羽毛肽粉對(duì)日本鰻鱺飼料氨基酸平衡的影響

（1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室，福建福州 350003；2.福建省精密儀器農(nóng)業(yè)測(cè)試重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建福州 350003；3.福建正源飼料有限公司，福建莆田 351111）

鰻鱺是一種深受國內(nèi)外消費(fèi)者歡迎的高檔水產(chǎn)品，營養(yǎng)價(jià)值非常高，被稱作水中的軟黃金。從20世紀(jì)80年代中后期開始，鰻魚養(yǎng)殖在我國大規(guī)模開展，并形成了一條從苗種捕撈、飼料加工、鰻鱺養(yǎng)殖、加工出口的完整產(chǎn)業(yè)鏈，養(yǎng)殖種類涉及日本鰻鱺（Anguilla japonica）、歐洲鰻鱺（Anguilla an?guilla）、美洲鰻鱺(Anguilla rostrata)等。鰻鱺是一種高蛋白需求的水產(chǎn)動(dòng)物，飼料中魚粉含量較高。近年來，水產(chǎn)養(yǎng)殖工廠化、集約化的快速發(fā)展，優(yōu)質(zhì)飼料蛋白源魚粉的需求量連年攀升，價(jià)格不斷高漲，供不應(yīng)求[1]。

國內(nèi)外大量學(xué)者通過體外降解技術(shù)，已可制備肽含量豐富的飼用羽毛肽粉，已在消化、吸收上增強(qiáng)了羽毛粉產(chǎn)品在飼料領(lǐng)域的應(yīng)用潛力[2-9]。氨基酸營養(yǎng)平衡對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的消化、生長均具有決定性影響[10]。飼料限制性氨基酸的種類、順序因魚種及飼料配方差異而不同，如谷物類的主要限制性氨基酸為 Lys、Met，豆粕為 Met、Phe[10]。肌肉組織是動(dòng)物最大的氨基酸代謝場(chǎng)所，以動(dòng)物組織（肌肉或胴體）的氨基酸組成作為參比蛋白是評(píng)價(jià)飼料氨基酸平衡的最佳選擇之一[1,7]。本研究根據(jù)日本鰻鱺營養(yǎng)需求，配制了含不同量羽毛肽粉鰻鱺飼料，以日本鰻鱺肌肉氨基酸組成為參考模式，從氨基酸平衡角度分析羽毛肽粉在鰻鱺飼料中的應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料和儀器

1.1.1 材料

飼用羽毛肽粉，自制[11]；日本鰻鱺，購自長樂鰻鱺養(yǎng)殖場(chǎng)；魚粉、淀粉等其它飼料原料，由福建正源飼料有限公司提供。

1.1.2 試劑

濃鹽酸，優(yōu)級(jí)純；混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品（sigmaaldrich）；緩沖液、茚三酮溶液(GB/T 5009.124.2003)。

1.1.3 儀器

電子分析天平（METTLER TOLEDO AL204）、全自動(dòng)氨基酸分析儀（日立L8800）、恒溫干燥箱、水解管（用去離子水沖洗干凈，烘干備用）。

1.2 方法

1.2.1 飼料生產(chǎn)

根據(jù)SC/T 1004—2010鰻鱺配合飼料，設(shè)計(jì)4種符合標(biāo)準(zhǔn)的等氮飼料，配方見表1。由福建正源飼料公司生產(chǎn)，微量成分添加采取逐級(jí)擴(kuò)大法，經(jīng)過混合-粉碎-混合，飼料為粉末狀，100%過80目篩，80%過100目篩。

表1 飼料配方（%）

1.2.2 氨基酸組成測(cè)定[12]

取日本鰻鱺各部位肌肉，混勻，烘干，粉碎，稱取適量鰻鱺肌肉樣品及4組飼料，置于水解管中。加入6 mol/l鹽酸10 ml，抽真空，充入高純氮?dú)?，再抽真空充氮?dú)?，重?fù)3次，封口，110℃左右水解22 h，冷卻。打開水解管，過濾，用去離子水多次沖洗水解管，將水解液全部轉(zhuǎn)移到50 ml容量瓶內(nèi)，用去離子水定容。取濾液1 ml于5 ml容量瓶內(nèi)，用真空干燥器在40～50℃條件下干燥，殘留物用1～2 ml蒸餾水溶解，再干燥，反復(fù)兩次，蒸干，溶解于1 ml pH值2.2的緩沖液。用氨基酸自動(dòng)分析儀以外標(biāo)法測(cè)定試樣液的氨基酸含量。每個(gè)樣品均做3組平行。

1.2.3 飼料氨基酸營養(yǎng)評(píng)價(jià)

以日本鰻鱺肌肉氨基酸組成為參考模式利用國際通用的氨基酸比值系數(shù)法，對(duì)4個(gè)組的飼料作為日本鰻鱺飼料的氨基酸平衡性進(jìn)行評(píng)價(jià)。具體指標(biāo)包括氨基酸總量、必需氨基酸組成模式、氨基酸比值系數(shù)(RC)、氨基酸比值系數(shù)分（SRC）。

RC=氨基酸比值/氨基酸比值之均數(shù)；

SRC=100-CV×100。

式中：Ax——樣品中氨基酸含量；

As——參比蛋白中氨基酸含量；

CV——RC的變異系數(shù)，CV=標(biāo)準(zhǔn)差/均數(shù)。

如果飼料氨基酸組成與日本鰻鱺肌肉氨基酸組成完全一致，則各氨基酸的RC均應(yīng)等于1。RC＞1，表示此組飼料氨基酸在日本鰻鱺肌肉氨基酸組成模式中過剩，反之則表示此類氨基酸相對(duì)不足。RC最小的氨基酸為第一限制氨基酸，以此類推。

SRC的意義為：當(dāng)飼料氨基酸組成與日本鰻鱺肌肉氨基酸組成一致，則CV=0，SRC=100。SRC越小，蛋白源營養(yǎng)價(jià)值越差，SRC越接近100，其營養(yǎng)價(jià)值相對(duì)較高。

2 結(jié)果

2.1 4組飼料氨基酸組成

4組飼料氨基酸種類齊全，如表2所示。氨基酸總量分別達(dá)到42.41%、41.39%、39.32%、42.69%。均具有水產(chǎn)動(dòng)物所需的各種必需或半必需氨基酸[10，12]，但4#料 Lys含量(1.94%)略低于SC/T1004—2010要求(2.1%)。其中必需氨基酸含量為20.51%、20.02%、18.15%、18.81%，占氨基酸總量的48.36%、48.37%、46.16%、44.06%，與非必需氨基酸的比值為93.65%、93.68%、85.73%、78.77%；呈味氨基酸含量為20.28%、19.80%、19.62%、21.98%，占氨基酸總量的47.82%、47.84%、49.90%、51.49%。鮮味氨基酸Asp和Glu的含量為10.21%、9.67%、8.88%、8.99%；甘味氨基酸Gly和Ala的含量為5.73%、5.57%、5.71%、6.36%；與甘味有關(guān)的Ser和Pro的含量為4.34%、4.56%、5.03%、6.63%?？梢姡S著羽毛肽粉添加量的增加，與風(fēng)味相關(guān)的氨基酸含量呈增加趨勢(shì)，飼料的風(fēng)味明顯增強(qiáng)。

表2 日本鰻鱺和4組飼料氨基酸組成（%）

2.2 氨基酸比值系數(shù)法評(píng)價(jià)飼料蛋白源營養(yǎng)價(jià)值

氨基酸的比值系數(shù)如表3所示，其中Ile、Leu、Thr、Val、Phe+Tyr、Arg的相對(duì)含量基本達(dá)到或超過日本鰻鱺的生長及生理需要。參照SC/T1004—2010鰻鱺配合飼料，除4#組料的Lys含量略低外，其它組并無氨基酸問題。但從比值系數(shù)可以看出，4組飼料中氨基酸相對(duì)含量無法滿足日本鰻鱺生長及生理需要的有Lys、His、Met+Cys。其中Lys、His在全魚粉組中已出現(xiàn)不足現(xiàn)象，在添加飼用羽毛肽粉后，短缺繼續(xù)增大。但是Met+Cys的平衡性在添加適量飼用羽毛肽粉后得到明顯改善。但當(dāng)飼用羽毛肽粉添加量超過10%后，Met+Cys的RC值降低了，結(jié)合表1分析認(rèn)為是由于飼用羽毛肽粉中Met含量減少引起的。飼用羽毛肽粉添加對(duì)飼料氨基酸組成中Lys、Met+Cys、His影響較大，RC變化幅度分別達(dá)到0.43、0.35、0.22。其它變化并不大，氨基酸組成也僅略有差異。

表3 4組飼料氨基酸比值系數(shù)

2.3 羽毛相關(guān)產(chǎn)品作為飼料蛋白源的限制性氨基酸

飼用羽毛肽粉添加量對(duì)日本鰻鱺飼料中限制性氨基酸的排序及綜合平衡結(jié)果（氨基酸比值系數(shù)分SRC）如表4所示。SRC值隨著飼用羽毛肽粉添加量增加而降低。根據(jù)表1設(shè)計(jì)的日本鰻鱺飼料第一限制性氨基酸均為His?？梢姡匀毡决狑~肌肉氨基酸組成模式作為參考，飼用羽毛肽粉作為日本鰻鱺飼料蛋白源還存在一定不足，但實(shí)際應(yīng)用結(jié)果還有待養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。

1#魚粉組與2#、3#、4#組相比，魚粉的氨基酸組成模式更接近日本鰻鱺要求。但飼用羽毛肽粉配制的飼料在Met+Cys上更具優(yōu)勢(shì)。此外，飼用羽毛肽粉高風(fēng)味、鮮味氨基酸含量使其在鰻鱺飼料上還是具有一定的應(yīng)用潛力。

表4 4組飼料限制性氨基酸排序

3 討論

水產(chǎn)飼料優(yōu)劣不僅取決于氨基酸平衡及消化吸收率，在一定程度上也取決于適口性——呈鮮味的天冬氨酸和谷氨酸、呈甘味的甘氨酸和丙氨酸以及與甘味有關(guān)的脯氨酸和絲氨酸的含量[13-14]。氨基酸已被公認(rèn)是魚類、甲殼類等水產(chǎn)動(dòng)物的誘食劑，可以起到良好誘食作用。研究表明[15-17]，龍蝦的嗅覺神經(jīng)元數(shù)目對(duì)半胱氨酸、谷氨酸等物質(zhì)能產(chǎn)生不同的反應(yīng)。Gly對(duì)真鯛、紅鰭東方鲀有良好的誘食效果。但不同的氨基酸種類對(duì)不同的水產(chǎn)動(dòng)物誘食效果也不盡相同，如0.05 mol/l的Gly對(duì)鯉魚有強(qiáng)烈的誘食作用，但對(duì)鯽魚卻有排斥作用。Val對(duì)肉食性魚類誘食效果較好。同時(shí)，羽毛肽粉中部分氨基酸短缺的現(xiàn)象可以通過選取與相應(yīng)氨基酸含量較高的互補(bǔ)的蛋白源進(jìn)行搭配，如富含Lys的蠶豆粉漿蛋白粉、血粉等、富含Thr、Trp的血粉等、富含His的豆粕、玉米粉等[18]，或直接添加相應(yīng)的限制性氨基酸[14]。

因此，飼用羽毛肽粉添加后雖對(duì)日本鰻鱺飼料氨基酸均衡性有所影響，通過與適當(dāng)?shù)牡鞍自舷嗯浜虾?，其富含的風(fēng)味氨基酸有望提高飼料的風(fēng)味，刺激鰻鱺攝食，增加攝食量，改善植物蛋白的適口性。具體的養(yǎng)殖效果及配方設(shè)計(jì)有待后續(xù)進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

①全魚粉日本鰻鱺飼料影響氨基酸平衡的主要氨基酸是：His、Met+Cys、Lys。飼用羽毛粉添加可以適當(dāng)改善Met+Cys的平衡性。

②由于富含風(fēng)味氨基酸，飼用羽毛肽粉在日本鰻鱺飼料中有一定的應(yīng)用前景，尤其是通過添加與其氨基酸組成互補(bǔ)的蛋白源，如富含Lys的蠶豆粉漿蛋白粉、富含His的豆粕、玉米粉等。