奶牛性控凍精低劑量人工授精技術規(guī)范

田萬強，田成山，林 清，胡建宏，昝林森＊

1 范圍

本標準規(guī)定了奶牛性控凍精低劑量深部人工授精技術規(guī)范涉及的術語（定義）、繁殖技術指標、發(fā)情鑒定、人工授精、妊娠檢查、系譜檔案管理等要求。

本標準適用于奶牛養(yǎng)殖場（戶）、配種站（點）性控冷凍精液人工授精操作。

2 說明

1）本規(guī)范是在常規(guī)凍精人工授精技術規(guī)程的基礎上制定而成。

2）本規(guī)范是對大慶田豐生物科技有限公司生產的奶牛性控凍精采用人工授精技術輸入奶牛卵泡發(fā)育側子宮角深部、子宮體分叉部、子宮頸內口前端不同部位受胎效果分析驗證后形成的技術規(guī)范。

3）本規(guī)范旨在為了提高奶牛性控凍精受胎率而對人工授精操作人員制定的規(guī)范性文件。

3 術語和定義

3.1 性控冷凍精液

利用流式細胞分離儀獲取X或Y精子經(jīng)過超低溫冷凍后保存在液氮（－196℃）中授精能按照人們需要控制性別的非常規(guī)冷凍精液。

3.2 性控凍精特征

1）性控凍精活力高于常規(guī)冷凍精液。

2）性控凍精細管分裝精子的密度240萬個／支，常規(guī)凍精細管分裝精子密度2 500萬個／支，性控凍精密度顯著低于非性控凍精。

3）奶牛含X染色體性控冷凍精液的存活時間相對于常規(guī)冷凍精液要短。

4）生產成本較高，價格比較昂貴。

3.3 性控冷凍精液解凍

性控冷凍精液使用前通過一定手段使冷凍精子重新恢復活力的處理方法。

3.4 性控冷凍精液低劑量深部人工授精

性控凍精細管分裝精子的密度顯著低于非性控凍精（性控：230萬個／0.25mL，非性控：2 500萬個／0.25mL），使得有效精子數(shù)量偏少，分離時在外界暴露時間較長，含X染色體性控冷凍精液的存活時間相對于常規(guī)冷凍精液要短，為了減少宮頸黏液吸附精子數(shù)，保證足夠的精子達到輸卵管壺腹部以利于卵子受精，要求在優(yōu)勢卵泡側子宮角基部輸精受胎率較高，此種授精方法稱為低劑量深部授精。

3.5 發(fā)情鑒定

通過外觀觀察結合直腸把握檢查法確定授配母牛是否發(fā)情及其發(fā)情程度的檢查方法。

3.6 情期受胎率

同期受胎母牛數(shù)占同期輸精情期數(shù)的百分比。

4 基本要求

4.1 人員要求

1）人工授精人員必須具有家畜繁殖基礎理論知識，熟練掌握細管凍精人工授精的各個主要技術環(huán)節(jié)。

2）配種員應注意個人衛(wèi)生，輸精之前要剪短指甲并磨光，頭戴衛(wèi)生帽，身穿專用服裝，腳著消毒膠靴，手套專用軟質塑料或膠質手套。

3）對使用的輸精器具應及時清洗、消毒，并保存在干凈的密封容器內，以免污染。

4）配種員在輸精操作時應注意安全，以防止發(fā)情母牛對人員的突然傷害。

4.2 授配母牛要求

1）品種：中、高產奶牛及其后代。

2）年齡和胎次：初配母牛和三胎內母牛。

3）體狀：膘情適中，健康無傳染性疾病和繁殖疾病，繁殖機能正常。

4）牛體衛(wèi)生：用新潔爾滅液消毒牛外陰部，然后用涼開水清洗牛外陰部，用衛(wèi)生紙擦干消毒液，牛體干凈。

4.3 輸精器械要求

4.3.1 輸精器械設備 輸精槍、外套、一次性塑膜手套、液氮罐、冰箱、干燥箱、消毒鍋、酒精燈、電爐、普通顯微鏡、專用剪刀、保溫瓶、25cm鑷子、拷瓷盆、子宮洗滌器、試管、滴管、燒杯、天平、洗滌器、污物桶、玻璃瓶、玻璃棒、藥品柜、檔案柜。

4.3.2 輸精輔助材料 消毒用酒精、消毒液、藥品、注射器、溫度計；紗布、藥棉、濾紙、毛巾、肥皂、衛(wèi)生紙、載玻片、蓋玻片、瓶刷。

4.4 輸精器械設備材料清洗消毒

4.4.1 玻璃器皿 使用前用水浸泡和洗滌，若有污物用加洗滌劑的溫水或重鉻酸鉀洗液浸泡數(shù)小時后，用水洗凈晾干，放置在電熱鼓風干燥箱160℃烘烤1h，冷卻備用。

4.4.2 金屬器械 金屬器械洗凈后，放置于電熱鼓風干燥箱120℃烘烤1h，自然冷卻待用。

4.4.3 橡膠、塑料制品 輸精用的橡膠、塑料品高壓蒸汽消毒滅菌，或用濃度為75%的酒精消毒。

5 輸精

5.1 觀察發(fā)情

1）每天早晚對牛群進行至少半小時的觀察，記錄接受爬跨的牛號。

2）對觀察發(fā)情的牛只查閱繁殖記錄，剔除產后時間不合適、正在進行繁殖疾病治療和其它不適合進行配種的牛只。

3）對適合冷配的空懷牛只，在10～12h后進行直腸檢查，首先判斷子宮的大小和質地，然后檢查兩側卵巢是否正常，是否有排卵卵泡，如果有排卵卵泡，根據(jù)卵泡的大小和質地推測排卵時間，判斷在8 h之內排卵并適合進行冷配的牛只立即用性控凍精配種，并做好包括子宮、卵巢情況和發(fā)情時間及輸精時間和部位等內容的詳細記錄。

5.2 輸精操作要點

5.2.1 輸精時間 使用性控凍精配種時，配種時間控制在排卵前6h之內或排卵后4h之內；使用性控凍精時，盡量縮短解凍與輸精之間的時間，最好是解凍一支輸一支。

5.2.2 解凍方法 從液氮罐中取凍精時，提漏中的凍精不可超過液氮罐口，如果10s內還沒有將凍精取出，應將凍精立刻沉入液氮中然后再提到罐口重復操作；單支凍精取出后在空氣中先停留5s左右，然后放入38～40℃清水中10s中后取出用干脫脂棉擦干后剪斷封口，裝入輸精器準備輸精。

5.2.3 輸精部位 輸精部位選擇在排卵側子宮角基部（上1／3處）或者是采用子宮體后拉法，也就是說，如果能夠準確判斷出排卵側并能使輸精器順利的放到排卵側子宮角基部就采用子宮角深部輸精，否則，采用子宮體輸精器后拉發(fā)法輸精，保證兩側子宮角都能有精子進入和受精。

5.2.4 輸精量 每個情期輸入一支性控凍精（0.25 mL／支，有效精子數(shù)200萬個以上）。

6 跟蹤觀察

1）對于已經(jīng)參加配種的牛只，在8h之內進行第二次直腸檢查卵泡側；如果已經(jīng)確認排卵，做好配種記錄；沒有排卵的參配牛只采取補救措施。

2）配種后在下個情期繼續(xù)觀察是否有發(fā)情表現(xiàn)，如果受配母牛連續(xù)兩個情期以上沒有發(fā)情，在配種60d后，直腸檢查確定是否妊娠；對于沒有妊娠的母牛采取補救措施。

7 補救

1）在冷配8h之內進行第二次直腸檢查卵泡側，對于沒有排卵的參配牛只，在推斷了排卵時間后要繼續(xù)適時輸精，并根據(jù)具體情況結合外源激素的使用。

2）參配母牛在配種后的第一或第二情期觀察到了明顯的發(fā)情表現(xiàn)，在確認發(fā)情后要及時進行重復冷配，冷配時如果發(fā)現(xiàn)發(fā)情黏液不干凈或其它繁殖疾病，要停止冷配并采取相應的治療措施；如果對排卵時間把握不準確，就采用常規(guī)凍精進行復配。

8 配種記錄

1）每次輸精完畢，繁育員及時填寫配種記錄。

2）記錄內容包括母牛號、年齡、體況、胎次、發(fā)情時間、產犢間隔、與配公牛號、輸精時間、繁育員等。