藥品雜質(zhì)檢查研究進(jìn)展*

王麗琴，趙　喆，王慧琛

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津　300070)

藥品是用于預(yù)防、治療、診斷疾病的特殊商品。藥品質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)乎公眾的健康和安全。藥品不良反應(yīng)的發(fā)生有時(shí)與藥品中所含有雜質(zhì)相關(guān)，加強(qiáng)藥品雜質(zhì)控制是保證藥品質(zhì)量和用藥安全有效的重要體現(xiàn)[1]。隨著公眾和媒體對藥品安全性的日益關(guān)注，藥品中的雜質(zhì)已成為藥品質(zhì)量控制中的重要指標(biāo)[2]。人類對藥品純度的認(rèn)識(shí)是在防治疾病的實(shí)踐中積累起來的，并隨著分離、檢測技術(shù)的提高而進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)藥品中存在的新雜質(zhì)，從而不斷提高對藥品純度的要求。目前《中國藥典》(ChP)、《歐洲藥典》(EP)、《英國藥典》(BP)、《美國藥典》(USP)均對雜質(zhì)加以控制。2005年，國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》之后，不僅在新藥審評過程中，而且在國家藥典會(huì)組織的歷次藥品標(biāo)準(zhǔn)提高行動(dòng)計(jì)劃中，以及全國評價(jià)性抽驗(yàn)工作中，對藥品雜質(zhì)評價(jià)予以高度重視，極大地促進(jìn)了藥品質(zhì)量的提高。

1　藥品雜質(zhì)及來源

1.1藥品雜質(zhì)藥品雜質(zhì)是指藥品中所含有的沒有治療作用、可能影響藥品的穩(wěn)定性和療效，甚至是對人體健康有害的物質(zhì)，包括有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)及殘留溶劑[3]，來源于工藝雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、從反應(yīng)物及試劑中混入的雜質(zhì)等。以往的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中一般僅在原料藥中對藥品的雜質(zhì)加以控制。近年來，隨著分析技術(shù)的發(fā)展，如TLC、HPLC、GC、質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用，發(fā)現(xiàn)制成的制劑也同樣存在特殊雜質(zhì)。因此，對制劑也增加了雜質(zhì)檢查項(xiàng)目。僅《中國藥典》2005年版收載的制劑中，制定有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)的已達(dá)175個(gè)。隨著對藥品安全性重視程度的不斷提高，《中國藥典》2010年版又有565個(gè)品種增加了液相色譜法測定有關(guān)物質(zhì)，97個(gè)品種增加了殘留溶劑檢查。

1.2藥品雜質(zhì)來源藥品的純度是反應(yīng)藥品質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)。藥品的雜質(zhì)檢查分為一般雜質(zhì)檢查和特殊雜質(zhì)檢查。一般雜質(zhì)在自然界中分布廣，生產(chǎn)和貯存過程中易引入多種藥品中，如酸性或堿性物質(zhì)、氯化物、硫酸鹽、重金屬、砷鹽等無機(jī)雜質(zhì)。另外，生產(chǎn)過程中常使用鹽酸、硫酸等，若洗滌精制不到位，在成品中常引入一般雜質(zhì)。特殊雜質(zhì)是某種藥品生產(chǎn)或貯存過程中易引入的獨(dú)有的雜質(zhì)，多指有機(jī)雜質(zhì)，也包括殘留溶劑和手性化合物中無特殊毒性的對映體[4]。如咖啡因中的其他生物堿、甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑，貯存過程中發(fā)生水解反應(yīng)的普魯卡因中的對氨基苯甲酸水解產(chǎn)物，解熱鎮(zhèn)痛藥阿司匹林中的水楊酸等。鹽酸哌替啶早在1948年已被收入《英國藥典》并被廣泛應(yīng)用，直至1970年經(jīng)氣相色譜分離檢定，才發(fā)現(xiàn)其中還混有兩種無效的異構(gòu)體(Ⅱ)和(Ⅲ)，這些雜質(zhì)是由于生產(chǎn)工藝條件控制不當(dāng)而產(chǎn)生的，其雜質(zhì)含量有時(shí)高達(dá)20%～30%。

2　雜質(zhì)檢查方法

2.1無機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)的產(chǎn)生與生產(chǎn)工藝有關(guān)，直接影響藥品的穩(wěn)定性，而對于無機(jī)雜質(zhì)，各國藥典都收載了經(jīng)典、簡便而又行之有效的檢測方法，可根據(jù)實(shí)際情況，采用藥典收載的方法進(jìn)行質(zhì)量考察及控制。通常一般雜質(zhì)如氯化物、硫酸鹽等，藥典中采用與對照液比濁的方法進(jìn)行限度檢查。鉛作為重金屬的代表，以鉛的限量表示重金屬限度。如需對某種(些)特定金屬離子或上述方法不能檢測到的金屬離子作限度要求，可采用專屬性較強(qiáng)的原子吸收分光光度法或具有一定專屬性的經(jīng)典比色法。檢測砷需采用砷鹽檢查法進(jìn)行專項(xiàng)考察和控制，各國藥典收載的方法已歷經(jīng)多年驗(yàn)證，行之有效，可加以引用。對于藥典尚未收載的無機(jī)雜質(zhì)(如磷酸鹽、亞磷酸鹽、鋁離子、鉻離子等)的檢測，可根據(jù)其理化特性，采用具有一定專屬性、靈敏度的方法，如離子色譜法、原子吸收分光光度法、比色法等。

2.2有機(jī)雜質(zhì)及殘留溶劑 有關(guān)物質(zhì)是指在藥物制備好貯存過程中,根據(jù)藥物性質(zhì)和合成方法可能產(chǎn)生的雜質(zhì)[5]。 有機(jī)雜質(zhì)檢查主要包括化學(xué)法、光譜法、色譜法等，依據(jù)藥品結(jié)構(gòu)及降解產(chǎn)物的不同采用不同的檢測方法。目前普遍采用的雜質(zhì)檢測方法主要為薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法，此外，毛細(xì)管電泳(CE)、超臨界流體色譜(SFC)以及聯(lián)用技術(shù)等[6,7]，近年來發(fā)展很快，在測定特殊雜質(zhì)中的應(yīng)用正逐年增加。在上述方法中，TLC法設(shè)備簡單，操作簡便，快速，優(yōu)勢在于藥品的定性鑒別；HPLC或GC法由于分離分析的定量優(yōu)勢，成為新藥研發(fā)不可缺少的手段。

2.3方法的建立與驗(yàn)證藥品中雜質(zhì)的研究主要基于國際人用藥品注冊和醫(yī)藥技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)議工作程序介紹(ICH)分別于2002年2月及2003年2月頒布的《新原料藥的雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則》與《新制劑的雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則》，及國家藥監(jiān)局于2005年頒布的《化學(xué)藥品雜質(zhì)研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，在藥品研究、生產(chǎn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草和修訂時(shí)參考。雜質(zhì)研究的總體思路就是要結(jié)合藥品具體的工藝以及產(chǎn)品的特點(diǎn)開展研究。首先，要結(jié)合具體工藝及產(chǎn)品特點(diǎn)來分析產(chǎn)品中可能產(chǎn)生什么樣的雜質(zhì)，通過雜質(zhì)譜的分析對產(chǎn)品中雜質(zhì)的來源及結(jié)構(gòu)情況有較為全面的了解；然后，在雜質(zhì)譜分析的基礎(chǔ)上，有針對性地選擇合適的分析方法，以確保雜質(zhì)的有效檢出及控制；最后，需綜合藥學(xué)、藥理毒理及臨床研究結(jié)果確定合理的雜質(zhì)限度，從而保證藥品的質(zhì)量及安全性。雜質(zhì)檢測方法的建立與驗(yàn)證主要包括專屬性試驗(yàn)、檢測限試驗(yàn)、溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)，耐用性試驗(yàn)等內(nèi)容，如為定量檢測雜質(zhì)，還需進(jìn)行包括線性、回收率、精密度等試驗(yàn)，從不同的角度、層面驗(yàn)證分析方法的可行性，從而保證藥品中的雜質(zhì)能夠有效地檢測。另外，雜質(zhì)檢查分析方法的建立，還應(yīng)考慮普遍適用性，所用的儀器和試材應(yīng)容易獲得，確保質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的可行性。

2.4雜質(zhì)分析方法的應(yīng)用劉偉強(qiáng)[8]建立了高效液相色譜法測定克林霉素磷酸酯注射液有關(guān)物質(zhì)的方法。采用HPLC對克林霉素磷酸酯注射液有關(guān)物質(zhì)的測定進(jìn)行方法學(xué)研究。

田貴容[9]等采用SephadexG10凝膠柱，建立了測定磺芐西林鈉中高分子雜質(zhì)的方法，測得磺芐西林鈉中高分子雜質(zhì)含量小于0.12%。

金薇[10]建立重酒石酸去甲腎上腺素有關(guān)物質(zhì)的高效液相色譜-電化學(xué)檢測方法(HPLC-ECD)，結(jié)果去甲腎上腺素、腎上腺素、去甲腎上腺酮、多巴胺和 2-氯-1-(3，4-二羥基苯基) 乙酮檢測限分別為0.07、0.07、0.08、0.1和 0.2 ng ,4 種有關(guān)物質(zhì)的平均加樣回收率為 97.2%、100.4%、98.2%和103.1%；RSD 為 1.6%、1.5%、1、3%和2.8% (n=6)。

王穎[11]建立了離子對反相液相色譜(IP-RPLC) 分析流感泰得有關(guān)物質(zhì)的方法，并將其與離子交換色譜(IEC) 和毛細(xì)管凝膠電泳(CGE) 法的分析結(jié)果進(jìn)行比較。

魏寧漪[12]建立了檢測大蒜素原料藥有關(guān)物質(zhì)的氣質(zhì)聯(lián)用方法，并對大蒜素的穩(wěn)定性進(jìn)行研究，確定了大蒜素原料中的主要雜質(zhì)為一硫二丙烯、二硫二丙烯和四硫二丙烯，2批樣品總雜質(zhì)分別為 7.20% 和10.11%，可用于大蒜素中有關(guān)物質(zhì)的定性定量檢測和穩(wěn)定性研究。

劉振[13]采用HPLC-ELSD法，建立了1-脫氧野尻霉素、葡萄糖和葡萄糖胺的雜質(zhì)的分析方法，1-脫氧野尻霉素、葡萄糖和葡萄糖胺的最低檢測濃度分別為0.0045、 0.0040和0.0039 mg/ml，RSD均小于10%。

劉長海[14]采用毛細(xì)管電泳法檢查左旋麻黃堿中對映異構(gòu)體雜質(zhì)，麻黃堿及偽麻黃堿對映體得到良好分離,并滿足進(jìn)行左旋麻黃堿中對映異構(gòu)體雜質(zhì)檢查所需要的條件。

張璐等[15]采用HPLC和LC-MSn分析葛根素及其注射劑中的有關(guān)物質(zhì)，可有效分離主成分葛根素與有關(guān)物質(zhì),對有關(guān)物質(zhì)能進(jìn)行初步鑒定。該研究采用HPLC對葛根素原料藥和葛根素注射劑中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行了系統(tǒng)考察,采用LC-MSn技術(shù)對葛根素及其注射劑中有關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步鑒定。結(jié)果葛根素及其注射劑中存在5種主要有關(guān)物質(zhì),其中2種為相對分子質(zhì)量432的同分異構(gòu)體,推測可能為3＇-羥基葛根素和染料木素-8-C-葡萄糖苷。

原歡歡[16]采用 RP-HPLC法同時(shí)測定梓葛凍干粉針中梓醇和葛根素含量并考察其有關(guān)物質(zhì)，梓醇和葛根素回收率分別為 100.45% 和 98.17%， RSD 均小于 2%，為梓葛凍干粉針質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考。

藥品中的雜質(zhì)是影響藥品質(zhì)量的重要因素，應(yīng)盡可能確定藥品中雜質(zhì)的來源、性質(zhì)、檢測方法及其限量，同時(shí)不斷改進(jìn)藥品的生產(chǎn)工藝，降低藥品的雜質(zhì)含量，并制定相應(yīng)的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，從各個(gè)環(huán)節(jié)保證和提高藥品的質(zhì)量。近年來此項(xiàng)工作雖有了長足的進(jìn)步，但仍然是我國藥品研究工作的薄弱環(huán)節(jié)，為盡快地縮小和消除與歐美國家先進(jìn)水平的差距，提高藥品的質(zhì)量，藥品研發(fā)和生產(chǎn)者應(yīng)共同努力，對藥品中的雜質(zhì)進(jìn)行規(guī)范地研究，將其控制在安全、合理的限度范圍內(nèi)，以保證藥品質(zhì)量，減少藥品不良反應(yīng)的發(fā)生，確保人民的用藥安全。

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4肖瑩,倪坤儀.新藥中特殊雜質(zhì)的分析研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2002,11(5):364

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13劉振,尹國寅,龔佑祥,等. HPLC-ELSD在1-脫氧野尻霉素,葡萄糖和葡萄糖胺的雜質(zhì)分析中的應(yīng)用[J].分析試驗(yàn)室，2007,26(7)：83

14劉長海,趙亮,張海. 毛細(xì)管電泳法檢查左旋麻黃堿中對映異構(gòu)體雜質(zhì)的研究[J].藥學(xué)實(shí)踐雜志，2009,27(1)：33

15張 璐,陳民輝,蔡美明,等. HPLC和LC-MSn分析葛根素及其注射劑中的有關(guān)物質(zhì)[J].中國生化藥物雜志，2008,29(6)：361

16原歡歡，張繼芬，王琴，等. RP-HPLC 測定梓葛凍干粉針中的藥物含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國藥學(xué)雜志, 2011,46(16):1276