實(shí)驗(yàn)室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優(yōu)缺點(diǎn)

盧建初

（廣西忻城縣疾病預(yù)防控制中心，廣西 來賓 546200）

實(shí)驗(yàn)室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優(yōu)缺點(diǎn)

盧建初

（廣西忻城縣疾病預(yù)防控制中心，廣西 來賓 546200）

梅毒螺旋體；檢測方法；優(yōu)缺點(diǎn)

梅毒螺旋體（Treponema pallidum，TP）即蒼白密螺旋體的蒼白亞種（Treponema pallidum subspecies pallidum），是引起人類梅毒的病原體。在梅毒診斷中，由于抗體效價(jià)或方法特異性等原因使診斷結(jié)果常出現(xiàn)偏差，因此，高效的梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷已成為大勢所趨。本文對我國實(shí)驗(yàn)室常用梅毒螺旋體檢測方法及其優(yōu)缺點(diǎn)綜述如下。

1 梅毒螺旋體病原體檢測

1.1 暗視野顯微鏡檢查法

是最常用的螺旋體檢查方法，適用于對I期梅毒和II期梅毒早期的檢測。未檢出螺旋體不能排除梅毒的珍斷。陰性結(jié)果可能說明：螺旋體數(shù)量不足，即單次暗視野顯微鏡檢查陽性率＜50%；患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療；損害接近自然消退；損害不是梅毒所致。

1.2 鍍銀顯色法

與暗視野檢查法的臨床意義基本相同。利用梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染成棕黑色，背景呈現(xiàn)黃色的特性進(jìn)行檢測，結(jié)果通過普通高倍顯微鏡觀察。鍍銀顯色法結(jié)果觀察梅毒螺旋體呈棕黑色，而背景呈淡棕色。

1.3 直接免疫熒光法

是目前國外采用較多的方法，其特異性與敏感性均優(yōu)于暗視野顯微鏡檢查法。此法特異性高，也可用于口腔梅毒損害的檢查，但是敏感性較差。

由于梅毒螺旋體病原體檢測受取材及特殊顯微鏡限制，雖然直接涂片鏡檢簡便，但敏感性低而且標(biāo)本要求較高[1]，故臨床應(yīng)用較少。目前國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室診斷梅毒的主要方法為血清學(xué)試驗(yàn)。

2 血清學(xué)試驗(yàn)

梅毒血清學(xué)試驗(yàn)主要包括非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)和梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)。對潛伏梅毒血清學(xué)診斷尤為重要。

2.1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

原理基本相同：是以心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原檢查患者血清中的反應(yīng)素，敏感性相似，對I期、II期梅毒有診斷價(jià)值，滴度隨療效逐漸下降。但敏感性和特異性較差，一般用于初篩試驗(yàn)及療效觀察。目前常用的包括VDRL、RPR、TRUST、USR。

2.1.1 性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）：

硬下疳發(fā)生后1～2周，VDRL試驗(yàn)出現(xiàn)陽性。I期梅毒只有2/3呈現(xiàn)陽性，多數(shù)II期梅毒者的滴度至少為1∶16，VDRL試驗(yàn)假陽性滴度在1∶8以下。由于該試驗(yàn)的試劑需現(xiàn)配現(xiàn)用，故國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是唯一可用于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法。

2.1.2 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）

在特制的紙片上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn)凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。也可將標(biāo)本倍比稀釋（1∶2、1∶4～1∶32）進(jìn)行半定量試驗(yàn)，對療效和判斷是否再感染有一定價(jià)值。該試驗(yàn)結(jié)果容易判斷，肉眼即可觀察，血清不需滅活，也可用于檢測血漿，適于大量篩選試驗(yàn)。RPR一般只作為初篩手段，不能單獨(dú)據(jù)其結(jié)果診斷梅毒感染，而應(yīng)對患者進(jìn)行全面檢查。

2.1.3 甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST）

TRUST試驗(yàn)同樣是檢測梅毒患者血清中存在著的反應(yīng)素，即檢測的是心磷脂抗體[2]。其原理和方法與RPR相同。感染梅毒3-4周，TRUST結(jié)果呈陽性，可幫助臨床醫(yī)生了解患者的病情活動(dòng)程度。但TRUST法只作為一項(xiàng)梅毒感染的篩選試驗(yàn)[3]。

2.1.4 不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）

USR試驗(yàn)是一種改良的VDRL試驗(yàn)方法，血清標(biāo)本不需要加熱滅活，抗原不必每天配制，4-8℃冰箱可保存12個(gè)月，較為簡便。不能作為梅毒的確診檢查。

2.2 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

本試驗(yàn)是以梅毒密螺旋體或非致病的密螺旋體為抗原，檢查患者血清中抗密螺旋體的特異性抗體。其特異性和敏感性均較高，適用于II期、III期、晚期潛伏以及作為梅毒確證試驗(yàn)等?，F(xiàn)常用的有FTAABS、TPHA、ELISA、TPPA、RT、WB和SYP等方法。

2.2.1 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

該試驗(yàn)以完整形態(tài)的Nichol梅毒螺旋體作為抗原，空氣中干燥，丙酮固定，加上經(jīng)吸收劑（用非致病性密螺旋體Reiter株提取制備而成）處理過的患者血清（去除非特異性蛋白，提高特異性），再加入熒光素一異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與血清梅毒螺旋體抗體結(jié)合。是所有螺旋體試驗(yàn)中最敏感的方法，特異性也很高，被認(rèn)為是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但該法不被實(shí)驗(yàn)室作為首選方法。

2.2.2 梅毒螺旋體紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（TPHA）

原理是將梅毒螺旋體Nichols株經(jīng)超聲波碎后，得到可溶性抗原，致敏醛化、鞣化的羊或禽類紅細(xì)胞，可與人血清或血漿中的梅毒螺旋體抗原結(jié)合，產(chǎn)生肉眼可觀察的凝集反應(yīng)。通常作為梅毒螺旋體感染的特異性驗(yàn)證試驗(yàn)，是國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室常用的梅毒螺旋體確證試驗(yàn)。但該法對梅毒治療效果無判定價(jià)值。該法對I期梅毒的檢測陽性率不如FTA-ABS。

2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA試驗(yàn)是隨著近年梅毒螺旋體基因工程的研制成功而發(fā)展起來的一種血清學(xué)檢測方法，結(jié)果陽性說明正在或曾經(jīng)感染過梅毒，而不能判斷梅毒的活動(dòng)情況，故不能用于療效觀察、梅毒復(fù)發(fā)或再感染的診斷[1]。需注意的是ELISA法檢測時(shí)，如果血清中梅毒抗體濃度過高，會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)[4]。

2.2.4 梅毒螺旋體抗體被動(dòng)顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）

TPPA是將純的梅毒螺旋體特異性抗原包被在凝膠顆粒上，當(dāng)抗原和血清中抗體發(fā)生特異性反應(yīng)時(shí)就會(huì)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象，凝集的強(qiáng)度與抗體濃度成正相關(guān)。和ELISA一樣，TPPA檢測的是IgM和IgG抗體，結(jié)果陽性不能用于療效觀察。TPPA是目前公認(rèn)的較常用的梅毒確證實(shí)驗(yàn)[5]。目前國內(nèi)最常用的梅毒血清學(xué)確證試驗(yàn)是 TPPA，但仍然可出現(xiàn)生物學(xué)假陽性[6]。

2.2.5 梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RT）

是采用雙抗原夾心免疫層析法或間接法免疫滲濾法，多采用膠體金進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)檢測IgG、IgM抗體（雙抗原夾心法）或單測IgM抗體（間接法）。其優(yōu)點(diǎn)是簡便、快速，不需要特殊儀器。不足是敏感性和特異性尚有待進(jìn)一步考查，價(jià)格較高。

2.2.6 梅毒螺旋體免疫印記試驗(yàn)（WB）

該法是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種檢測技術(shù)，是通過電泳轉(zhuǎn)移硝酸纖維素膜抗原條帶上含有梅毒螺旋體的各種成分來確認(rèn)是否有梅毒感染。敏感性高，特異性強(qiáng)。結(jié)果容易判斷，操作簡便。但成本太高。

2.2.7 梅毒螺旋體膠體金試驗(yàn)（SYP）

SYP是新近發(fā)展起來的一種快速體外診斷技術(shù)，應(yīng)用現(xiàn)代生物工程技術(shù)制備的高度純化的單克隆梅毒螺旋體的基因工程抗原，能夠高度選擇地找尋與之相結(jié)合的抗體的原理，因此具有快捷、簡便的特點(diǎn)（反應(yīng)5～10min即可出結(jié)果），該法對梅毒初染階段和先天梅毒敏感性較低，但對其它階段患者血清具有很高的敏感性和特異性，從時(shí)間、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確度等方面來說是不錯(cuò)的選擇[7]。

3 分子生物學(xué)技術(shù)（PCR法）

近年來分子生物學(xué)發(fā)展迅速，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床，目前有四套擴(kuò)增梅毒螺旋體DNA系統(tǒng)，擴(kuò)增螺旋體DNA序列，使經(jīng)選擇的螺旋體DNA拷貝數(shù)量增加，以提高診斷率。使用PCR技術(shù)直接檢測標(biāo)本中的梅毒螺旋體的特異DNA片斷，對診斷困難或非典型的梅毒患者進(jìn)行確診有很大的參考價(jià)值[1]。PCR法在I期梅毒的診斷中靈敏性高于血清學(xué)方法，但當(dāng)前診斷梅毒的PCR仍存在引物的非特異性、對血清/全血、CSF等敏感性低等缺點(diǎn)。而且當(dāng)皮損開始愈合、分泌物減少、血清學(xué)試驗(yàn)陽性反應(yīng)時(shí)，采用PCR方法就不合適。另外，PCR方法易受標(biāo)本中的組織和細(xì)胞碎片等物質(zhì)抑制，導(dǎo)致PCR假陰性結(jié)果。

4 存在的問題及研究方向

當(dāng)前我國梅毒血清學(xué)診斷研究中急需解決的問題是：在全國各大小醫(yī)療機(jī)構(gòu)，梅毒的篩查試驗(yàn)和確證試驗(yàn)不能相互替代，使得操作程序變得復(fù)雜。目前，我國實(shí)驗(yàn)室常用的程序是：用酶法初篩，陰性則發(fā)陰性報(bào)告；酶法陽性則進(jìn)一步同時(shí)用RPR/TRUST和TPPA進(jìn)行復(fù)檢，TPPA陰性則發(fā)陰性報(bào)告，TPPA陽性則發(fā)陽性報(bào)告。隨著科技的飛速發(fā)展，對梅毒螺旋體診斷方法的進(jìn)一步研究以及POCT（point of care testing）的推廣，研究人員仍在尋找全面、快速、準(zhǔn)確、敏感而又廉價(jià)的檢測方法。各種方法都有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，檢驗(yàn)人員應(yīng)從具體情況出發(fā)，因地制宜，發(fā)展和完善梅毒診斷方法，指導(dǎo)臨床及時(shí)治療梅毒患者，對控制梅毒的蔓延有重要意義。

[1]黃軍林,黃夏聲,黃育英,等.四種梅毒血清學(xué)檢驗(yàn)方法臨床應(yīng)用評價(jià)[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2012,22(8):1856-1857.

[2]曾 美 文.早 期 梅 毒 患 者 血 清 的 免 疫 學(xué) 變 化 [J].檢 驗(yàn) 醫(yī) 學(xué) 與 臨床,2011,8(1):63-64.

[3]趙華,代渝,雷麗明.4種梅毒血清學(xué)試驗(yàn)檢測方法的比較[J].中國皮膚性病學(xué)雜志.2006,20(4):229-230.

[4]鄧曉琴,楊茂,向艷玲,等.ELISA法梅毒檢測的鉤狀效應(yīng)及其分析[J].中國輸血雜志,2006,19(3):220-221.

[5]祝新,吳志周,柯建良.四種梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測方法的比較[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2008,8(9):934.

[6]陳 紅 霞.瘤患 者與 老 年患 者 的TPPA假 陽 性 分析[J].江西醫(yī)學(xué) 檢驗(yàn),2007,25(3):288.

[7]王華,雷麗明,李代渝.梅毒螺旋體血清學(xué)檢測方法及應(yīng)用[J].實(shí)用診斷與治療雜志,2006,20(9):660-661.

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