狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測臨床意義

馬紀(jì)林 蔡 龍 施華萍 周紅娟 張風(fēng)衛(wèi) 于健寧 陶筱娟

杭州市紅十字會醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 杭州 310003

狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測臨床意義

馬紀(jì)林 蔡 龍 施華萍 周紅娟 張風(fēng)衛(wèi) 于健寧 陶筱娟

杭州市紅十字會醫(yī)院風(fēng)濕免疫科 杭州 310003

目的：檢測狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，探討其臨床意義。方法：采用流式細(xì)胞儀檢測35例狼瘡性腎炎患者及11名健康對照者的外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，并分析其與腎臟病理類型和疾病活動的相關(guān)性。結(jié)果：狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例與健康對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），并與疾病活動性無相關(guān)性。但I(xiàn)II型和IV型狼瘡性腎炎患者，CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例較II型和V型患者明顯降低（P＜0.05）。結(jié)論：檢測外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例可以輔助判斷狼瘡性腎炎的病理類型，并可為治療狼瘡性腎炎提供理論依據(jù)。

狼瘡性腎炎 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 腎臟病理

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus, SLE）是一種累及多個器官的自身免疫病，其中腎臟是最常受累和決定預(yù)后的器官。狼瘡性腎炎的臨床和病理表現(xiàn)多種多樣，但具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulaory T cells,Treg）是一群能“主動”抑制免疫反應(yīng)的CD4+T細(xì)胞亞群[1]。筆者前期研究中[2]發(fā)現(xiàn)活動性SLE患者存在Treg與自身反應(yīng)性T細(xì)胞間的失衡，但Treg在狼瘡性腎炎中的作用尚不清楚。本研究通過檢測不同病理類型的狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例，探討Treg在狼瘡性腎炎中的作用。

1 臨床資料

選取2008年9月—2012年6月我科住院診斷為狼瘡性腎炎患者35例，其中女32例，男3例，年齡18～40歲；采用SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）評價疾病活動程度。所有患者均行腎活檢明確腎臟病理類型，按ISN/RPS狼瘡性腎炎的病理分類方法進(jìn)行分型，其中II型8例，III型5例，IV型15例和V型7例。選擇健康對照組11名，其中女9名，男2名，年齡20～38歲，兩組年齡和性別具有可比性（P＞0.05）。

2 方 法

2.1 CD4+CD25highT細(xì)胞的檢測 取肝素抗凝全血3mL，分別加入20μL的藻紅素標(biāo)記的鼠抗人CD4單抗（美國BD公司）和異硫氰酸熒光素標(biāo)記的鼠抗人CD25單抗（美國BD公司），并設(shè)立同型對照管?；靹蚝蟊芄?5min，再加入1mL細(xì)胞裂解液，37℃孵育10min，離心棄去上清，PBS洗滌3次，上Epics XLMCL型流式細(xì)胞分析儀（Beckman-Coulter公司），按常規(guī)操作進(jìn)行，根據(jù)向散射光和側(cè)向散射光以淋巴細(xì)胞群設(shè)門，EXPO32軟件分析結(jié)果，其中CD4+CD25highT細(xì)胞的比例定義為2倍于CD4+CD25+T細(xì)胞的平均熒光強(qiáng)度的細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例。

2.2 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SigmaStat3.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析處理。數(shù)據(jù)采用（）表示，多組間比較采用單因素方差分析（AVONA），兩組間比較采用t檢驗，變量間的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 狼瘡性腎炎患者外周血Treg比例 狼瘡性腎炎患者和健康對照組外周血CD4+CD25highTreg細(xì)胞的比例分別為(1.31±0.25)%、(1.43±0.24)%，兩組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），III型和IV型狼瘡性腎炎患者的CD4+CD25highTreg細(xì)胞明顯低于II型和V型患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各病理類型狼瘡性腎炎患者CD4+CD25highT細(xì)胞比例（）

注：與II型和V型比較，△P＜0.05

組別狼瘡性腎炎組II型III型IV型V型健康對照組n/例35 851 571 1 CD4+CD25high/% 1.31±0.25 1.49±0.12 1.03±0.30△1.21±0.17△1.53±0.10 1.43±0.24

3.2 狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25highTreg細(xì)胞比例及與疾病的相關(guān)性 本組狼瘡性腎炎患者中，SLEDAI分值區(qū)間為2～16，通過Pearson相關(guān)性分析，未發(fā)現(xiàn)CD4+CD25highTreg細(xì)胞與SLEDAI有相關(guān)性（P＞0.05）。

4 討論

SLE是一種常見的多系統(tǒng)病變的自身免疫病，其發(fā)病機(jī)制主要是機(jī)體免疫耐受的失衡，產(chǎn)生大量的自身抗體，形成的抗原抗體復(fù)合物沉積于腎臟，導(dǎo)致腎臟病變?，F(xiàn)已明確III型和IV型狼瘡性腎炎臨床較重，預(yù)后和治療效果較差，常發(fā)展至終末期腎病。

免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定需要免疫耐受來維持，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一群能夠“主動”地抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，抑制細(xì)胞的活化和細(xì)胞因子的分泌[1]，是維持外周免疫耐受的最重要機(jī)制。1995年，Sakagu?chi等首次定義高表達(dá)IL-2受體α鏈（CD25）的CD4+T細(xì)胞為Treg，其通過細(xì)胞間的直接接觸和抑制性細(xì)胞因子發(fā)揮免疫抑制作用。隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)多箭頭轉(zhuǎn)錄因子Foxp3是小鼠Treg的標(biāo)記物和功能調(diào)節(jié)基因。然而，在人活化的T細(xì)胞中也能短暫表達(dá)Foxp3，說明其并不是人Treg的特異標(biāo)記物。目前仍認(rèn)為CD4+CD25highT細(xì)胞是人較特異的標(biāo)記物[3]，因此，本研究選擇此群細(xì)胞來定義Treg。

已有相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，活動性SLE患者外周血Treg的數(shù)目減少[4]，但有少數(shù)研究發(fā)現(xiàn)其比例正常[5]。相反，還有研究發(fā)現(xiàn)活動性SLE患者的Treg上升[6]。以上結(jié)果提示Treg在SLE中的作用不盡一致，可能與標(biāo)記物選擇及病變類型有關(guān)。本研究檢測發(fā)現(xiàn)CD4+CD25highT細(xì)胞在狼瘡性腎炎患者中的比例并不降低，且與SLEDAI無相關(guān)性，而III型和IV型狼瘡性腎炎患者存在Treg水平的明顯下降，可能是導(dǎo)致腎臟持續(xù)的炎癥反應(yīng)，最后引起腎臟纖維化的決定因素，但有待進(jìn)一步從腎組織檢測Treg的表達(dá)以明確。

綜上所述，III型和IV型狼瘡性腎炎患者外周血CD4+CD25highT細(xì)胞較II型和V型明顯降低，此結(jié)果可輔助作為判斷狼瘡性腎炎疾病嚴(yán)重程度的指標(biāo)，更重要的是為利用Treg治療重癥狼瘡性腎炎提供理論依據(jù)。

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Frequency and Significance of CD4+CD25highRegulatory T Cells in the Peripheral Blood of Lupus Nephri?tis Patients

MA Jilin，CAI Long，SHI Huaping，et al.Department of Nephrology,Hangzhou Red Cross Hospital, Hangzhou(310003),China

Objective:To investigate the frequency of CD4+CD25highregulatory T cells in the peripheral blood of lupus nephritis patients with diverse pathology.M ethods:Peripheral blood mononuclear cells from 35 lupus ne?phritis patients based on the 2003 ISN/RPS classification system and 11 healthy controls were counted and stained for CD4 and CD25.The relation between CD4+CD25highregulatory T cells and renal pathology anddisease activity was analyzed.Results:No significant difference in the frequency of CD4+CD25highregulatory T cells was noted between the lupus nephritis patients and normal controls(P＞0.05).Although the frequency of this cell pop?ulations was not correlated to the disease activity(P＞0.05),it was significantly decreased in lupus nephritis pa?tients with Class III and IV when compared with patients with Class II and V(P＜0.05).Conclusion:CD4+CD25highregulatory T cells in the peripheral blood could be a promissory biomarker for active lupus nephritis pa?tients and this may give rationale to use regulatory T cells as target cells in the treatment of lupus nephritis.

lupus nephritis regulatory T cells renal pathology

2012-12-31