陰溝腸桿菌中acc(6’)-Ib-cr基因的分布及其耐藥性研究

王雪春，宋秀蘭，于 琴

(嘉興市第一醫(yī)院，浙江 嘉興314000)

陰溝腸桿菌是臨床上常見條件致病菌，易引起醫(yī)院感染的暴發(fā)和流行[1]。acc(6’)-Ib-cr是導致喹諾酮類耐藥的主要基因，自從2006年首次報道來，已在全球范圍內多個國家和地區(qū)廣泛流行[2-3]。本研究主要采用PCR技術篩查我院陰溝腸桿菌中aac(6’)-Ib基因，了解本院陰溝腸桿菌中aac(6’)-Ib-cr基因的分布及播散情況，以及其與耐藥性的關系。

一、材料與方法

1.菌株來源。收集2010年1-6月本院分離非重復陰溝腸桿菌46株。

2.儀器。Microscan Walkaway-90SI型全自動細菌鑒定儀，PCR儀，電泳儀;凝膠成像系統(tǒng)。

3.試劑與引物。PCR試劑和DNA標志物I購于TaKaRa大連寶生物公司，aac(6’)-Ib基因和整合酶基因擴增引物參照文獻[4]設計，其中 Y=C.T，R=A.G，B=G.T.C，K=G.T，均由上海生工生物技術有限公司合成。產(chǎn)物純化后送上海生工生物技術有限公司測序。

4.細菌鑒定與藥物敏感性試驗。細菌鑒定和藥物敏感性試驗采用Microscan Walk away96SI全自動微生物鑒定儀，抗菌藥敏結果按美國臨床實驗室標準化委員會2009年標準判定。

5.PCR擴增aac(6’)-Ib基因和int基因，參照文獻進行PCR[4]。

二、結 果

1.菌株分布。主要來自ICU病區(qū)12株;呼吸內科8株;泌尿外科9株;骨科8株，消化科和感染科分別為5株和4株。標本中痰液占34.8%(16/46)，尿液占28.3%(13/46)，分泌物占21.7%(10/46)和血液占15.2%(7/46)。

2.aac(6’)-Ib基因檢測 15株 aac(6’)-Ib基因陽性，6株為aac(6’)-Ib-cr，2株為 aac(6’)-Ib變異株，為第 119位氨基酸與第173位氨基酸突變，其余為野生型。

3.Int基因檢測結果15株aac(6’)-Ib基因陽性菌株中有12株int基因陽性，陽性率為80%。其中6株aac(6’)-Ib-cr陽性菌株均攜帶int基因。

三、討 論

aac(6’)-Ib-cr可同時作用于氨基糖苷類和氟喹諾酮類兩類抗菌藥物，是引起細菌耐藥的一種重要作用機制[5]。目前已在大腸埃希菌、克雷伯菌屬、腸桿菌屬的細菌中發(fā)現(xiàn)該基因，但在大腸埃希菌中最常見[6]。本研究aac(6’)-Ib陽性菌株檢出率為32.6%。aac(6’)-Ib-cr陽性6株，2株aac(6’)-Ib變異株，為第119位氨基酸與第173位氨基酸的突變。其余為野生型。aac(6’)-Ib-cr占aac(6’)-Ib的43.6%。aac(6’)-Ib-cr基因可增加染色體選擇性突變的頻率，介導低水平的喹諾酮類抗性，而在環(huán)丙沙星的選擇下可以誘導染色體突變，誘發(fā)細菌產(chǎn)生高水平的耐藥。

雖然aac(6’)-Ib-cr基因僅介導低水平的喹諾酮耐藥，但是由于aac(6’)-Ib-cr基因多位于整合子或是可移動的遺傳元件上，而且整合子還能將其他耐藥基因，如β-內酰胺酶、碳青霉烯酶或質粒型AmpC酶基因整合一起，共同在不同菌株或不同菌株間傳播，使得細菌的耐藥問題變得更加嚴峻。本研究中80%aac(6’)-Ib陽性株整合酶基因陽性，表明兩者存在著一定的相關性，但aac(6’)-Ib-cr基因是否通過整合子在陰溝腸桿菌中傳播有待進一步的研究。

綜上所述，本院陰溝腸桿菌對喹諾酮耐藥的主要機制是通過aac(6’)-Ib-cr所介導，常伴隨攜帶整合酶基因，導致多重耐藥的發(fā)生。臨床醫(yī)生應該對陰溝腸桿菌喹諾酮類耐藥提起重視，減少臨床上氟喹諾酮類抗菌藥物的耐藥，對耐藥菌株感染患者應當采用隔離和環(huán)境嚴格消毒處理，以防止院內感染的爆發(fā)流行，并且減少菌種間的水平傳播。

[1]趙 旭，徐曉剛，朱德妹，等.陰溝腸桿菌臨床分離株中3類質粒介導喹諾酮類藥物耐藥基因的檢測[J].中國感染與化療雜志，2009，9(3):210-215.

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