基于“譜-效”相關(guān)的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究方法

劉 莉，李文蘭* ，丁晶鑫

1哈爾濱商業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與環(huán)境科學(xué)研究中心;2國(guó)家教育部抗腫瘤天然藥物工程研究中心，哈爾濱150076

藥物學(xué)研究是自然科學(xué)研究領(lǐng)域中一門古老的學(xué)科，藥物研究水平的優(yōu)劣標(biāo)志著一個(gè)國(guó)家醫(yī)藥和醫(yī)療科學(xué)水平的高低。隨著藥物現(xiàn)代化思維的發(fā)展，及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論對(duì)藥物開發(fā)的影響，作為祖國(guó)醫(yī)藥學(xué)重要組成部分的“中藥”日益受到重視，對(duì)中藥防治疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)即中藥化學(xué)成分的研究和使用亦越來越廣泛。中藥之所以對(duì)疾病具有防控作用，其物質(zhì)基礎(chǔ)在于中藥中所含有與治療病癥相關(guān)的有效成分。中藥所具有的療效是其中所含多種藥效物質(zhì)綜合作用的結(jié)果，有其獨(dú)特的理論體系和應(yīng)用形式，對(duì)于中醫(yī)藥的研究，不能單以研究西方植物藥的方法去闡明，還應(yīng)考慮到中藥是多組分多靶點(diǎn)及具有整合調(diào)節(jié)作用的特殊藥物，因此對(duì)它的深入研究是使其現(xiàn)代化的關(guān)鍵和核心。

中藥含有不同結(jié)構(gòu)、不同性質(zhì)的多種成分，其整體藥效是其中所含的物質(zhì)群整體作用的結(jié)果。近年來指紋圖譜技術(shù)在業(yè)內(nèi)已引起廣泛關(guān)注并成為評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的重要手段，其特點(diǎn)是能夠表征樣品所含化學(xué)成分質(zhì)的特征和量的大小以及中藥的整體特征性［1，2］;從德國(guó)和法國(guó)聯(lián)合開發(fā)的銀杏葉標(biāo)準(zhǔn)制劑制定的標(biāo)準(zhǔn)中可以看出，對(duì)藥物中的總黃酮和總內(nèi)酯大類成分含量進(jìn)行控制，同時(shí)亦對(duì)其指標(biāo)成分間的比例進(jìn)行了控制，并且通過色譜指紋圖設(shè)置了內(nèi)控鑒別，可以說國(guó)際上也在積極提倡通過指紋圖譜對(duì)草藥產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。然而并不能僅以指紋圖譜中所表征的信息評(píng)價(jià)其質(zhì)量的優(yōu)劣，其局限性在于并不能夠明確指紋圖譜與其療效是否具有相關(guān)性、所體現(xiàn)的化學(xué)成分是否代表藥效活性成分。將中藥指紋圖譜中的化學(xué)成分的變化與其療效評(píng)價(jià)相結(jié)合，研究其相關(guān)性，找出與藥效活性相關(guān)的藥效物質(zhì)群，即“譜效關(guān)系”研究，目前成為探索中藥特定藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的主要方法與手段。中藥譜效關(guān)系研究中最關(guān)鍵的問題是如何將指紋圖譜的“譜”與中藥中的藥“效”關(guān)聯(lián)起來。通過譜效相關(guān)性研究所捕獲的信息可以進(jìn)一步闡明與其活性相關(guān)的主要活性成分。譜效關(guān)系研究是近幾年被提出的，如何進(jìn)行譜效相關(guān)性研究還未有統(tǒng)一模式，隨著對(duì)中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的重視及探索，近些年關(guān)于運(yùn)用譜效關(guān)系學(xué)進(jìn)行藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的報(bào)道逐漸增多，現(xiàn)就以下幾方面對(duì)中藥譜效關(guān)系研究方法作一綜述，為中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供思路及參考。

1 中藥譜效關(guān)系研究思路

中藥譜效關(guān)系研究可以從三方面入手:多維聯(lián)用技術(shù)分析、藥效檢測(cè)、信息處理;獲取中藥指紋圖譜和藥效數(shù)據(jù)結(jié)果;通過數(shù)學(xué)處理，建立譜-效數(shù)學(xué)模型，確定出與藥效相關(guān)的成分群，用于質(zhì)量評(píng)價(jià)［3］。譜效關(guān)系研究是將化學(xué)成分的研究與其藥理研究結(jié)合，闡明其有效化學(xué)成分的整體療效與其藥效的相互關(guān)系。中藥譜效相關(guān)研究與中藥現(xiàn)代化密切相關(guān)，目前中藥譜效學(xué)適宜的規(guī)律性研究思路為:通過對(duì)藥物采取不同的制備方法，并根據(jù)其特性采用適合的分析方法［高效液相色譜(HPLC)、氣相色譜(GC)、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)］，構(gòu)建指紋圖譜，獲得多個(gè)化學(xué)成分;根據(jù)藥物所具有的藥效建立適合的藥效模型，對(duì)藥效模型給予藥物，獲得生物樣本，對(duì)生物樣本進(jìn)行分析，獲得生物指紋圖譜及多個(gè)效應(yīng)相關(guān)成分(包括原型及代謝成分);對(duì)所具有的效應(yīng)成分進(jìn)行溯源、組合、篩選，確定其主要成分及影響權(quán)重和對(duì)療效的貢獻(xiàn)率;通過數(shù)學(xué)模型處理，將藥物與實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥V效進(jìn)行關(guān)聯(lián)，總結(jié)規(guī)律，建立譜效關(guān)系，從而獲得藥物譜效關(guān)系。

2 中藥譜效相關(guān)性研究方法

2．1 基于指紋譜信息，進(jìn)行藥效學(xué)驗(yàn)證

中藥譜效關(guān)系的研究建立于其指紋圖譜研究基礎(chǔ)之上，故譜效研究應(yīng)通過采用適合的分析方法建立指紋圖譜。目前在中藥譜效關(guān)系研究中廣泛采用的色譜方法包括高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，通過此分析測(cè)試技術(shù)構(gòu)建指紋圖譜，其色譜峰面積體現(xiàn)了成分與藥效之間的關(guān)系［4］?；谥讣y圖譜信息，從化學(xué)譜中選取有針對(duì)性的化學(xué)成分或成分群，對(duì)其進(jìn)行藥理學(xué)或藥效學(xué)試驗(yàn)，進(jìn)而研究化學(xué)成分及其組合成分的藥理學(xué)效應(yīng)，通過相關(guān)藥理學(xué)效應(yīng)研究尋找出代表總體藥效的最佳成分及有效成分或有效部位。GC色譜常用來分析含有揮發(fā)性成分的藥物譜效關(guān)系研究，如尹蓮等［5］通過GC方法對(duì)加味四妙丸有效部位測(cè)定GC指紋圖譜，并將指紋圖譜各共有峰相對(duì)面積與藥理學(xué)數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)，比較有效共有峰的變化特征，結(jié)果表明該指紋圖譜譜效關(guān)系是表征復(fù)方整體成分-配伍-藥效相關(guān)性的有效途徑。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在譜效關(guān)系研究中主要用于指紋圖譜色譜峰對(duì)應(yīng)成分的鑒定，目前已廣泛應(yīng)用于中藥生理活性及作用機(jī)制的進(jìn)一步研究，如關(guān)楓［6］等采用GC-MS技術(shù)測(cè)定黑龍江產(chǎn)狹葉蕁麻揮發(fā)油中的化學(xué)成分，并對(duì)其成分進(jìn)行分離和鑒定，通過面積歸一法確定相對(duì)含量，最終鑒定出87種化合物，為狹葉蕁麻的資源開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。沈嵐等［7］在研究芍藥甘草效應(yīng)譜效關(guān)系過程中，將給藥后大鼠血清胃底肌條解痙實(shí)驗(yàn)獲得的藥效學(xué)信息，與各組含藥血清HPLC指紋圖譜化學(xué)信息進(jìn)行譜效相關(guān)研究，采用HPLC-ESI-MS/MS對(duì)與藥效呈正相關(guān)的4個(gè)色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，獲得與藥效相關(guān)的目標(biāo)成分。

中藥是一個(gè)復(fù)雜的體系，每一味藥都是一個(gè)方劑，其中的化學(xué)組成并不能夠通過單獨(dú)某張HPLC圖譜完整地表征出來。因此，對(duì)其研究需要引入多維指紋圖譜(multi-dimensional fingerprinting)技術(shù)體系進(jìn)行多維譜效關(guān)系研究，包括“多源指紋圖譜”(multi-resource fingerprinting)與“多元指紋圖譜”(multiple fingerprints)。目前，相關(guān)研究者對(duì)多維指紋圖譜已經(jīng)進(jìn)行了探索研究。如Qi LW等通過DAD、ELSD 檢測(cè)器，對(duì)黃芪［8］和含黃芪的中藥制劑［9］中的黃酮及皂苷類成分進(jìn)行同時(shí)分析;Yi L等［10］通過串聯(lián)多種檢測(cè)器，對(duì)“當(dāng)歸補(bǔ)血湯”中的皂苷類、黃酮類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類物質(zhì)進(jìn)行同時(shí)分析;Li YP 等［11］采用HPLC-DAD、GC-MS對(duì)中藥紅毛七中的多種類型生物堿進(jìn)行了分析;范曉輝［12］等對(duì)復(fù)方丹參滴丸進(jìn)行了多元指紋圖譜技術(shù)分析，構(gòu)建了方中丹參藥材酚酸類成分及三七藥材皂苷類成分的HPLC指紋圖譜以及復(fù)方丹參滴丸的多元HPLC指紋圖譜。通過多維譜效關(guān)系研究，可能解決中藥的質(zhì)量分析難題。

2．2 指紋圖譜信息與藥效學(xué)結(jié)合

將體外化學(xué)指紋圖譜與藥效學(xué)研究結(jié)合，通過以指紋圖譜所表征的信息為指導(dǎo)，用藥效學(xué)數(shù)據(jù)合理優(yōu)化指紋圖譜的建立。并通過指紋圖譜與藥效相關(guān)性分析，研究與該藥物藥效相關(guān)的目標(biāo)化合物。如蛇床子在前期研究中發(fā)現(xiàn)其具有很強(qiáng)的鎮(zhèn)靜催眠作用，但僅限于藥物整體作用，具體具有該作用的物質(zhì)基礎(chǔ)并不明確;有研究者通過對(duì)蛇床子不同溶劑提取物進(jìn)行指紋圖譜分析，確定了8個(gè)共有峰，并將各提取物灌胃小鼠，在最后一次給藥60分鐘后腹腔注射戊巴比妥鈉進(jìn)行鎮(zhèn)靜催眠測(cè)試，觀察戊巴比妥鈉對(duì)小鼠的持續(xù)睡眠時(shí)間，比較各提取物鎮(zhèn)靜催眠活性，通過指紋峰面積與持續(xù)睡眠時(shí)間的相關(guān)系數(shù)大小，推測(cè)出8個(gè)共有峰中的第5號(hào)峰與鎮(zhèn)靜催眠作用具有顯著的相關(guān)性，綜合分析確定5號(hào)峰為蛇床子起鎮(zhèn)靜作用的主要目標(biāo)活性成分，為其下一步分離及結(jié)構(gòu)鑒定打下基礎(chǔ)［13］。陳華國(guó)等［14］采用HPLC法對(duì)虎杖不同極性提取物進(jìn)行指紋圖譜研究，并對(duì)其提取物進(jìn)行抑菌作用及抗腫瘤作用研究，通過檢測(cè)其生物活性指標(biāo)，獲得藥效數(shù)據(jù)，采用灰關(guān)聯(lián)度方法分析其譜效關(guān)系，結(jié)果表明與抑菌作用及抗腫瘤作用關(guān)聯(lián)度較大的成分為黃酮類和蒽醌類成分;通過譜效相關(guān)性研究，對(duì)虎杖藥效特征峰所表達(dá)的具體藥效作用進(jìn)行了初探，為最終獲得化學(xué)成分信息和藥效信息提供了可能，同時(shí)也為天然藥物譜效關(guān)聯(lián)的指紋圖譜的建立提供了新的思路。

建立血清指紋圖譜，根據(jù)含藥血清的藥理強(qiáng)度與其血清指紋圖譜中的該成分指紋峰的大小進(jìn)行比對(duì)，以此闡釋該成分是否與藥理作用相關(guān)。血清指紋圖譜信息與血清藥效進(jìn)行相關(guān)分析，有別于體外指紋圖譜與藥效相關(guān)分析，排除了機(jī)體對(duì)藥物體內(nèi)代謝的影響，通過譜效研究能夠直接獲得體內(nèi)活性物質(zhì)，并用于探尋體內(nèi)相關(guān)活性物質(zhì);將體外化學(xué)指紋圖譜、血清藥物化學(xué)指紋圖譜和血清藥理效應(yīng)對(duì)比分析，建立譜效相關(guān)，是藥效物質(zhì)基礎(chǔ)確定的有效手段，但是血清指紋圖譜與血清藥效學(xué)研究的時(shí)間控制點(diǎn)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有較大影響。

沈嵐等［7］在對(duì)芍藥甘草復(fù)方解痙活性成分研究中，通過灌胃SD大鼠不同配比的芍藥苷、甘草酸、甘草總黃酮效應(yīng)組分的混懸溶液，分別在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采血，分離血清，獲取芍藥甘草體內(nèi)成分血清特征圖譜;同時(shí)制備大鼠胃底環(huán)行肌條，將效應(yīng)組分配伍血清對(duì)胃底環(huán)行肌條進(jìn)行胃底肌條解痙實(shí)驗(yàn)，通過測(cè)量收縮張力，獲得各組抑制率，利用雙變量相關(guān)分析處理血清指紋圖譜與藥效相關(guān)系數(shù)，通過譜效研究發(fā)現(xiàn)給藥后在體內(nèi)與解痙作用相關(guān)性較大的色譜峰有4個(gè)，由此獲得體內(nèi)活性物質(zhì)，在此基礎(chǔ)上對(duì)給藥后的血清樣品進(jìn)行HPLC-ESI-MS/MS分析，確定了與藥效相關(guān)性較大的入血成分，其主要是效應(yīng)組分代謝成分，此項(xiàng)研究建立了體內(nèi)生物活性物質(zhì)譜效研究的新方法，同時(shí)也為探尋芍藥甘草解痙作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了有效的研究手段。郭承軍等［15］將血清代謝研究結(jié)合色譜成分分析，獲得與抗流感藥效密切相關(guān)的成分峰，建立了相關(guān)譜效關(guān)系模型，奠定了金銀花體內(nèi)藥效作用機(jī)理研究基礎(chǔ)。

2．3 譜效相關(guān)數(shù)據(jù)處理技術(shù)

目前天然藥物譜效關(guān)系的闡釋依賴于數(shù)據(jù)分析方法，現(xiàn)階段采用的數(shù)據(jù)處理方法并不統(tǒng)一，其主要數(shù)據(jù)處理法包括相關(guān)分析、聚類分析、回歸分析(普通多元回歸、偏最小二乘回歸)、灰色關(guān)聯(lián)度分析、主成分分析、圖譜比對(duì)等多種分析方法，采用這些方法將指紋圖譜與藥效活性數(shù)據(jù)結(jié)合建立數(shù)學(xué)模型，研究二者的相關(guān)性，即得到“譜效關(guān)系”。由于每種方法都有其優(yōu)點(diǎn)和不足，采用何種處理方法來研究譜效關(guān)系還需進(jìn)一步研究和探討［4］。

3 譜效相關(guān)在中藥研究中的應(yīng)用

3．1 在單味中藥研究中的應(yīng)用

中藥單味藥中將某一特定成分含量的多少作為評(píng)價(jià)該味中藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有一定的局限性，其成分含量的高低不能完全代表其質(zhì)量?jī)?yōu)劣，在某些藥效作用方面，其它的活性成分可能起著關(guān)鍵作用，其藥理作用可能是多個(gè)成分的協(xié)同作用。因此，在建立指紋圖譜過程中，需要考慮中藥的各種藥理藥效，為全面評(píng)價(jià)某一單味藥質(zhì)量提供有力依據(jù)。

劉榮華等［16］以山楂葉為研究對(duì)象，針對(duì)其主要臨床作用—抗冠心病作用，研究不同種山楂葉HPLC指紋圖譜的各指紋峰，并進(jìn)行抗大鼠PMN呼吸爆發(fā)藥效實(shí)驗(yàn)，建立了各指紋峰峰面積與藥效之間關(guān)系(峰效關(guān)系)的數(shù)學(xué)模型，通過數(shù)學(xué)、化學(xué)計(jì)量學(xué)、計(jì)算機(jī)編程與模擬等手段將山楂葉的HPLC指紋圖譜翻譯成生物活性指紋圖譜(包括藥效指紋圖譜和效價(jià)指紋圖譜)，為中藥譜效關(guān)系研究提供了思路。

金銀花具有明顯的抗菌、抗病毒作用，郭承軍等［15］以流感模型小鼠為研究對(duì)象，對(duì)小鼠灌胃金銀花提取液，下腔腹主靜脈取血并分離血清，進(jìn)行血清指紋譜分析，將正常小鼠與流感模型小鼠的血清成分圖譜進(jìn)行比對(duì)，將血清代謝研究與色譜分析相結(jié)合，獲得與抗流感藥效密切相關(guān)的成分峰，此項(xiàng)研究建立了相關(guān)譜效關(guān)系模型，為金銀花體內(nèi)藥效作用機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。

倪力軍等［17］從丹參藥材中提取純化丹酚酸，構(gòu)建9個(gè)丹酚酸樣品，并建立相應(yīng)HPLC指紋圖譜，對(duì)各樣品的抗氧化活性通過兩個(gè)體外應(yīng)激模型進(jìn)行比較，將抗氧化活性與HPLC色譜圖進(jìn)行PLS回歸分析［18］，對(duì)各樣品中主成分的變化與抗氧化活性間的關(guān)系進(jìn)行了考察，為控制丹參制劑的質(zhì)量提供了依據(jù)。

板藍(lán)根具有紅細(xì)胞凝集作用，孫琴等［19］通過用紅細(xì)胞凝集活性檢測(cè)法對(duì)進(jìn)行系統(tǒng)化學(xué)部位分離的板藍(lán)根藥材進(jìn)行抗病毒活性的化學(xué)部位篩選，篩選出正丁醇萃取部位具有強(qiáng)紅細(xì)胞凝集活性，針對(duì)正丁醇萃取部位建立了不同產(chǎn)地的10批樣品的HPLC指紋圖譜，同時(shí)進(jìn)行生物效應(yīng)測(cè)定，運(yùn)用數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法研究其譜效關(guān)系;譜效研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)共有峰中的2號(hào)和11號(hào)的相對(duì)峰面積比例與樣品凝集作用呈正相關(guān)，故推斷板藍(lán)根具有抗病毒作用的特征峰可能為2號(hào)和11號(hào)峰，此項(xiàng)研究為建立板藍(lán)根具有抗病毒活性的譜效相關(guān)的質(zhì)量控制模式提供了理論依據(jù)。

3．2 在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用

中藥復(fù)方譜效關(guān)系研究常用的方法是將該全方作為藥效，將全方用不同方法進(jìn)行提取分離，所得到的各個(gè)部分進(jìn)行色譜分析和藥理實(shí)驗(yàn)，通過利用數(shù)學(xué)處理方法和計(jì)算機(jī)功能，找出色譜峰與藥效之間的關(guān)系，將分離得到的各個(gè)部分通過正交分析法進(jìn)行組合，再進(jìn)行色譜分析及藥理實(shí)驗(yàn)，再通過數(shù)學(xué)相關(guān)分析找出組合后的組分與藥效相關(guān)性。中藥復(fù)方配伍的研究方法是通過配伍變化產(chǎn)生藥效學(xué)的差異來研究配伍機(jī)理;或是對(duì)藥物全方的貢獻(xiàn)通過指標(biāo)性成分的變化來進(jìn)行考察;或是采用指紋圖譜技術(shù)對(duì)該藥進(jìn)行整體描述［20，21］。通過以上研究方法將化學(xué)成分群特征峰的指紋譜與藥效結(jié)果相關(guān)聯(lián)，探討復(fù)方配伍規(guī)律。

中藥復(fù)方具有多組分多靶點(diǎn)的整合調(diào)節(jié)作用，其譜效關(guān)系的建立能夠反應(yīng)復(fù)方的內(nèi)在質(zhì)量。中藥血清藥理學(xué)和血清藥物化學(xué)兩者的結(jié)合研究有助于中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的闡明。竇志華等［22］通過血清藥理學(xué)及血清藥物化學(xué)相結(jié)合探尋中藥復(fù)方五仁醇膠囊的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，實(shí)驗(yàn)研究中將復(fù)方五仁醇全方制劑含藥血清、各單味制劑含藥血清及拆方后的各組方藥材陰性制劑進(jìn)行HPLC測(cè)定和藥效學(xué)評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)方五仁醇全方、單味五味子及缺三七、柴胡、葉下珠制劑的含藥血清對(duì)肝損傷的保護(hù)作用明顯，而缺單味三七、柴胡、葉下珠制劑的含藥血清和缺五味子制劑的含藥血清對(duì)肝損傷的保護(hù)作用不明顯，同時(shí)單味五味子全方制劑的含藥血清藥效差異無顯著性區(qū)別，具有很好的譜效相關(guān)性，最終確定君藥五味子中含有的木脂素類成分為保肝作用的藥效物質(zhì)。

譜效關(guān)系研究是確定中藥復(fù)方藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的有效手段，沈嵐等［7］對(duì)芍藥甘草復(fù)方譜效進(jìn)行了探討，通過給藥后大鼠血清胃底肌條解痙實(shí)驗(yàn)獲得的藥效學(xué)信息，與各組含藥血清HPLC指紋圖譜化學(xué)信息進(jìn)行譜效相關(guān)研究，采用HPLC-ESI-MS/MS對(duì)與藥效呈正相關(guān)的4個(gè)色譜峰進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，獲得與藥效相關(guān)的目標(biāo)成分，并經(jīng)質(zhì)譜分析，確定了相關(guān)效應(yīng)組分的代謝成分，獲得了體內(nèi)活性物質(zhì)，為該中藥復(fù)方活性成分的純化奠定了基礎(chǔ)。

建立中藥譜效關(guān)系能夠反映復(fù)方的內(nèi)在質(zhì)量，鄧翀等［23］在已有三黃方制劑指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)三黃方制劑進(jìn)行體外抗內(nèi)毒素活性作用研究，將抗內(nèi)毒素活性作用研究結(jié)果與指紋圖譜研究結(jié)果相關(guān)聯(lián)，以尋找譜與效之間的相關(guān)性及科學(xué)規(guī)律。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示三黃方制劑中有6種成分與體外抗內(nèi)毒素活性相關(guān)，提示可以以該6種成分為指標(biāo)對(duì)三黃方制劑進(jìn)行質(zhì)量控制，此研究為三黃方制劑的藥效評(píng)價(jià)提供了科學(xué)依據(jù)。

3．3 作為中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式

余伯陽等課題組提出了中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)新模式［24］—“譜效整合指紋譜”概念，并對(duì)其開展深入研究。其課題組內(nèi)常艷旭等［25］通過HPLC-DAD-CL聯(lián)用技術(shù)對(duì)丹參注射液進(jìn)行在線活性分析，分別構(gòu)建活性指紋譜和效價(jià)指紋譜，將化學(xué)信息指紋譜和活性信息指紋譜結(jié)合分析，確定了野生丹參的替代品為栽培丹參和白花丹參。丁曉萍等［26，27］運(yùn)用HPLC-DAD-MS-CL聯(lián)用技術(shù)獲得了不同淫羊藿藥材的三維譜效整合指紋譜，使淫羊藿多種成分的MS結(jié)構(gòu)鑒定和在線活性測(cè)定得以實(shí)現(xiàn)，構(gòu)建了成分指紋譜與成分峰及藥效相對(duì)應(yīng)的表觀形式，可以對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，對(duì)中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系具有補(bǔ)充完善作用。在線活性分析能夠較好地完善“譜效整合指紋譜”研究，該方法在國(guó)外主要應(yīng)用于食品分析領(lǐng)域，如 Toshimasa Toyo’oka 等［28］對(duì)茶葉中的抗氧化成分進(jìn)行在線活性評(píng)價(jià)和分析等。

4 結(jié)語

目前天然藥物譜效關(guān)系學(xué)研究方法存在著一定的局限性，還沒有形成成熟穩(wěn)定的研究思路和方法。譜效關(guān)系反映了藥物內(nèi)部各成分與藥效之間的相關(guān)性，是數(shù)學(xué)相關(guān)分析與藥學(xué)的交叉應(yīng)用，體現(xiàn)的是某個(gè)組分與藥效相關(guān)性的大小或是某個(gè)組分對(duì)藥效更具影響。譜效關(guān)系研究目前還沒有闡明復(fù)雜成分的協(xié)同作用，突破此項(xiàng)技術(shù)難點(diǎn)是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵所在。譜效相關(guān)研究需要進(jìn)行學(xué)科交叉與創(chuàng)新，已有人對(duì)此提出了不同的思路:如李建新［29］、范驍輝［30］等分別提出將成分指紋圖譜通過運(yùn)用微流控芯片技術(shù)對(duì)其進(jìn)行藥效檢測(cè);及將多維特征圖譜與通過體內(nèi)、外計(jì)算機(jī)模擬而獲得的多指標(biāo)效應(yīng)檢測(cè)法構(gòu)成的藥效指標(biāo)進(jìn)行整合，從而獲得多維藥效特征圖譜，此方法的提出展示了譜效關(guān)系研究將會(huì)引入前沿學(xué)科技術(shù)，其應(yīng)用前景廣泛，為譜效相關(guān)研究提供了新思路和新方法;余伯陽等介紹了通過引入在線活性分析聯(lián)用技術(shù)，建立了成分分離與化學(xué)指紋信息獲取以及活性檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行的在線譜效整合體系，為中藥譜效相關(guān)研究提供了一種可借鑒的新模式［21］。目前對(duì)中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究并不深入，其譜效關(guān)系研究?jī)H限于譜與效的相關(guān)性，缺乏對(duì)其藥理活性的特征峰進(jìn)行定性定量研究，隨著分析技術(shù)水平的不斷提高與創(chuàng)新，中藥譜效關(guān)系研究必將更加深入，研究方法必將更加完善。

1 Cheng YY，et al．An approach to comparative analysis of chromatographic fingerprints for assuring the quality of botanical drugs．JChem Inf Comput Sci，2003，43:1068-1076．

2 Cheng YY，et al．Fractal fingerprinting of chromatographic profiles based on wavelet analysis and its application to characterize the quality grade of medicinal herbs．J Chem Inf Comput Sci，2003，43:1959-1965．

3 He YM(何毓敏)，etal．Approach tomatter-elementanalysis method for quality evaluation of Chinese materia medica based on spectrum-activity relationship．Chin Tradit Herb Drugs(中草藥)，2009，40:1182．

4 Deng SH(鄧書鴻)，Nie L(聶磊)．Analysismethod and data processing technology process of Chinesemedicine spectrum effect relationship．J Chin Med Mater(中藥材)，2010，33:1820．

5 Yin L(尹蓮)，Qian J(錢俊)．Research on GC fingerprint spectrum effect relationship and changes of compatibility of effective fractions of fourwonderful pill．Chin Tradit PatMed(中成藥)，2007，9:634-637．

6 Guan F(關(guān)楓)，et al．Analysis of constituents of volatile oil inUrtica angusitifoliafrom Heilongjiang by GC-MS．JHarbin Univ of Commerce，Nat Sci(哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，自科版)，2009，25:395-398．

7 Shen L(沈嵐)，et al．Study on fingerprints correlated with pharmacodynamic ofPaeonia lacliflora andGlycyrrhiza uralensiseffective compounds．Chin JChin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，2008，33:2658-2660．

8 Qi LW，et al．Quality evaluation of Radix Astragali through a simultaneous determination of six major active isoflavonoids and fourmain saponins by high-performance liquid chromatography coupled with diode array and evaporative light scattering detectors．JChromatogr A，2006，1134:162-169．

9 Qi LW，et al．Simultaneous determination of 15 marker constituents in various Radix Astragali preparations by solidphase extraction and high-performance liquid chromatography．JSep Sci，2008，31:97-106．

10 Yi L，et al．Simultaneous determination of bioactive constituents in Danggui Buxue Tang for quality control by HPLC coupled with a diode array detector，an evaporative light scattering detector and mass spectrometry．Anal Bioanal Chem，2007，389:571-580．

11 Li YP，et al．An approach to develop binary chromatographic fingerprints of the total alkaloids fromCaulophyllum robustumby high performance liquid chromatography/diode array detector and gas chromatography/mass spectrometry．J Pharm Biomed Anal，2007，43:1667-1672．

12 Fan XH，et al．Multiple chromatographic fingerprint and its application to the quality control of herbal medicines．Anal Chim Acta，2006，555:217-224．

13 Tong LG(仝立國(guó))，et al．Spectrum analysis of sedative –hypnotic material in Fructus Cnidii．Shanxi J Tradit Chin Med，2011，27(6):52-53．

14 Chen HG(陳華國(guó))，et al．HPLC fingerprint analysis of the extract from Polygonum Cuspidatum and associated pharmacodynamics．J China Pharm(中國(guó)藥房)，2010，21:1775-1776．

15 Guo CJ(郭承軍)，Shi JY(石俊英)．Spectrum activity relationship ofanti-mouse influenza of the honeysuckle．Clin Med China(中藥藥理與臨床)，2009，25(4):50-52．

16 Liu RH(劉榮華)，et al．Relationship between HPLC fingerprint chromatogram and inhibitory effect on respiratory burst of rat PMN of leaves of Crataegu．Chin JChin Mater Med(中國(guó)中藥雜志)，2008，33:1884-1889．

17 Ni LJ(倪力軍)，et al．Relationship between HPLC fingerprints and anti-oxidation activity of different salvianolic acid extracts．Chin Tradit Pat Med(中成藥)，2011，33:2030-2032．

18 Wold S，et al．PLS-regression:a basic tool of chemometrics．Chemometr Intell Lab Syst Lab，2001，58:109-130．

19 Sun Q(孫琴)，etal．Spectrum-activity relationship of hemagglutination components in Isatidis Radix．Chin Tradit and Herbal Drugs(中草藥)，2012，43:125-130．

20 WangWG(王偉光)，etal．Influence of compatibility on content ofberberine in Maxingganshidecoction．JChin Med Mater(中藥材)，2007，30:602-605．

21 Qin KM(秦昆明)，et al．Application status of fingerprint technology in modern research of prescription of traditional Chinesemedicine．World Sci Technol/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica(世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化)，2009，11:287-293．

22 Dou ZH(竇志華)，et al．Profile-effect between fingerprint and liver protection of serum containing compound Wu ren chun capsules．J Fourth Mil Med Univ(第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào))，2008，29:116-118．

23 Deng C(鄧翀)，et al．Spectrum efficiency relationship research on anti-endotoxin activity of San-Huang formula．Lishizhen Med Mater Medica Res(時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥)，2011，22:525-526．

24 Qi J(戚進(jìn))，Yu BY(余伯陽)．A new methodology for the quality evaluation of traditional Chinese medicine-integrated spectrum-effect fingerprint research．Chin J Nat Med(中國(guó)天然藥物)，2010，8:171-174．

25 Chang YX，et al．Potency fingerprint of herbal products Danshen injection for their quality evaluation．Chem Pharm Bull，2009，57:586-590．

26 Ding XP，et al．Quality control of flavonoids in Ginkgo biloba leaves by high-performance liquid chromatography with diode array detection and on-line radical scavenging activity detection．JChromatogr A，2009，1216:2204-2210．

27 Ding XP，et al．Quality and antioxidant activity detection of Crataegus leaves using on-line high-performance liquid chromatography with diode array detector coupled to chemiluminescence detection．Food Chem，2010，120:929-933．

28 Toyo'oka T，et al．On-line screeningmethods for antioxidants scavenging superoxide anion radical and hydrogen peroxide by liquid chromatography with indirect chemiluminescence detection．Talanta，2003，60:4671-4675．

29 Shi ZB(史志兵)，et al．New Insight on the construction of bioeffect fingerprint of traditional Chinese medicine—Integration with microfluidic chip technique．Chin JNatMed(中國(guó)天然藥物)，2010，8:162-166．

30 Li YF(李云飛)，et al．A strategy formultidimensional spectrum-effect relationship of traditional Chinesemedicine．Chin JNatMed(中國(guó)天然藥物)，2010，8:167-170．