實(shí)驗(yàn)動(dòng)物眼底血管熒光造影的研究進(jìn)展

陳俊宏 李強(qiáng) 段俊國(guó)

眼底血管熒光造影(fundus fluorescein angiography,FFA)是一項(xiàng)最常用的眼底病變?cè)\斷技術(shù),已成熟地在臨床上應(yīng)用。一般選擇前臂正中靜脈快速注射熒光素鈉,注射后10～15s,開始每秒攝一張照片,直到循環(huán)結(jié)束[1]。其不但直觀地、動(dòng)態(tài)地觀察眼底血管形態(tài)和病灶部位,而且可以記錄檢眼鏡看不到的色素上皮和視網(wǎng)膜的循環(huán)的細(xì)節(jié),對(duì)各種眼底疾病的診斷、鑒別診斷、臨床治療及預(yù)后都具有重要意義。在實(shí)驗(yàn)研究中,大部分眼底病動(dòng)物模型的建立和藥物治療的作用效果都需要通過FFA評(píng)估。理想的FFA方法應(yīng)具有操作簡(jiǎn)便、成功率高、各循環(huán)時(shí)間準(zhǔn)確和熒光顯影強(qiáng)等特點(diǎn),但由于動(dòng)物生理結(jié)構(gòu)特點(diǎn),不同方法的FFA各存難點(diǎn)。根據(jù)給藥途徑,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物FFA方法可分為:經(jīng)尾靜脈注射、腹腔注射、球后注射和口服給藥行眼底血管熒光造影。

1 經(jīng)尾靜脈注射熒光素鈉

尾靜脈注射和人的肘正中靜脈一樣,直接進(jìn)入體循環(huán),可以迅速獲得高濃度血中熒光素鈉,故顯影最強(qiáng)。缺點(diǎn)有:直接進(jìn)入體循環(huán)易引起過敏;注射量過大易引起充血性心衰[2];尾靜脈較細(xì),對(duì)注射技術(shù)要求高,注射成功率偏低,反復(fù)注射易影響尾靜脈-眼循環(huán)時(shí)間的統(tǒng)計(jì)。熟練的操作、使用較細(xì)的針頭以及用溫水浸泡尾部以擴(kuò)張血管可以提高注射的成功率。張遷等在實(shí)驗(yàn)中給健康SD大鼠尾靜脈注射100g/L熒光素鈉注射液0.5ml/kg,經(jīng)共焦激光眼底血管造影儀觀察,最小可以看到4級(jí)血管(自視盤分枝算1級(jí)血管),并根據(jù)眼底血管的充盈和顯像情況將循環(huán)分為早期相(注射后1～3s,可見1級(jí)血管),中期相(3s～5min,可見小血管,最小到4級(jí)血管),后期相(熒光素鈉注入5min以后,視網(wǎng)膜血管顯像和逐漸變亮的背景)[3]。趙英杰等報(bào)道,Wistar大鼠尾靜脈注射最適劑量為40mg/kg(10%立攝得),尾-視網(wǎng)膜循環(huán)時(shí)間為6.6±3.0s,靜脈層流時(shí)間為7.6±3.0s,視網(wǎng)膜靜脈充盈時(shí)間為9.3±3.5s,視網(wǎng)膜循環(huán)時(shí)間為2.1±0.58s,熒光消退時(shí)間為18.1±5.1min[4]。

2 經(jīng)腹腔注射熒光素鈉

熒光造影劑注射后,經(jīng)腹膜吸收進(jìn)入體循環(huán)后到達(dá)眼球。腹膜吸收較緩慢,在短時(shí)間內(nèi)視網(wǎng)膜熒光素鈉濃度較低,故造影顯影強(qiáng)度較弱,但持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)。優(yōu)勢(shì)在于其操作簡(jiǎn)便,成功率極高,易于各組間循環(huán)時(shí)間的對(duì)比。趙英杰等發(fā)現(xiàn),Wistar大鼠腹腔注射最適劑量為120mg/kg(10%立攝得),動(dòng)靜脈開始充盈時(shí)間為40.9±4.80s。熒光消退時(shí)間為20.4±2.70min[4]。李明銘等試驗(yàn)中,給氬激光誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜新生血管模型C57BL/6J小鼠腹腔注射1%熒光素鈉0.3 mL后,觀察激光滲漏以間接觀測(cè)新生血管[5]。李岱等向半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)的BN大鼠按0.5ml/kg向腹腔注射的10%熒光素鈉以觀察新生血管,視網(wǎng)膜顯影至注射后的30min[6]。

3 經(jīng)左心室內(nèi)注射異硫氛酸葡聚糖熒光素鈉

異硫氛酸葡聚糖熒光素鈉是一種較高相對(duì)分子質(zhì)量的熒光,不能穿過血管壁,到達(dá)視網(wǎng)膜血管后停留在血管壁上。此法重復(fù)性好,血管顯影清晰、完全[7]。缺點(diǎn)是操作相對(duì)其他方法復(fù)雜,且必須處死動(dòng)物,不能連續(xù)性觀察不同時(shí)期同一個(gè)動(dòng)物的眼底病變過程。此法將大鼠麻醉后,把異硫氛酸葡聚糖熒光素50 mg,溶于1ml的4% 多聚甲醛,直接左心室灌注,灌注后立即摘除眼球,放入4 % 多聚甲醛固定5 h,游離出視網(wǎng)膜,以視乳頭為中心放射狀切片、 鋪片,滴少量甘油明膠,加蓋玻片,熒光顯微鏡觀察,并用數(shù)碼照相機(jī)拍片,可以清楚觀察到從中央部延續(xù)到周邊部的整個(gè)視網(wǎng)膜血管形態(tài)、走行[8]。

4 經(jīng)球后注射熒光素鈉

球后注射后,熒光素鈉由鞏膜、脈絡(luò)膜逐層向內(nèi)彌散的過程中,在背景發(fā)亮的熒光襯托下可以顯現(xiàn)視網(wǎng)膜脈、絡(luò)膜及血管清晰輪廓,是一種“光化學(xué)鞏膜透照法”。張四力等報(bào)告,家兔球后注射后30秒～30分鐘立即可見到背景亮度增強(qiáng),隨即出現(xiàn)地圖狀強(qiáng)螢光襯托出脈絡(luò)膜血管的陰影,到10分鐘時(shí),出現(xiàn)全亮背景。晚期出現(xiàn)全亮背景及視乳頭著色,基本同于靜脈法的晚期影象[9]。主要是脈絡(luò)膜及脈絡(luò)膜血管顯影,可以作為脈絡(luò)膜占位性病變和脈絡(luò)膜血管病變的輔助診斷方法。此法成功率高,操作簡(jiǎn)便。但近年使用較少,主要由于視網(wǎng)膜血管顯影不明顯。

5 口服熒光素鈉

口服熒光素鈉后,通過胃黏膜吸收進(jìn)血液入體循環(huán)后到達(dá)眼球。此法在1979年Kelley等首先報(bào)道后,已應(yīng)用于臨床。主要應(yīng)用于一些有過敏史者、小兒老人血管不易尋找者或其他病史不能行靜脈給藥的患者。優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便、易行,適用于普查,幾乎不發(fā)生過敏反應(yīng)。缺點(diǎn)是由于胃一視網(wǎng)膜時(shí)間受多種因素影響[10],故視網(wǎng)膜出現(xiàn)熒光時(shí)間不具參考性;視網(wǎng)膜熒光沒有靜脈注射法顯影強(qiáng)。Kelley明確指出人口服法滲漏從15 分鐘開始顯現(xiàn),到1小時(shí)明顯,到1小時(shí)的影象相當(dāng)于靜脈法7 分鐘左右的影象[11]。此法應(yīng)用于動(dòng)物較少。張四力等給家兔應(yīng)用此法,視網(wǎng)膜,脈絡(luò)膜始終未見到明顯的血管顯影,但背景的亮度是逐浙增強(qiáng)的[9]。

6 小結(jié)

可行性、準(zhǔn)確性、可重復(fù)性是科學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本要素。如何確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物FFA的可行性、準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,是實(shí)驗(yàn)最值得探討的難題。以上FFA方法各有優(yōu)劣,應(yīng)該根據(jù)動(dòng)物種類、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、病變部位等差異選擇最合適的造影方法,不應(yīng)該盲目地應(yīng)用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。比如大鼠由于血管較大,浸泡后能充分暴露,可以選擇尾靜脈注射法,小鼠選擇尾靜脈注射難度較大,更適合用腹腔注射法;如果我們要求對(duì)比不同組別動(dòng)物的前期、動(dòng)脈期、靜脈期和晚期的差異,尾靜脈注射法難以把握注射的準(zhǔn)確性,影響各循環(huán)時(shí)間的計(jì)算,更適合用腹腔注射法以減少人為操作對(duì)各期時(shí)間的影響;病變?cè)谝暰W(wǎng)膜及其血管,靜脈注射法顯影最強(qiáng),腹腔注射次之;病變?cè)诿}絡(luò)膜,適合用球后注射和口服法;到實(shí)驗(yàn)的終末期,可以處死動(dòng)物,經(jīng)左心室內(nèi)注射異硫氛酸葡聚糖熒光素行視網(wǎng)膜血管造影法將獲得更直觀、血管顯影清晰、全視網(wǎng)膜造影范圍的圖片。

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