(fēng)熱感冒、咳嗽、口干、咽喉疼痛等。方中金銀花和牛蒡子清熱解表是本方的重要組成部分，其綠原酸和牛蒡苷為該制劑藥典［1］含測(cè)指標(biāo)成分，但藥典方法分步測(cè)定，較為繁瑣且實(shí)驗(yàn)成本高，目前尚未有同時(shí)測(cè)定該制劑中綠原酸和牛蒡苷含量的文獻(xiàn)報(bào)道。本文擬用RP－HPLC法對(duì)該制劑中綠原酸和牛蒡苷的含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，為保證藥品質(zhì)量，提高、修訂藥品標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（SHIMADZU，SPD－10A VP Plus）；電子天平（SHIMADZU，AUW120D型）；超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，KQ2200型）

1.2 試劑 乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純；綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：110753－200413，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；牛蒡苷對(duì)照品（批號(hào)：110819－200505，中國(guó)藥品生物制品檢定所）

1.3 試藥 維C銀翹片各批次樣品（廣西金海堂藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)）

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與溶液的制備

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil－ODS C18（250mm ×4.6mm，5μ）；流動(dòng)相為乙腈（A）－0.1%磷酸溶液（B）按表1進(jìn)行梯度洗脫；流速為0.8m l/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm（0～25min）用于檢測(cè)綠原酸；280nm（25～50min）用于檢測(cè)牛蒡苷；柱溫：25℃。

表1 梯度洗脫條件

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取綠原酸、牛蒡苷對(duì)照品適量，置25m l容量瓶中，加甲醇溶解，制成每毫升含綠原酸0.516mg，牛蒡苷1.98mg的對(duì)照品混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理 （功率250W，頻率40kHz）20分鐘，放至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜 （0.45μm）濾過(guò)，即得。

2.1.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取維C銀翹片處方中各味藥材 （除去金銀花和牛蒡子），按藥典［1］方法制備空白樣品，再按“2.1.3”項(xiàng)方法制備陰性樣品溶液。

2.2 波長(zhǎng)的選擇及色譜行為 分別取上述對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性對(duì)照溶液按 “2.1.1”項(xiàng)條件進(jìn)樣，兩種成分有較好的分離度 （圖1、圖2）。但兩種成分最大吸收波長(zhǎng)相差甚遠(yuǎn)，在327nm處綠原酸有最大吸收，牛蒡苷無(wú)吸收，而在280nm處牛蒡苷有最大吸收，故選擇綠原酸檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm，牛蒡苷檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。

2.3 線性關(guān)系考察 分別精密稱取“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液1.0m l、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml，置10m l容量瓶中，加甲醇稀釋定容。分別進(jìn)樣 （各進(jìn)3針，每針10μl），以平均峰面積積分值為縱坐標(biāo) （y），以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo) （x），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝2789.19x－10.0923，r＝0.9999；牛蒡苷標(biāo)準(zhǔn)曲線：y＝503.06x＋5.3217，r＝0.9998。線性范圍：綠原酸為0.516～4.128μg；牛蒡苷為1.980～15.840μg。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述“2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，重復(fù)測(cè)定5次，每次進(jìn)樣量為10μl，記錄綠原酸、牛蒡苷的峰面積，RSD（綠原酸）＝1.27%，RSD（牛蒡苷）＝0.77%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批號(hào)（20120901）樣品6份，按“2.1.3”項(xiàng)方法制備供試品，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，重復(fù)測(cè)定6次，每次進(jìn)樣量為10μl，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，RSD（綠原酸）＝0.95%，RSD（牛蒡苷）＝1.15%，說(shuō)明該方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品（20120901）溶液，分別于0、2、4、6、8、10h各進(jìn)樣10μl，記錄峰面積，RSD（綠原酸）＝1.56%，RSD（牛蒡苷）＝1.05%，表明該樣品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)已知含量的樣品細(xì)粉（批號(hào)：20120901，綠原酸的含量2.45 mg/片，牛蒡苷含量3.62mg/片）6份，每份約0.1g，精密稱定。分別加入綠原酸和牛蒡苷對(duì)照品適量，按照供試品溶液制備方法，制備供試品溶液并測(cè)定綠原酸和牛蒡苷的含量。綠原酸平均回收率為99.02%，牛蒡苷平均回收率為99.56%，RSD（綠原酸）＝0.83%，RSD（牛蒡苷）＝0.69%，表明該法回收率良好。

2.8 樣品測(cè)定 取維C銀翹片各批次樣品，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 維C銀翹片含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

維C銀翹片藥味較多，制定科學(xué)合理且具實(shí)用性的質(zhì)量控制方法較為困難?，F(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)［1］操作繁瑣，實(shí)驗(yàn)成本較高，故還存在較大的提升空間。用現(xiàn)代科學(xué)儀器同時(shí)測(cè)定各指標(biāo)成分的含量可節(jié)約時(shí)間和檢測(cè)成本，縮短企業(yè)生產(chǎn)周期，提高生產(chǎn)效率，有較大的推廣空間。本研究將為維C銀翹片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步完善提供科學(xué)依據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（2010版一部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1139.

Simultaneous Determination of Chlorogenic acid and Arctiin in VitaminC Yinqiao Tablet by RP－HPLC

HUANG Jing1，MA Jian－xiong2
1.The Second People＇s Hospital of Guilin，Guilin，541001；2.New Drug R＆d Center of Guangxi Jinhaitang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Nanning，530313

Objective：To establish the method for determining the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet；Methods：Diamonsil－ODSC18（5μ250×4.6mm）columu was adopted，the mobile phase consisted of acetonitrile－0.1%phosphoric acid solution eluted at the flow rate of0.8ml/min，the detection wave length were 327nm（0～25min）and 280nm（25～50min）；the column temperature was 25℃；Results：The chlorogenic acid in 0.516～4.128μg and arctiin in 1.980～15.840μg had good linearity.The average recoveries of chlorogenic acid and arctiin were 99.02%（RSD 0.83%）and 99.56%（RSD 0.69%），respectively；Conclusion：This method can be use to determine the contents of chlorogenic acid and arctiin in VitaminC Yinqiao tablet.

VitaminC Yinqiao tablet；chlorogenic acid；arctiin；RP－HPLC

R286.0

A

1007－8517（2013）14－0017－02

2013.05.21）

黃婧 （1977－），女，主管藥師，從事藥品質(zhì)量研究。

馬健雄，E－mail：majianxiong66＠163.com