中醫(yī)藥逆轉(zhuǎn)肺癌耐藥的研究進(jìn)展

趙秀芳，于 航綜述，侯毅鞠審校 (吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院:.2008級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)本科班，2.血檢教研室，吉林 吉林 3203)

肺癌是嚴(yán)重影響人類生存的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，目前肺癌的死亡率已經(jīng)居全球惡性腫瘤之首［1］?，F(xiàn)階段肺癌的治療主要依靠藥物和手術(shù)治療兩方面，其中化療較為常見(jiàn)。但多藥耐藥(MDR)嚴(yán)重影響著化療的效果［2］，肺癌細(xì)胞的MDR的產(chǎn)生，主要由細(xì)胞的膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和相關(guān)靶酶異常，以及凋亡途徑改變等引起。許多學(xué)者通過(guò)中藥單味成分、中藥復(fù)方和中西聯(lián)合治療對(duì)肺癌耐藥性進(jìn)行逆轉(zhuǎn)?，F(xiàn)就其相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究作綜述如下。

1 單味中藥成分

漢防己甲素是由中藥漢防己中提取的生物堿，其主治功能有消炎、解熱、鎮(zhèn)痛、肌肉松弛、擴(kuò)張血管等。臨床研究其對(duì)多種腫瘤有抑制作用，徐萌［3］等人通過(guò)四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法、流式細(xì)胞術(shù)和碘化丙啶染色研究了漢防己甲素對(duì)肺癌耐阿霉素細(xì)胞株的作用，結(jié)果MTT顯示漢防己甲素作用后耐藥細(xì)胞的耐藥指數(shù)由5.43降至1.89。通過(guò)比較藥物作用前后耐藥細(xì)胞MRP蛋白表達(dá)，耐藥細(xì)胞MRP蛋白表達(dá)率(%)為60.25 ±8.71，經(jīng)漢防己甲素作用后的細(xì)胞MRP蛋白表達(dá)降至32.21±4.79。染色發(fā)現(xiàn)經(jīng)漢防己甲素作用后的耐藥細(xì)胞的凋亡(%)由13.37±2.65升至76.08 ±12.26，細(xì)胞凋亡明顯增加，達(dá)到了逆轉(zhuǎn)耐藥的效果。

農(nóng)麗等人［4］通過(guò)從吳茱萸中提取的主要生物堿——吳茱萸堿(EV)作用于順鉑(DDP)耐藥細(xì)胞株，吳茱萸堿具有細(xì)胞損傷、抗菌、鎮(zhèn)痛、抗侵染、抗病理轉(zhuǎn)移的作用。利用MTT檢測(cè)計(jì)算逆轉(zhuǎn)倍數(shù)，EV濃度0.125 mg/L、0.25 mg/L 對(duì)經(jīng) DDP 誘導(dǎo)耐藥的A549細(xì)胞(A549/DDP)逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為3.67和11.48。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡(%)，由18.90±4.69 增加至 22.70 ±0.50。而反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)各組 MDR1、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)等mRNA的表達(dá)，電泳后條帶分析MDR1、Bcl-2等均有下調(diào)。綜合數(shù)據(jù)表明吳茱萸堿對(duì)肺癌耐藥細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用顯著，且呈劑量依賴性。

薏苡仁(康萊特)［5］在臨床腫瘤治療中應(yīng)用廣泛，具有益氣養(yǎng)陰，消癖散結(jié)之功效。學(xué)者通過(guò)不同劑量的薏苡仁注射液對(duì)A549/DDP細(xì)胞的抑制作用作了研究［6］，以磺酰羅丹明(SRB)染色反應(yīng)藥物作用后對(duì)細(xì)胞的抑制率，隨著藥物濃度增加，測(cè)得其吸光度(OD)值明顯降低，以O(shè)D值代表抑制程度，其抑制明顯增加，計(jì)算數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。利用RT-PCR檢測(cè)MDR1、Bcl-2、生存素(Survivin)等 mRNA的表達(dá)，蛋白質(zhì)印記(Western blot)測(cè)定P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2、Survivin蛋白表達(dá)量，電泳條帶分析后表達(dá)量均有所降低。

2 復(fù)方中藥

我國(guó)古代就有“溫以散寒，下以除滯”之理，溫下方(附子、大黃、人參、當(dāng)歸)［7］具有使寒邪祛、陽(yáng)氣復(fù)的功效。季旭明［8］等人將溫下方灌胃大鼠得到含藥血清，以不同藥物濃度的血清孵育通過(guò)誘導(dǎo)得到的A549/DDP細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)耐藥細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π)和 DDP 的含量反應(yīng)溫下方對(duì)耐藥細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)GST-π的活性，結(jié)果藥物劑量組的熒光強(qiáng)度明顯弱于對(duì)照組，即經(jīng)溫下方作用后的耐藥細(xì)胞內(nèi)GST-π的酶活性降低，抑制了細(xì)胞的耐藥性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞順鉑含量，藥物劑量組的熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，說(shuō)明細(xì)胞內(nèi)順鉑藥物含量增加明顯，達(dá)到了逆轉(zhuǎn)耐藥的目的。

消巖湯(人參 30 g、白術(shù) 60 g、黃耆 30 g、當(dāng)歸30 g、忍冬藤30 g、茜草根 6 g、白芥子 6 g、茯苓 9 g)具有“解毒祛瘀，扶正抗癌”的功效，張瑩［9］等人利用MTT法分別檢測(cè)了不同劑量的消巖湯對(duì)敏感的A549細(xì)胞和A549/DDP細(xì)胞的殺傷作用，高、低劑量組的耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.78和1.57，計(jì)算有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，起到了逆轉(zhuǎn)耐藥的作用。

益氣養(yǎng)肺方是由太子參、玉竹、北沙參、北芪、麥冬、五指毛桃、田七、白花蛇舌草、防己、生甘草組成［10］，以其滋陰養(yǎng)肺、祛痰化濕為主要功效而應(yīng)用廣泛。學(xué)者將其作用于具有MRP表型的A549耐藥細(xì)胞［11］，通過(guò)MTT、流式細(xì)胞術(shù)、共聚焦顯微鏡和酶標(biāo)法檢測(cè)其對(duì)耐藥細(xì)胞的作用，MTT結(jié)果細(xì)胞抑制率(%)有4.23 ±0.72 升至 18.62 ±2.95，細(xì)胞毒作用明顯增強(qiáng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MRP表達(dá)量(%)由73.2 ±9.4 下降至 27.6 ±4.8，耐藥蛋白表達(dá)量顯著降低。此外還通過(guò)檢測(cè)線粒體膜電位和Ca2+水平以及Caspase-3、Caspase-8活性，探討了其逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制，可能與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。

3 中西藥聯(lián)合應(yīng)用

貓人參［12］又名貓氣藤、沙梨藤，屬于一種中草藥，原屬于獼猴桃科獼猴桃屬，植物鑷合獼猴桃的根，其臨床功效為清熱解毒。國(guó)內(nèi)外學(xué)者曾用其研究對(duì)不同腫瘤的抑制作用，有一定的效果。洪禹霖等［13］將貓人參灌胃大鼠獲得不同藥物濃度的大鼠血清，聯(lián)合DDP作用于A549/DDP，通過(guò)MTT法對(duì)比檢測(cè)單獨(dú)使用DDP、單獨(dú)使用貓人參和貓人參聯(lián)合DDP分別對(duì)A549和A549/DDP細(xì)胞的抑制作用，結(jié)果單獨(dú)使用DDP和貓人參對(duì)A549的殺傷作用很弱，而不同濃度貓人參大、中、小劑量聯(lián)合DDP后使細(xì)胞殺傷作用分別提高 1.33、1.17、1.05 倍，具有顯著的逆轉(zhuǎn)耐藥作用，且實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示呈現(xiàn)劑量依賴性。

林勝友［14］等人以中藥制劑參麥注射液(主要為紅參和麥冬)與三苯氧胺及硝苯吡啶聯(lián)合應(yīng)用于70例MDR1表達(dá)陽(yáng)性的非小細(xì)胞肺癌患者，以WHO的評(píng)價(jià)作為標(biāo)準(zhǔn)，觀察療效為總有效率46.9%，高于對(duì)照組(23.7%)，且差異顯著，其中完全緩解者2例，部分緩解者13例，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 展望

肺癌是全球高發(fā)的惡性腫瘤之一，雖有很多化療藥物應(yīng)用于臨床，但其耐藥性一直困擾著臨床醫(yī)生與患者。中國(guó)古代醫(yī)學(xué)認(rèn)為肺癌是正傷肺虛，邪毒內(nèi)蘊(yùn)。近年來(lái)中醫(yī)藥治療肺癌的耐藥性已有很大的療效，很多學(xué)者研究表明［15］，多種中藥單體成分和復(fù)方有抗癌的作用，而中藥成分與臨床常用化療藥物(如DDP、阿霉素)聯(lián)合應(yīng)用逆轉(zhuǎn)肺癌的耐藥性，已經(jīng)在科研項(xiàng)目中日漸增多，其逆轉(zhuǎn)耐藥的機(jī)制也在不斷的研究中［16］。更多中藥聯(lián)合化療藥物應(yīng)用于臨床的研究，將成為日后研究的重點(diǎn)。

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［4］農(nóng) 麗，伍 鋼，戴曉芳，等.吳茱萸堿逆轉(zhuǎn)人肺癌細(xì)胞株A549/DDP耐藥機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究［J］.臨床腫瘤學(xué)雜志，2010，15(6):487-492.

［5］劉翠霞，周 坤，王亞珍，等.康萊特對(duì)人肺腺癌細(xì)胞A549增殖活性影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22(6):1437-1438.

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［8］季旭明，江 濤，歐陽(yáng)兵，等.溫下方含藥血清對(duì)肺腺癌耐藥細(xì)胞內(nèi)GSH、GST-π的影響［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34(1):67-69.

［9］張 瑩，賈英杰，楊 潔，等.消巖湯藥物血清對(duì)A549/DDP多藥耐藥逆轉(zhuǎn)作用的研究［J］.天津中醫(yī)藥，2010，27(4):334-336.

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［13］洪禹霖，魏 莉，熊一向.貓人參對(duì)人肺腺癌耐藥細(xì)胞株A549/DDP逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2010，10(6):87-88.

［14］林勝友，徐穎扉，吳良村，等.中西藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)MDR-1表達(dá)陽(yáng)性的非小細(xì)胞肺癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)的意義［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，22(9):712-713.

［15］李雪梅，榮 震.中藥逆轉(zhuǎn)肺癌治療中的耐藥性實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，14(3):80-81.

［16］郭建輝.中醫(yī)藥治療肺癌現(xiàn)狀分析［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，27(3):283-285.