核桃楸皮藥理作用的研究概述

常 樂 孟 楠 雷 濤 吳宜艷

牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江牡丹江157011

核桃楸是我國重要的藥原植物，主要分布于小興安嶺、完達(dá)山脈、長白山區(qū)及遼寧東部，大興安嶺林區(qū)東南部及河北、河南、山西、甘肅等地也有少量分布?！堕_寶本草》最早記載核桃楸有補(bǔ)腎固精、斂肺定喘、抑菌鎮(zhèn)咳及抗癌之功效，在印度、韓國和非洲，核桃楸各個部位的提取物作為民間藥物已經(jīng)使用多年。核桃楸皮具有消炎、抗菌、抗氧化[1]、抗腫瘤作用。通過對近年相關(guān)研究人員的實(shí)驗(yàn)研究的概括總結(jié)，本文對其進(jìn)行綜述，以期能夠?yàn)楹颂议逼さ乃幚砘钚匝芯刻峁椭?/p>

1 核桃楸皮的藥理作用

1.1 急性毒理

半數(shù)致死量（LD50，單位mg/kg體重）系指能引起一群個體50%死亡所需劑量，也稱致死中量。LD50數(shù)值越小，表示外來化合物毒性越強(qiáng)；反之，LD50數(shù)值越大，則毒性越低。作為一個毒性的指標(biāo)，LD50在一定程度上有其缺點(diǎn)。測試的結(jié)果可受很多因素影響，例如實(shí)驗(yàn)品的種類、測試樣品的基因特點(diǎn)、環(huán)境因素及注射方法等。另一大限制是，LD50只用于測試會導(dǎo)致短時間內(nèi)死亡的急性中毒，卻沒有計(jì)算長期的影響。孟繁欽等[2]通過中藥核桃楸皮水提物對小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以最大濃度、最大容量灌胃給藥，12 h內(nèi)給藥3次，連續(xù)觀察7 d，詳細(xì)觀察記錄小鼠體征并檢測血液指標(biāo)情況，最終確定核桃楸皮水提物無明顯的急性毒理反應(yīng)。才玉婷等[3]通過中藥核桃楸皮水提液的正丁醇萃取物對小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以最大濃度、最大容量灌胃給藥，12 h內(nèi)給藥3次，連續(xù)觀察7 d，詳細(xì)觀察記錄小鼠體征并檢測血液指標(biāo)情況，最終確定核桃楸皮正丁醇提取物無明顯的急性毒理反應(yīng)。雷濤等[4]測定中藥核桃楸皮甲醇提取物小鼠半數(shù)致死量。通過小鼠實(shí)驗(yàn)，40只小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半，以最大濃度、最大容量灌胃給藥，24 h內(nèi)給藥，觀察7 d內(nèi)小鼠的毒性反應(yīng)及死亡情況，計(jì)算LD50為2.622 mg/kg，其95%可信區(qū)間為1.811 mg/kg≤LD50≤5.433 mg/kg。近期，有學(xué)者通過水提取核桃楸皮粗多糖，除蛋白處理，采用核桃楸皮粗多糖溶液（濃度5.4 mg/mL）為實(shí)驗(yàn)組，蒸餾水為對照組。每個實(shí)驗(yàn)組給藥設(shè)為：①灌胃1次/d；②灌胃2次/d，間隔12 h；③灌胃3次/d，間隔8 h；④腹腔注射1次/d；⑤腹腔注射2次/d，間隔8 h；⑥腹腔注射3次/d，間隔8 h。小鼠給藥量：灌胃40 mL/kg，腹腔注射20 mL/kg。實(shí)驗(yàn)過程，禁食不禁水12 h后，灌胃、注射。連續(xù)7 d，觀察動物精神狀況、活動狀態(tài)、呼吸、采食和分泌物情況。每隔1天測量體重。結(jié)果觀察小鼠體態(tài)無異常，小鼠無死亡。通過以上實(shí)驗(yàn)，并查閱核桃楸皮毒理相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為，核桃楸皮含有的毒性物質(zhì)應(yīng)為脂溶性物質(zhì)，如胡桃醌，胡桃醌具有明確的毒性[5]，也具有明確的抗腫瘤作用[6]，核桃楸皮水溶性物質(zhì)應(yīng)為低毒或無毒。

1.2 清除自由基

自由基也稱為“游離基”，是含有一個不成對電子的原子團(tuán)。由于原子形成分子時，化學(xué)鍵中電子必須成對出現(xiàn)，因此，自由基就奪取其他物質(zhì)的一個電子，使自己形成穩(wěn)定的物質(zhì)。在化學(xué)中，這種現(xiàn)象稱為“氧化”。生物體系中主要遇到的是氧自由基，例如超氧陰離子自由基、羥自由基、脂氧自由基、二氧化氮和一氧化氮自由基。加上過氧化氫、單線態(tài)氧和臭氧，通稱活性氧。體內(nèi)活性氧自由基具有一定的功能，如免疫和信號傳導(dǎo)過程。但過多的活性氧自由基就會有破壞作用，導(dǎo)致人體正常細(xì)胞和組織的損壞，從而引起多種疾病。雷濤等[7]研究核桃楸皮粗多糖體外清除自由基的能力，實(shí)驗(yàn)采用羥基自由基和超氧陰離子分別檢測了核桃楸皮粗多糖的體外清除自由基的能力。羥基自由基IC50為1.146 88 mg/mL，超氧陰離子自由基IC50為1.268 25 mg/mL?，F(xiàn)代研究表明核桃楸皮提取液具有較好的抗菌、消炎作用，自由基實(shí)驗(yàn)為核桃楸皮的皮膚用藥提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1.3 活性成分含量測定

孟令鍇等[8]以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，通過紫外分光光度法，在410 nm測定總黃酮含量為2.20%。槲皮素能顯著抑制促癌劑的作用，抑制離體惡性細(xì)胞的生長，抑制艾氏腹水癌細(xì)胞DNA、RNA和蛋白質(zhì)合成[9]。槲皮素及其苷類表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗癌活性，其作用機(jī)制除對抗自由基對細(xì)胞的破壞作用外，還能直接抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。雷濤等[10]通過超聲提取槲皮素，轉(zhuǎn)無水乙醇溶解，在25℃、370 nm紫外分光光度法條件下，測定吸光度。線性范圍為0.046 4～0.232 0 mg/mL，r=0.998 4，提示槲皮素具有抗腫瘤作用，且核桃楸皮中槲皮素的平均含量為0.28%。

1.4 抗腫瘤

MTT英文全稱為3-（4，5）-dimethylthiahiazo（-z-y1）-3，5-diphenytetrazoliumromide，化學(xué)名為3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名為噻唑藍(lán)。MTT檢測原理：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性MTT，使其還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490 nm波長處測定的光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥篩選物、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。侯甲福等[11]采用MTT法測定核桃楸皮提取物對人胃癌細(xì)胞株SGC-7901和人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721的生長抑制情況。核桃楸皮提取物具有明顯的抗腫瘤作用，并且隨濃度的增加和時間的延長而增強(qiáng)。近期，筆者應(yīng)用MTT比色法，以五氟尿嘧啶為陽性對照組，在490 nm檢測不同劑量的核桃楸皮乙醇提取物水溶液的OD值，考察核桃楸皮乙醇提取物水溶液對肝癌細(xì)胞SMMC-7721的24 h和48 h抑制作用。結(jié)果顯示，乙醇提取液濃度為0.2 mg/mL，其IC50為0.053 0 mg/mL。筆者還將核桃楸皮粉碎后，經(jīng)索氏提取器，乙醇回流至無色，提取3次，濃縮、濾紙過濾。取粗多糖溶液80 mL，氯仿-正丁醇（4∶1）溶液20 mL，置于分液漏斗中，充分振搖后，經(jīng)離心機(jī)離心，分離水相和氯仿相。將水相再加入相當(dāng)于其體積1/4的氯仿-正丁醇溶液，重復(fù)上述過程，脫蛋白。應(yīng)用MTT比色法，以五氟尿嘧啶為陽性對照組，在490 nm檢測不同劑量的核桃楸皮粗多糖提取液的OD值，考察粗多糖提取液對人體肝癌細(xì)胞SMMC-7721和小鼠肝癌細(xì)胞H22的24 h和48 h抑制作用。結(jié)果顯示，粗多糖IC50為0.047 5 mg/mL。

2 核桃楸皮的研究前景及展望

惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康的常見病和多發(fā)病，人類因惡性腫瘤而引起的死亡率居所有疾病死亡率的第2位，僅次于心腦血管疾病[12-13]。惡性腫瘤的治療方法有手術(shù)治療、放射治療和藥物治療等，在很大程度上以藥物治療為主，而化療藥物存在毒副作用大、缺乏選擇性等缺點(diǎn)，所以探尋一種毒副作用小、高效的抗腫瘤活性物質(zhì)就成為抗癌藥物研究的熱點(diǎn)[14-15]。目前相對于化療藥物，中草藥在抗癌方面具有安全、毒副作用小、遺傳致突變率低以及服用方便等優(yōu)點(diǎn)。

中藥是中醫(yī)學(xué)理論中重要的組成部分，核桃楸分布廣泛，資源豐富，是我國重要的藥源植物，其未成熟果皮、根皮、外殼及葉片均可入藥，因此有較大的開發(fā)潛力。本文通過對近年來的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行總結(jié)，希望能夠?yàn)楹颂议逼さ乃幚硌芯刻峁椭颂议逼た鼓[瘤有待于進(jìn)行更加深入和細(xì)致的研究。

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