高效液相色譜在藥學(xué)的應(yīng)用概況和最近進(jìn)展

張人福 宋曉園

江西省贛州市食品藥品檢驗(yàn)所，江西贛州 341000

高效液相色譜在藥學(xué)的應(yīng)用概況和最近進(jìn)展

張人福 宋曉園

江西省贛州市食品藥品檢驗(yàn)所，江西贛州 341000

高效液相色譜法是近年來逐漸興起的一種高效而快速的分離與分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測試的重要方法。目前，高效液相色譜法已被廣泛運(yùn)用于各個領(lǐng)域。因其選擇性好、靈敏度高、可準(zhǔn)確分析微量組成、分析痕量樣品等特點(diǎn)已成為醫(yī)藥學(xué)分析領(lǐng)域發(fā)展最快捷的分析技術(shù)。隨著高效液相色譜法的普及，色譜儀也得到了相應(yīng)的更新與改進(jìn)，色譜儀也正朝著多樣化、自動化、聯(lián)用技術(shù)化等方向發(fā)展。本文通過對近十幾年來國內(nèi)發(fā)表的具有代表性的相關(guān)文章進(jìn)行分析、整理和歸納，綜述了高效液相色譜技術(shù)在（中）藥學(xué)、食品檢測、保健品檢測等研究領(lǐng)域中的應(yīng)用和最新研究進(jìn)展。

高效液相色譜；藥學(xué)研究；進(jìn)展

色譜法（chromatography）又稱為色譜分析法、層析法，是一種分離和分析方法，在分析化學(xué)、有機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。色譜法的作用機(jī)制為根據(jù)不同物質(zhì)在不同相態(tài)下進(jìn)行選擇性分配，針對流動相對固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，不同的物質(zhì)會以不同的速度以固定相移動，最終實(shí)現(xiàn)分離。本文所研究的高效液相色譜技術(shù)（high performance liquid chromatography，HPLC）全程依靠儀器完成。本文對HPLC的特點(diǎn)、類型并對其在藥學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用進(jìn)行了相關(guān)闡述。

1 HPLC在中藥學(xué)中的應(yīng)用

中藥學(xué)的研究是通過不同單味藥與復(fù)方藥的配伍方法及煎煮時(shí)間等來發(fā)掘中藥中化學(xué)成分的變化規(guī)律與藥理聯(lián)系[1-2]。在實(shí)際應(yīng)用中，最為簡捷有效的方法為選取長度足夠的色譜柱，設(shè)置合適的時(shí)間以溫和流動相進(jìn)行洗脫[3-4]。也有資料顯示新式的毛細(xì)管電色譜在中藥成分的分析上表現(xiàn)出極大的優(yōu)勢，其規(guī)避了HPLC所有的柱床污染，沖洗方便，分辨率高，集HPLC與脈細(xì)管電泳優(yōu)點(diǎn)于一體，利用了HPLC高效快速、高靈敏度的特點(diǎn)，使成分分析法更為完善，在中藥學(xué)的研究領(lǐng)域發(fā)揮了重要的作用[5]。

1.1 HPLC在中藥含量測定方面的運(yùn)用

雷萍等[6]采用HPLC分離測定了蟲草產(chǎn)品中腺苷和蟲草素的含量，選取Acquityuplc C18色譜柱，以乙腈-水流動相進(jìn)行洗脫，基本可在4 min內(nèi)行基線分離，各組分的濃度與峰面積在1～17.5 μg/ml范圍內(nèi)線性良好。HPLC在中藥含量測定方面的研究不勝枚舉，但均證明其具有一定的特異性[7-8]。

1.2 HPLC在中藥代謝方面的運(yùn)用

薛璟等[9-10]使用大鼠為標(biāo)本行體腸灌流實(shí)驗(yàn)，采用HPLC檢測雷公藤甲素含量，研究不同吸收部位于藥物濃度對雷公藤甲素的吸收。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各腸段吸收情況為：回腸＜空腸＜結(jié)腸＜十二指腸，各腸段之間吸收量的差異與在不同質(zhì)量濃度下腸道對雷公藤甲素的吸收的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2 HPLC在食品檢測中的應(yīng)用

2.1 HPLC在食品添加劑檢測中的應(yīng)用

食品添加劑可以提升食品的色、香、味，延長食物的保藏期限，為日常生活帶來了很多樂趣和方便。但是不合理地使用食品添加劑不僅降低食品質(zhì)量，甚至損害人體健康，如蘇丹紅鴨蛋事件。目前我國對食品添加劑的使用種類、數(shù)量有著嚴(yán)格的限制，嚴(yán)禁添加危害人體健康的添加劑。

2.1.1 甜昧劑 甜味劑可以使被添加食物的甜度增加。一般來說，人工添加的甜昧劑都是沒有營養(yǎng)的，最常用的有乙酰磺胺酸鉀（安塞蜜）、環(huán)己氨基磺酸鈉（甜蜜素）、糖精鈉等，其中尤以低價(jià)格的糖精鈉使用范圍較廣。少量添加甜味劑對人體沒有副作用，但是，添加過量將會危害人體健康。丁芳林等[11]采用氣、液相色譜聯(lián)用技術(shù)，定量檢測果凍等食品中安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素等甜味劑的含量，結(jié)果加樣回收率為93.19%～100.90%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.05%～2.04%。這種氣、液相色譜聯(lián)用技術(shù)，不僅能夠在短時(shí)間內(nèi)對果凍中的甜味劑進(jìn)行定性、定量分析，而且也同樣適用于檢測飲料中的甜味劑的含量。

2.1.2 防腐劑 防腐劑能夠延長食物的保藏時(shí)間，有效阻止細(xì)菌等微生物的滋生。比較常用的防腐劑有山梨酸、苯甲酸和它們的鈉鹽等。當(dāng)前，我國食品企業(yè)向食品中添加的防腐劑大都是人工合成的，使用過量會損害身體健康。趙質(zhì)創(chuàng)等[12]采用甲醇、氨化甲醇、水、80%甲醇和20%甲醇提取糕點(diǎn)中的防腐劑，提取液經(jīng)C18色譜柱進(jìn)行分離，用甲醇-乙酸銨溶液進(jìn)行梯度洗脫，在波長為220 nm處進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果表明，苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、富馬酸二甲酯這4種常見防腐劑完全分離開來，且分離效果良好，回收率為84%～106%，變異系數(shù)＜4.54。該方法能夠同時(shí)檢測出4種防腐劑，相比于其他分離檢測方法，步驟簡單、操作簡便，可以在日常的食品檢測中廣泛使用。

2.1.3 食用色素 食用色素屬于色素的一種，可以改善食物的感官性質(zhì)，使其顏色亮麗、誘人，增加人的食欲。依據(jù)其來源，食用色素可以分為兩種：天然色素和人工色素，食品添加劑中大多使用的是人工合成的食用色素，過量食用人工色素會致癌。檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅和日落黃是常用的人工色素。陳再潔等[13]采用HPLC方法對飲料中的食用色素進(jìn)行檢測，同時(shí)分離出6種食用色素：檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)1和亮藍(lán)2，且檢出限較低，檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度均較高，達(dá)到了日常食品中食用色素的檢測要求。

2.2 HPLC在食品污染物檢測中的應(yīng)用

2.2.1 對食品中農(nóng)藥、獸藥殘留物的檢測 食品中的農(nóng)藥、獸藥殘留物嚴(yán)重影響食品的安全性，殘留量過大會引起癌變。農(nóng)藥易殘留于植物食品中，而獸藥易殘留于動物食品中。要想提高人們的生活質(zhì)量，就必須及時(shí)、精確檢測出食品中的農(nóng)藥、獸藥殘留物，使人們吃到放心食物。無論是農(nóng)藥殘留物，還是獸藥殘留物，都具有不穩(wěn)定、難揮發(fā)的特征，而HPLC能有效定性、定量地分離、分析出這些化合物。目前，全世界應(yīng)用比較廣泛的新型農(nóng)藥是煙堿類殺蟲劑，其中尤以啶蟲脒為代表。尹建吉等[14]建立了HPLC對蔬菜中的農(nóng)藥進(jìn)行檢測的方法，以西紅柿為例，采用乙腈提取、鹽析、氨基小柱（LC-NH2）凈化的樣品處理方法，檢測其中的啶蟲脒含量，結(jié)果證實(shí)這種方法樣品需要量少、回收效率高、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小，且方法簡便，能準(zhǔn)確地實(shí)現(xiàn)蔬菜樣品的檢測，足以滿足常規(guī)農(nóng)藥殘留物檢測的需求。

鄔晨陽等[15]用HPLC對牛奶中的殘留獸藥進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明此HPLC分析方法能同時(shí)測定牛奶中11種獸藥的殘留量，其中包含7種磺胺類藥物和4種氟喹諾酮類藥物，且靈敏度高、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確度高，可滿足動物源性食品中磺胺和氟喹諾酮類藥物的殘留分析，有很好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

2.2.2 對食品微生物及其代謝產(chǎn)物的檢測 食品在生產(chǎn)的過程中難免會產(chǎn)生微生物及其代謝產(chǎn)物，而其中相當(dāng)一部分會損害人體健康，如寄生曲霉新陳代謝過程中產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素能誘發(fā)癌癥等，而以大米、玉米為主原料生產(chǎn)的食品，生產(chǎn)環(huán)節(jié)不當(dāng)?shù)脑?，極易產(chǎn)生黃曲霉毒素，威脅人們的身體健康。HPLC能根據(jù)微生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和代謝產(chǎn)物的不同，檢測食品中微生物的數(shù)量和對人體的危害程度。高志杰[16]采用帶有熒光檢測器的HPLC對食品中容易出現(xiàn)的 4 種黃曲霉毒素 AFB1、AFB2、AFG1、AFG2進(jìn)行定性定量的檢測。結(jié)果表明，4種黃曲霉毒素在0～100 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，樣品檢出限低，能檢測出0.05 μg/kg水平的黃曲霉素。該種檢測方法不僅準(zhǔn)確度高、靈敏性強(qiáng)，而且重復(fù)性好，適用于常規(guī)食品中對4種黃曲霉毒素含量的檢測。

2.3 HPLC在轉(zhuǎn)基因食物檢測中的應(yīng)用

目前，我國食品市場中流通著很多轉(zhuǎn)基因食品，如：轉(zhuǎn)基因大豆、轉(zhuǎn)基因玉米、轉(zhuǎn)基因水稻等，轉(zhuǎn)基因食品已經(jīng)廣泛滲入我們的日常生活中。但是轉(zhuǎn)基因食品并不是絕對安全的，一些學(xué)者認(rèn)為轉(zhuǎn)基因食品能增加人體對抗生素的耐藥性，在人體內(nèi)積累微量毒素可能引起變態(tài)反應(yīng)，并且轉(zhuǎn)基因食品的營養(yǎng)均衡可能被破壞。所以，需要建立一種能夠檢測轉(zhuǎn)基因食品中的潛在危險(xiǎn)的方法。HPLC除應(yīng)用于常規(guī)食物的檢測外，也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因食物檢測中。蔗糖-果糖基轉(zhuǎn)移酶能夠轉(zhuǎn)化甘蔗的果聚糖種類和含量，武媛麗等[17]建立了HPLC測定果糖、葡萄糖、蔗糖及低聚果糖含量的方法，測定轉(zhuǎn)基因甘蔗中的蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖3種低聚果糖來驗(yàn)證轉(zhuǎn)移酶的轉(zhuǎn)化情況。這種方法也可以蔗糖-果糖基轉(zhuǎn)移酶的催化產(chǎn)物蔗果三糖（GF2）較為準(zhǔn)確地檢測甘蔗莖桿節(jié)間其他糖類的組分及含量，可以用于甘蔗中糖類的定性和定量檢測，且該方法操作簡便、成本較低、結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4 HPLC在化學(xué)合成藥物分析檢測中的應(yīng)用

在化學(xué)合成藥物的合成過程中有時(shí)需要對已合成的化合物進(jìn)行分離分析，這時(shí)通常會考慮選用HPLC或者HPLC與其他分析檢測技術(shù)聯(lián)用，既方便、快捷，靈敏度又高，大大提高了藥物合成的速度，并且可以為藥物后期的開發(fā)制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.5 HPLC在藥物代謝動力學(xué)研究中的應(yīng)用

藥物代謝動力學(xué)主要是定量研究藥物在生物體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄規(guī)律，并運(yùn)用數(shù)學(xué)原理和方法闡述血藥濃度隨時(shí)間變化的規(guī)律的一門學(xué)科。在創(chuàng)新藥物研制過程中，藥物代謝動力學(xué)研究與藥效學(xué)研究、毒理學(xué)研究處于同等重要的地位，已成為藥物臨床前研究和臨床研究的重要組成部分。在藥動學(xué)研究中通常要用到HPLC或與其他技術(shù)聯(lián)用對藥物在生物體內(nèi)的吸收、分布、代謝進(jìn)行分析檢測，如HPLC-紫外檢測法測定血漿多潘立酮[18]、HPLC串聯(lián)質(zhì)譜法檢測多潘立酮血漿濃度、HPLC固定化釕（Ⅱ）聯(lián)吡啶-高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光法測定人血清中的雷尼替丁等。

3 HPLC在保健品檢測中的應(yīng)用

常鳳啟等[19]用HPLC測定保健食品中大豆異黃酮指標(biāo)，目前主要采用流動相的甲醇-水梯度洗脫法，對HPLC分離測定的條件進(jìn)行優(yōu)化，樣品的分析與檢測可在短時(shí)間內(nèi)完成。該方法可同時(shí)分析多種大豆異黃酮成分，快捷精準(zhǔn)、靈敏度高，尤其適用于測定保健品中大豆異黃酮成分。

4 結(jié)語

HPLC 以其高精確度、高靈敏度和高回收率、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)獨(dú)領(lǐng)食品檢測技術(shù)的風(fēng)騷，目前，HPLC與其他技術(shù)的聯(lián)用已成為藥品和食品檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢，也使得HPLC在藥品和食品領(lǐng)域的應(yīng)用范圍更加廣闊。

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The application and progress of high performance liquid chromatography in pharmaceutical

ZHANG Ren-fu SONG Xiao-yuanGanzhou Provincial Inspection for Food and Drug Control,Jiangxi Province,Ganzhou 341000,China

High performance liquid chromatography is developed in recent years,besides,high performance liquid chromatography method is recognized as fast and efficient separation and analysis technology.High performance liquid chromatographic method has been used in various fields widely because of its good selectivity,high sensitivity,accurate analysis of trace components,trace analysis of sample characteristics has become the most efficient medicine analysis technology in the field of medicine analysis.With the development of high performance liquid chromatography popularity,chromatography has been updated and improved,chromatograph is moving towards diversification,automation,hyphenated techniques of the direction of development.This article analyzes and sorts the representative articles published in China in recent years.Besides,the application and research progress of high performance liquid chromatography technology in the field of pharmacy,food inspection,and health care products detection has also been studied.

High performance liquid chromatography;Pharmaceutical research;Progress

R91

A

1674-4721（2013）07（c）-0015-03

2013-06-05 本文編輯：郭靜娟）