人參藥性菌質(zhì)對(duì)小鼠Lewis肺癌的作用

朱 凱 賈艾玲 徐 瑤 邱智東 (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

人參藥性菌質(zhì)對(duì)小鼠Lewis肺癌的作用

朱 凱 賈艾玲 徐 瑤 邱智東 (長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117)

目的 觀察人參藥性菌質(zhì)對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用并初步評(píng)價(jià)其一般毒性及對(duì)免疫功能的影響。方法 將Lewis肺癌小鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、順鉑組、參一膠囊組、人參藥性菌質(zhì)低、中、高(2、4、8 g/kg)劑量組，每組12只，另取12只健康小鼠做為空白對(duì)照組，給藥后26 d取小鼠腫瘤、胸腺、脾臟、肝臟等臟器稱重，檢測(cè)脾臟CD4/CD8比值，檢測(cè)脾臟殺傷性T細(xì)胞(CTL)的產(chǎn)生情況。結(jié)果 與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組均可抑制腫瘤LLC成瘤(P＜0.05或P＜0.01);與空白對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各組脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)無(wú)明顯差異;與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組的CD4和CD8細(xì)胞百分比明顯升高(P＜0.05或P＜0.01);與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各組CD4/CD8比值降低(P＜0.05);與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組CTL數(shù)量及IFN-gamma細(xì)胞數(shù)增多(P＜0.05或P＜0.01)。結(jié)論 人參藥性菌質(zhì)在體內(nèi)有抗小鼠LLC成瘤的作用，無(wú)肝臟、胸腺、脾臟毒性;并且能夠調(diào)節(jié)CD4/CD8比值，增加CTL細(xì)胞產(chǎn)生及IFN-γ細(xì)胞數(shù)，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。

人參;藥性菌質(zhì);Lewis肺癌;免疫功能

人參藥性菌質(zhì)是采用“藥用真菌新型固體發(fā)酵工程”〔1，2〕(簡(jiǎn)稱雙向發(fā)酵)的方法和原理，在一定條件下由靈芝菌對(duì)人參進(jìn)行整體固體發(fā)酵獲得的藥性菌質(zhì)，其中富含靈芝多糖及人參稀有皂苷Rh1、Rg3〔3〕。不同于機(jī)械地采用對(duì)單一人參皂苷提取物向某人參稀有皂苷的生物轉(zhuǎn)化方法〔4～6〕，人參藥性菌質(zhì)具有新合成的物質(zhì)、真菌菌絲及中藥中未被發(fā)酵完的藥用成分，他們的復(fù)合作用協(xié)同發(fā)揮藥效常比真菌或藥性基質(zhì)本身或兩者簡(jiǎn)單相加有更良好的藥效。鑒于其中的靈芝多糖、人參稀有皂苷Rh1、Rg3均具有較好的生理活性〔7～9〕，本研究旨在觀察人參藥性菌質(zhì)對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用并初步評(píng)價(jià)藥物的一般毒性及其對(duì)免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 Lewis肺癌細(xì)胞株由廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室提供。健康C57BL/6小鼠，雌雄各半，4～6周齡，體重(20±2)g，購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海分院史萊克動(dòng)物中心。參一膠囊購(gòu)于吉林亞泰制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20030044。順鉑注射液購(gòu)于江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)H20010743。人參藥性菌質(zhì)由實(shí)驗(yàn)室自制。Elispot試劑盒購(gòu)于深圳達(dá)科為公司。CD4抗體、CD8抗體購(gòu)自eBiolegend公司。

1.2 方法

1.2.1 荷瘤動(dòng)物模型的建立 取傳代后14 d的Lewis肺癌瘤源小鼠，脫頸處死，固定于鼠板上，常規(guī)消毒，于超凈工作臺(tái)中，從腋部皮下剝?nèi)∧[瘤組織，剔除纖維包膜和壞死組織，在無(wú)菌平皿中剪碎，置組織研磨器中加4℃生理鹽水輕輕研磨，過濾，制成瘤細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107個(gè)/m l。C57BL/6小鼠右腋部皮下注射0.2 ml瘤細(xì)胞懸液以建立荷Lewis肺癌動(dòng)物模型。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 將造模成功的72只小鼠按體重隨機(jī)分為6組:模型組、陽(yáng)性藥順鉑組、參一膠囊組、人參藥性菌質(zhì)2 g/kg組、人參藥性菌質(zhì)4 g/kg組、人參藥性菌質(zhì)8 g/kg組，每組12只。另取12只健康C57BL/6小鼠做為空白對(duì)照組。接種瘤細(xì)胞次日開始繼續(xù)灌胃給予相應(yīng)藥物，空白對(duì)照組及模型組給予等體積溶媒，陽(yáng)性藥組腹腔注射給藥，1次/d，連續(xù)14 d，每天觀察小鼠飲食及腫瘤生長(zhǎng)情況。

1.2.3 觀察指標(biāo) 末次灌胃給藥后1 h，小鼠稱重，處死，取各組小鼠的腫瘤、肝臟、脾臟、胸腺稱重，計(jì)算各組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)抑制率和臟器指數(shù)。同時(shí)觀察動(dòng)物一般表現(xiàn)、體重變化及用藥后動(dòng)物的胸腺、脾臟及肝臟等臟器系數(shù)的改變。檢測(cè)脾臟的CD4/CD8比值、脾臟殺傷性T細(xì)胞的數(shù)量(CTL)活性。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制率及臟器指數(shù)的比較 與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組均可抑制腫瘤LLC成瘤(P＜0.05或P＜0.01)，人參藥性菌質(zhì)高劑量組效果與順鉑、參一組作用相當(dāng)(P＜0.01);與模型對(duì)照組比較，順鉑組肝臟指數(shù)降低(P＜0.05)，參一、人參藥性菌質(zhì)各組肝臟指數(shù)無(wú)明顯差異。與空白對(duì)照組比較，順鉑、參一、人參藥性菌質(zhì)各組脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)無(wú)明顯差異。見表1，表2。

表1 各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制率的變化(±s，n=12)

表1 各組小鼠腫瘤生長(zhǎng)抑制率的變化(±s，n=12)

與模型對(duì)照組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;下表同

組別 體重(kg)腫瘤重量(kg)腫瘤生長(zhǎng)抑制率(%)17.61±1.05 － －模型對(duì)照組 1.12±0.19 0 －順鉑組 17.3±1.26 0.89±0.112) 20.77參一組 17.66±0.88 0.58±0.072) 47.88人參藥性菌質(zhì)低劑量組 17±0.87 0.52±0.061) 53.52人參藥性菌質(zhì)中劑量組 17.85±1.08 0.7±0.061) 37.73人參藥性菌質(zhì)高劑量組 16.5±1.48 0.36±0.052)空白對(duì)照組68.14

表2 各組小鼠臟器系數(shù)的變化(±s，n=12)

表2 各組小鼠臟器系數(shù)的變化(±s，n=12)

728.03±111.95 63.81±17.369202.73±14.99模型對(duì)照組 765.68±86.72 93.8±14.47 208.13±28.53順鉑組 649.42±59.911)59.78±12.57 179.98±28.69參一組 703.68±47.98 72.1±15.91 207.69±9.25人參藥性菌質(zhì)低劑量組722.94±58.93 70.94±13.32 189.62±20.38人參藥性菌質(zhì)中劑量組710.38±65.87 82.25±11.38 198.98±11.88人參藥性菌質(zhì)高劑量組組別 肝臟指數(shù) 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)空白對(duì)照組687.46±71.55 65.44±11.51 201.74±24.12

2.2 各組小鼠CD4、CD8百分率及CD4/CD8比值的比較 與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組的CD4和CD8細(xì)胞百分比明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，人參藥性菌質(zhì)高劑量組效果與順鉑、參一組作用相當(dāng)(P＜0.01);與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各組 CD4/CD8比值降低(P＜0.05)。見表3。

2.3 各組小鼠脾臟的CTL細(xì)胞殺傷活性及IFN-γ細(xì)胞數(shù)的比較 與模型對(duì)照組比較，人參藥性菌質(zhì)各劑量組CTL細(xì)胞殺傷活性增加及IFN-γ細(xì)胞數(shù)增多(P＜0.05或P＜0.01)，人參藥性菌質(zhì)高劑量組效果與順鉑組作用相當(dāng)(P＜0.01)。見表4。

表3 各組小鼠CD4、CD8細(xì)胞變化(±s，n=12)

組別 CD4 CD8 CD4/CD8 20.53±4.21 13.5±2.02 1.56±0.23模型對(duì)照組 12.12±2.14 6.25±0.73 1.85±0.18順鉑組 21.55±3.572)14.34±2.031)1.61±0.191)參一組 19.83±2.672)11.13±1.912)1.74±0.221)人參藥性菌質(zhì)低劑量組 18.87±3.051)10.58±1.481)1.71±0.201)人參藥性菌質(zhì)中劑量組 17.29±3.111)11.59±1.981)1.49±0.161)人參藥性菌質(zhì)高劑量組 22.12±3.742)14.26±2.162)1.46±0.171)比值空白對(duì)照組

表4 各組小鼠CTL殺傷活性及IFN-γ細(xì)胞數(shù)的變化(±s，n=12)

組別 CTL IFN-γ +1.98±0.00模型對(duì)照組 19.26±262.00 4.23±0.00順鉑組 3128.34±3.46 24.25±0.002)參一組 27.51±3.022) 8.75±0.002)人參藥性菌質(zhì)低劑量組 24.88±2.791) 8.82±0.001)人參藥性菌質(zhì)中劑量組 23.55±2.681) 14.26±0.001)人參藥性菌質(zhì)高劑量組 30.27±3.12 22.31±0.002)細(xì)胞空白對(duì)照組 －

3 討論

本項(xiàng)研究表明:在給小鼠灌胃期間小鼠飲食情況和一般情況良好，無(wú)異常，人參藥性菌質(zhì)對(duì)小鼠重要臟器指數(shù)無(wú)影響，即無(wú)肝臟、胸腺、脾臟毒性。人參藥性菌質(zhì)在體內(nèi)有抗小鼠LLC成瘤的作用，無(wú)肝臟、胸腺、脾臟毒性;并且能夠調(diào)節(jié)CD4/CD8比值，增加CTL細(xì)胞產(chǎn)生及IFN-γ細(xì)胞數(shù)，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。

生物轉(zhuǎn)化和雙向固體發(fā)酵技術(shù)在中藥領(lǐng)域的應(yīng)用是在繼承傳統(tǒng)中藥發(fā)酵法的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)中藥開發(fā)利用的結(jié)果，能夠顯著提升傳統(tǒng)中藥的臨床療效、發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥的臨床新價(jià)值、顯著提高中藥材資源的利用率、批量創(chuàng)新中藥，從而促進(jìn)中藥的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展。

1 莊 毅.藥用真菌新型(雙向型)固體發(fā)酵工程〔J〕.中國(guó)食用菌，2002;21(4):3.

2 莊 毅，池玉梅，陳慎寶，等.藥用真菌新型固體發(fā)酵工程與槐芪菌質(zhì)的研制〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2004;39(3):175.

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Effect of ginseng medicine property fungal substance on Lew is lung cancer m ice

ZHU Kai，JIA Ai-Ling，XU Yao，et al.
Changchun University of Chinese Medicine，Changchun 130117，Jilin，China

Objective To observe the inhibition effect of ginsengmedicine property fungal substance on Lewis lung cancer inmice，evaluate general toxicity and effects on immune function.M ethods The Lewis lung cancermice were random ly divided intomodel，cisplatin，Shenyi capsule，ginsengmedicine property fungal substance low，middle，and high(2，4，8 g/kg)dose groups，another 12 healthy mice were as blank control group.After administration of 26 d，mice tumor，thymus，spleen，liver and other organs were weighed，spleen CD4/CD8 ratio and spleen CTL generation situation were detected.Results Compared with thatofmodelgroup，each dose ginsengmedicine property fungal substance inhibited LLC tumor formation(P＜0.05 or P＜0.01);there were no significant differences in spleen index and thymus index between these groups.Compared with those ofmodel group，the percentage of CD4 and CD8 cellswere significantly increased in ginsengmedicine property fungal substance group，while the ratio of CD4/CD8 was decreased(P＜0.05 or P＜0.01).Compared with those ofmodel group，the numbers of CTL and IFN-gamma cellswere increased in ginsengmedicine property fungal substance group(P＜0.05 or P ＜0.01).Conclusions Ginsengmedicine property fungal substance in vivo has the anti-tumorigenic effect，no toxicity of liver，and has the ability to regulate the CD4/CD8 ratio，increase CTL cells and IFN-gamma cells，enhance immune function.

Medicine property fungal substance;Lewis lung cancer;Immune function

R285.5

A

1005-9202(2013)23-5882-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.23.048

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2012BAI29B00，2012BAI29B05);吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(YYZX201129)

邱智東(1965-)，男，教授，主要從事中藥學(xué)研究。

朱 凱(1980-)，男，理學(xué)碩士，講師，主要從事微生物與生化藥學(xué)研究。

〔2012-06-13收稿 2012-10-10修回〕

(編輯 徐 杰)