阿魏葉的指紋圖譜研究

摘 要：采用高效氣相色譜法，對不同產(chǎn)地和不同肥料種植的阿魏葉中的成分進(jìn)行指紋圖譜研究。結(jié)果表明，氣相色譜指紋圖譜中多數(shù)組分可以達(dá)到較好的分離，共得到17個共有峰，不同施肥條件下相似度較好，但不同產(chǎn)地之間相似度差異較大。本方法具有較好的穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性，所建立的指紋圖譜可用于阿魏藥材及阿魏葉的鑒定及質(zhì)量評價。

關(guān)鍵詞：阿魏葉；氣相色譜；指紋圖譜

中圖分類號：R282 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.03.004

阿魏是著名的“西域藥材”之一，別名臭阿魏?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版收載的阿魏來源于傘形科（Umbelliferae）阿魏屬（Ferula）植物新疆阿魏Ferula sinkiangensis K.M.Shen或阜康阿魏Ferula fukanensis K.M.Shen分泌的樹脂。阿魏屬植物全世界有150種，在我國有25種[1]。1987年國務(wù)院發(fā)布《野生藥材資源保護(hù)管理條列》，國家醫(yī)藥管理局頒布“國家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材物種名錄”，新疆阿魏和阜康阿魏被列為三級保護(hù)植物?！吨袊参锛t皮書》新疆阿魏被列為三級瀕危植物。為此，是否更能夠有效保護(hù)及可持續(xù)利用珍惜藥用植物阿魏，以保根采集葉片和地上部分的方法。通過高效氣相色譜法建立不同產(chǎn)地的新疆阿魏葉的指紋圖譜，為新疆阿魏葉藥材質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

選用在新疆伊犁野生條件下生長的阿魏與新疆阜康人工種植的阿魏作為試驗(yàn)對象，設(shè)計人工種植的阿魏以N、K、P、NK、KP、NP、NPK等單混施肥條件來處理。根據(jù)同一時期采集兩個不同產(chǎn)地阿魏進(jìn)行相似度比較，為建立阿魏藥材及阿魏葉的指紋圖譜和質(zhì)量評價提供技術(shù)支持。

1.2 儀器與條件

美國惠普公司HP6890氣相色譜儀，毛細(xì)管柱：HP-5柱（30 m × 0.32 μm），氫火焰離子化檢測器，ER-182A型電子天平，DRT-TW形調(diào)溫電熱套（鄭州長城科工貿(mào)有限公司），揮發(fā)油提取器。

色譜條件：進(jìn)樣口溫度260 ℃，分流比5∶1；柱溫：60 ℃以3 ℃·min-1 升至246 ℃；檢測器溫度280 ℃，H2流速30 mL·min-1；N2為載氣，流速1.02 mL·min-1；進(jìn)樣量1 μL。

1.3 供試品制備

吸收劑的選擇：稱取阿魏葉10 g，粉碎過0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發(fā)油提取器進(jìn)行水蒸氣蒸餾4 h，因?yàn)槠鋼]發(fā)性成分較少、樣品量限制、采用無溶劑方法無法得到揮發(fā)油成分，分別以石油醚、正己烷和乙酸乙酯（1 mL）作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進(jìn)樣1 μL。結(jié)合譜圖分析最終選擇乙酸乙酯為吸收劑。

樣品制備：稱取阿魏葉10 g，粉碎過0.84 mm篩后置于500 mL圓底燒瓶，用揮發(fā)油提取器進(jìn)行水蒸氣蒸餾4 h，乙酸乙酯1 mL作為吸收劑，提取物定容到100 μL，進(jìn)樣1 μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液（以Y8為代表），連續(xù)進(jìn)樣5次。以峰6為對照，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積百分比。結(jié)果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，大于10%相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法精密度良好。

2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取新疆阿魏葉揮發(fā)油，按照確定的供試品溶液制備方法操作，分別于2，4，6，8，10 h進(jìn)樣測定。結(jié)果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批阿魏6份，按照確定的供試品溶液制備方法操作并測定，計算各共有峰的相對保留時間和相對峰面積百分比。結(jié)果各共有峰的相對保留時間RSD均小于0.1%，相對峰面積百分比RSD均小于5%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4 指紋圖譜與技術(shù)參數(shù)

2.4.1 指紋圖譜共有峰的標(biāo)定 將17批次阿魏制成供試品溶液進(jìn)行測定，應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004A版，國家藥典委員會）比較17批次阿魏的色譜圖（圖1，2），確定其中17個色譜峰是共有的，確定為共有峰。

2.4.2 相似度評價 應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（A版，國家藥典委員會）對17批次阿魏的色譜圖進(jìn)行相似度評價。以17批次樣品色譜圖擬合圖譜為對照圖譜，經(jīng)一系列分析得知，峰12對整體的相似度影響較大，且其峰面積百分比大于10%，因此不能舍去，17批次樣品與對照圖譜的相似度部分偏小。此外，因17批次樣品中前14批為人工種植，后3批為野生，分開進(jìn)行評價，相似度均在0.8以上，說明阿魏人工種植和野生化學(xué)成分有一定的差異性（表1）。

3 結(jié)論與討論

由于峰6的峰面積和保留時間均居中，且與鄰近色譜峰的分離度較好，故以峰6作為參照峰。本研究采用GC法測定了17批次不同產(chǎn)地及不同施肥方法栽培的阿魏葉指紋圖譜，結(jié)果表明，不同種植方式阿魏葉的化學(xué)組成有一定的差異，同種種植方式化學(xué)組成的相似度均在0.8以上，可據(jù)此評價和控制阿魏藥材的質(zhì)量。但是不同產(chǎn)地的阿魏所含成分的含量差異較大，相對峰面積百分比RSD差異很大，說明不同產(chǎn)地阿魏藥材的化學(xué)成分含量有差異，這可能是受氣候、生態(tài)環(huán)境和栽培種植方法等的影響。

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