雞桿菌感染研究進(jìn)展

皇甫和平，王川慶，楊 霞，趙 軍，李喬晶，鄭鹿平

（1．鄭州牧業(yè)工程高等專(zhuān)科學(xué)校，河南 鄭州450046；2．河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 禽病研究所，河南 鄭州450002）

雞桿菌（Gallibacterium）是由Christensen等［1］于2003年在巴氏桿菌科中重新組合的一個(gè)屬，包括原來(lái)的鴨巴氏桿菌、輸卵管炎放線(xiàn)桿菌和溶血性巴氏桿菌。雞桿菌是健康雞體的1種常在菌，但大量研究表明，其與蛋雞輸卵管炎和輸卵管囊腫等關(guān)系密切，并具有條件致病性［2－4］，人工感染可引起雞的輸卵管炎、腹膜炎和敗血癥等［2，5］。

1 病原學(xué)

1．1 病原特征 雞桿菌為兩端鈍圓、無(wú)芽孢，不運(yùn)動(dòng)的革蘭陰性小球桿菌。鏡下單個(gè)存在或成對(duì)分布，瑞氏和美藍(lán)染色呈兩極濃染，新鮮分離株能看到明顯或微弱的莢膜［1］。

根據(jù)Bisgaard等［6］在2009年的報(bào)道，雞桿菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格，在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良；伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、西蒙氏枸椽酸鹽培養(yǎng)基和含有KCN的培養(yǎng)基上均不生長(zhǎng)，不同種的雞桿菌在麥康凱培養(yǎng)基生長(zhǎng)情況不一，部分菌株生長(zhǎng)，部分菌株不生長(zhǎng)。在含5%～10%綿羊血瓊脂平板上，37℃需氧條件下培養(yǎng)18～24h后，形成圓形、灰白色、半透明、有光澤、邊緣整齊、直徑1～2mm的小菌落，呈β－溶血或不溶血。

1．2 分子分型 2009年，Bisgaard等［6］將雞桿菌屬的菌種進(jìn)行細(xì)化，確定該屬包括4個(gè)已命名的種：鴨源雞桿菌（Gallibacteriumanatis）、輸卵管炎雞桿菌（Gallibacteriumsalpingitidis）、虎皮鸚鵡雞桿菌（Gallibacteriummelopsittaci）和海藻糖發(fā)酵雞桿菌（Gallibacteriumtrehalosifermentans）4個(gè)種，以及3個(gè)復(fù)合群（Gallibacteriumgenomosp1，2and 3）。雞桿菌屬的代表種是鴨源雞桿菌，該菌有溶血型和非溶血型2個(gè)表型。

1．3 血清學(xué)分類(lèi) 目前雞桿菌有24個(gè)血清型，其中Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型具有致病性［7］。不同血清型之間沒(méi)有交叉免疫保護(hù)作用［1］，隨著研究的深入，雞桿菌的血清型將還會(huì)增加。

1．4 致病因子

1．4．1 金屬蛋白酶 Garcia－Gomez E等［8］利用甲醇沉淀的方法得到了2株鴨源雞桿菌的金屬蛋白酶，發(fā)現(xiàn)此酶能夠降低雞體內(nèi)IgG，破壞機(jī)體的免疫系統(tǒng)，在鴨源雞桿菌引起的感染中起作用。但金屬蛋白酶降低IgG在致病機(jī)理中的作用仍有待深入研究。

1．4．2 GtxA毒素 GtxA毒素屬于RTX毒素，2010年Kristensen首次發(fā)現(xiàn)了GtxA毒素基因，該基因編碼含2 026個(gè)氨基酸的RTX毒素。GtxA毒素具有毒害白細(xì)胞活性和溶血活性。GtxA毒素N＇結(jié)構(gòu)域?qū)υ摱舅爻浞职l(fā)揮其溶血活性是必須的，對(duì)發(fā)揮該毒素的白細(xì)胞毒性起關(guān)鍵作用［9］。

1．4．3 耐藥基因 2008年，郭倫濤［10］的研究發(fā)現(xiàn)，雞桿菌質(zhì)粒上攜帶有鏈霉素耐藥基因StrA、StrB、aadA和磺胺類(lèi)藥物的耐藥基因SulⅠ和SulⅡ；同時(shí)發(fā)現(xiàn)該菌的促旋酶A基因和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ基因的喹諾酮耐藥區(qū)發(fā)生突變，導(dǎo)致了對(duì)氟喹喏酮類(lèi)藥物的耐藥性。

2011年，Bojesen等［11］在雞桿菌鑒定了四環(huán)素抗性決定簇tet（B）、tet（H）和tet（L），其中tet（B）是最為普遍的一個(gè)決定簇。同年，Bojesen等［12］又報(bào)道四環(huán)素抗性決定簇tet（31）在鴨源雞桿菌中普遍存在，這是該基因在鮭產(chǎn)氣單胞菌中鑒定后的首次報(bào)道，推測(cè)可能具有相同的起源。

1．4．4 附著生物膜 2011年，Vaca等［13］對(duì)2株鴨源雞桿菌和1株雞桿菌復(fù)合群1菌株的黏附能力進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)3株細(xì)菌在聚苯乙烯和玻璃表面形成了結(jié)實(shí)的生物膜，并黏附在上面，此種黏附方式可能對(duì)雞桿菌在組織表面的吸附，及在宿主體內(nèi)的感染有重要作用，然而此種生物膜的具體成分及黏附作用的具體機(jī)制仍需深入研究。

2 流行病學(xué)

雞桿菌感染譜廣泛，包括雞、鴨、鵝、火雞、野雞、白鷺、鷓鴣、鸚鵡、鴿子、斑鳩和牛等。雞是最常見(jiàn)的宿主，且不同品種、日齡的雞均可感染，肉用雞和蛋用雞在對(duì)雞桿菌的易感性上沒(méi)有差別，發(fā)病最明顯的是當(dāng)年孵育的高產(chǎn)母雞［14］。

傳播途徑：雞桿菌主要經(jīng)水平方式傳播，已確定可經(jīng)呼吸道傳播［15］。同居感染試驗(yàn)表明，雞桿菌傳播很快，2d即可在雞的上腭裂和泄殖腔中分離出雞桿菌。盡管報(bào)道顯示雞桿菌能以一定的低水平經(jīng)卵傳播至蛋中，但目前的研究均未發(fā)現(xiàn)該菌可垂直傳播［3，5］。

感染特點(diǎn)：沒(méi)有明顯的季節(jié)性，常和大腸桿菌、傳染性支氣管炎病毒、支原體等混合感染，并且雞桿菌可能會(huì)誘發(fā)或加劇其他病原的感染。雞桿菌在中、低水平生物安全狀態(tài)雞群中的感染率遠(yuǎn)高于高水平生物安全雞群，寒冷、悶熱、氣候劇變等誘因可促進(jìn)雞桿菌的感染，在免疫抑制的狀況下，可造成與臨床自然感染類(lèi)似的腹腔炎癥［2－3］。

少數(shù)學(xué)者對(duì)中國(guó)部分地區(qū)分離的雞桿菌進(jìn)行了種類(lèi)及血清型調(diào)查研究。張金來(lái)等［16］利用rpoB、infB和atpD基因序列分析的方法證實(shí)11株河南分離株均屬于鴨源雞桿菌。

王川慶等［4］的研究表明，河南12個(gè)雞場(chǎng)全部感染雞桿菌血清Ⅱ型和Ⅳ型，其中7個(gè)場(chǎng)又同時(shí)感染血清Ⅰ型。王珊等［17］對(duì)河南、山東和山西3個(gè)省86家臨床健康蛋雞場(chǎng)的1 314份血清樣品進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示，血清Ⅰ型感染率為11．95%，Ⅱ型感染率為23．29%，Ⅳ型感染率為9．82%。

3 癥狀和病理變化

3．1 癥狀 雞性成熟前感染，沒(méi)有明顯的臨床癥狀，性成熟后感染，病雞表現(xiàn)精神委頓，雞冠蒼白，產(chǎn)蛋量逐漸下降，部分雞產(chǎn)蛋停止，腹部膨大，行走似企鵝狀，病程在1個(gè)月以上，最后逐漸衰竭死亡。人工感染雞桿菌能使蛋雞開(kāi)產(chǎn)日齡推遲，產(chǎn)蛋量下降，劣質(zhì)蛋增加。大腸桿菌和雞桿菌混合人工感染SPF雞，引起更大幅度的產(chǎn)蛋量下降和更多的劣質(zhì)蛋［4－5］。

3．2 病理變化 病雞可見(jiàn)輸卵管不同程度的炎癥、腹膜炎、卵巢炎以及敗血癥等。雞桿菌人工感染SPF雞可觀(guān)察到輸卵管炎，輸卵管充血，組織學(xué)檢查可見(jiàn)輸卵管膨大部和子宮黏膜上皮細(xì)胞增生，纖毛脫落及炎性滲出，腺體上皮細(xì)胞變性、胞核呈多形態(tài)等；大腸桿菌和雞桿菌混合感染開(kāi)產(chǎn)前SPF雞，組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)出血、淤血，大量嗜異性白細(xì)胞浸潤(rùn)等，開(kāi)產(chǎn)后SPF雞感染兩種病原后出現(xiàn)急性死亡，剖檢可見(jiàn)心包炎、肝周炎及腹膜炎癥狀［4－5］。

4 雞桿菌的分子診斷

4．1 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR） Bojesen等［18］設(shè)計(jì)了一對(duì)分別定位于16SrRNA和23SrRNA基因上的雞桿菌屬特異性PCR引物，該方法能擴(kuò)增出1個(gè)或2個(gè)片段（790bp和1 030或1 080bp）。該方法克服了傳統(tǒng)雞桿菌鑒定方法存在的主要缺點(diǎn)，極大方便了該菌的鑒定。

4．2 擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（AFLP） Bojesen等［7］報(bào)道，AFLP技術(shù)在114株雞桿菌基因分型中的應(yīng)用。結(jié)果顯示，蛋雞親本群的分離株被分為2個(gè)亞群，每個(gè)亞群的相似性都在90%以上，其中1個(gè)亞群均分離于呼吸道，另1亞群則主要分離于泄殖腔。從而證明不同器官分離的雞桿菌菌株譜系上的差異性。該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于雞桿菌菌株譜系的鑒別。

4．3 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD） 陳陸等［19］應(yīng)用8條隨機(jī)引物對(duì)9株雞桿菌中國(guó)分離株和3個(gè)參考菌株（1株巴氏桿菌、1株大腸桿菌和1株鏈球菌）進(jìn)行了RAPD分型研究。結(jié)果顯示，12株細(xì)菌共分為4個(gè)聚類(lèi)群，其中9株雞桿菌中國(guó)分離株位于同一聚類(lèi)群中，且又可分為4個(gè)聚類(lèi)亞群；3個(gè)參考菌株各自形成1個(gè)獨(dú)立的聚類(lèi)群。不同血清型的雞桿菌菌株具有相似的指紋圖，同1血清型的菌株指紋圖存在差異。

4．4 熒光原位雜交（FISH） 2003年，Bojesen等［20］設(shè)計(jì)了1條定位于雞桿菌16SrRNA基因的核酸探針，試驗(yàn)結(jié)果表明，該探針能特異性的檢測(cè)雞桿菌，2004年，其又報(bào)道了該方法在雞桿菌人工感染試驗(yàn)中的應(yīng)用，結(jié)果表明，免疫抑制雞在腹腔接種后12h即可在肝臟漿膜表面和被膜下，靜脈接種12 h后在脾臟中檢測(cè)到雞桿菌聚集現(xiàn)象［2］。

5 雞桿菌感染的防制

雞桿菌主要經(jīng)水平傳播，所以首先要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少各種應(yīng)激因素；其次做好環(huán)境衛(wèi)生，嚴(yán)格消毒，消滅環(huán)境中病原微生物，切斷水平傳播途徑。鑒于雞桿菌分離株廣泛的耐藥性，生產(chǎn)中應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果，合理使用抗菌藥物進(jìn)行預(yù)防和治療。雞桿菌有3種致病性血清型，且無(wú)交叉免疫保護(hù)作用，所以應(yīng)根據(jù)本地區(qū)流行種類(lèi)選用合適血清型疫苗進(jìn)行預(yù)防或選用包含3種血清型的多價(jià)疫苗進(jìn)行預(yù)防。

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