山東17個桑品種葉片中1—脫氧野尻霉素含量的測定

摘 要：為了選擇適合山東地區(qū)的藥用及保健功能桑樹品種，選取山東省內有代表性的桑品種17個，采用反相高效液相色譜法測定桑葉的1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）含量。結果表明：桑屬不同種間1-DNJ含量存在顯著性差異，白桑最高；不同桑品種間的1-DNJ含量差別顯著，晉選6號和秋雨分別是魯桑和白桑中含量最高的品種，達02777%和03281%，適合直接作為桑葉1-DNJ開發(fā)的專用桑品種或育種材料。

關鍵詞：1-脫氧野尻霉素；桑品種；反相高效液相色譜法

中圖分類號：S888.2 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2012）12-0100-03

Determination of 1-Deoxynojimycin Contents in Leaves

of Some Mulberry Cultivars in Shandong Province

Li HuaXiu1， Chen ChuanJie1， Gu YinYu1， Shi XinQin1*， Li Feng2， Zhu Hong1

（1.Shandong Institute of Sericultural Science， Yantai 264002， China；

2.Department of Personnel， Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China）

Abstract In order to select mulberry cultivars with medicinal and health function adaptable to Shandong area， 17 representative mulberry cultivars were used to determine the 1-deoxynojimycin （1-DNJ） content in leaves by RP-HPLC. The results indicated that there were extremely significant differences between different Morus species， and Morus alba had the highest 1-DNJ content. There were also significant differences between different mulberry cultivars. Jinxuan6 and Qiuyu were the cultivars with the highest 1-DNJ content belonging to M. multicaulis and M. alba respectively with the 1-DNJ content as 0.3281% and 0.2777% respectively， so they were suitable as special cultivars or breeding materials to develop 1-DNJ from mulberry leaves.

Key words 1-DNJ content； Mulberry cultivars； RP-HPLC

1-脫氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin，1-DNJ）是一種哌啶類生物堿[1]，對α-葡萄糖苷酶有抑制作用，可降血糖、治療糖尿病，此外還具有抗病毒、抗腫瘤轉移等藥理作用[2]，是桑（Morus alba L）和家蠶（Bombyx mori L）保健品降血糖功能的重要活性物質，也是衡量桑、蠶藥用價值的重要指標之一。桑葉中1-DNJ的含量因品種、發(fā)育階段、季節(jié)、地理氣候等因素的不同而存在很大差異[3～11]。

山東省桑樹資源豐富、栽培歷史悠久，有魯桑種、白桑種、廣東桑、山桑和瑞穗桑5個栽培種、200余個桑品種，具有廣泛的適應性和代表性，因此研究山東桑屬1-脫氧野尻霉素含量與品種間關系極具代表性。本研究選取代表性的桑品種17個，采用反相高效液相色譜法測定其桑葉的1-DNJ含量，從桑種間、桑品種間以及桑不同類型間差異等方面探求1-DNJ含量與分類學的關系，對于篩選1-DNJ高含量的桑資源，培育1-DNJ高的桑品種具有指導意義。

1 材料與方法

11 試驗材料

17個代表性桑品種樣品均采自山東省蠶業(yè)研究所桑樹資源苗圃（煙臺，2007年建），其中魯桑9個品種，包括晉選6號、牛筋桑、7946、農桑14號、桐鄉(xiāng)青（4X）、桐鄉(xiāng)青（2X）、大雞冠、育711、湖桑32、云桑1號；白桑6個品種，包括秋雨、嘉陵16號、新一之瀨、陜桑305、油匠鐺鐺、遼育164；山桑2個品種，為山桑、劍持。

2011年6月上旬春蠶期采摘嫩葉，所有樣品50℃烘干，粉碎過100目篩，4℃保存待測。

12 主要試劑及儀器

1-Deoxynojirimycin-HCl（1-DNJ-HCl，Sigma公司產品），9-Fluorenyl- methyl chloroformate（FMOC-Cl，F(xiàn)luca公司產品），乙腈（色譜純，天津市凱通化學試劑有限公司產品），試驗用水為重蒸水，其它試劑皆為分析純。

UV200Ⅱ高效液相色譜儀（大連依利特），KQ-600型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司生產）。

13 1-DNJ的測定方法

樣品中1-DNJ含量采用反相高效液相色譜-紫外檢測法測定[12]，每個處理重復測定2次，取平均值。

14 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SAS 90數(shù)據(jù)分析軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結果與分析

21 不同種間桑葉1-DNJ含量的變化規(guī)律

分別對1-DNJ標樣、17種桑葉粉試樣的衍生化反應混合物進行HPLC分析，分離圖譜如圖1、圖2所示。測定白桑、魯桑和山桑3個栽培桑種嫩葉的1-DNJ含量（表1），可以看出不同栽培桑種間桑葉的1-DNJ含量存在極顯著性差異：白桑的1-DNJ含量最高，其質量分數(shù)達到0219%，山桑最低，僅為0171%。

22 不同品種間桑葉1-DNJ含量的變化規(guī)律

分別測定9個魯桑品種、6個白桑品種和2個山桑品種的桑葉，其1-DNJ含量見表2～4，不同桑品種間1-DNJ含量存在極顯著性差異：魯桑中晉選6號1-DNJ含量最高，其質量分數(shù)達02777%，桐鄉(xiāng)青（2X）含量最低；白桑中秋雨的含量最高，其質量分數(shù)達03281%，新一之瀨最低為01141%。

3 結論

我國桑樹種類多、自然分布廣、栽培歷史悠久，約有15個種及4個變種，是世界桑屬植物資源最豐富的國家之一。桑樹的1-脫氧野尻霉素（1-DNJ）含量因桑品種、栽培地區(qū)和氣候以及樹體藥用部位不同存在很大的差異。

本研究結果表明：山東桑屬不同栽培種間1-DNJ含量存在顯著性差異，白桑、魯桑中1-DNJ含量明顯高于山桑，而白桑和魯桑間差異性不顯著；同一桑種不同品種間的1-DNJ含量差異顯著，其中晉選6號和秋雨分別是白桑和魯桑中含量最高的品種，達02777%和03281%。之前朱見等[5]、劉凡等[3]報道，魯桑高于白桑和山桑，但差異未達到顯著水平。結論不同可能是栽培地區(qū)和氣候不同，也可能是本試驗的供試品種較少。

本研究首次發(fā)現(xiàn)同品種桑的染色體倍數(shù)不同，其1-DNJ含量差別顯著。以桐鄉(xiāng)青為例， 4X桐鄉(xiāng)青的含量幾乎是2X桐鄉(xiāng)青的15倍。因此進一步對1-DNJ含量與桑品種的倍性相關性進行研究，可能對藥桑育種工作具有指導性意義。同時擴大調查桑種、品種范圍和數(shù)量，可以更全面、準確地反映桑屬1-DNJ含量變化與桑分類學的關系。參 考 文 獻：

[1] Kato A， Asano N， Kizu H，et al Fagomine isomers and glycosides from Xanthocercis zambesiaca [J] NatProd， 1997， 60（3）：312-314

[2] 周曉玲，孫凌云，張 進，等1-脫氧野尻霉素的來源及合成研究進展[J] 蠶業(yè)科學，2011，37（1）： 105-111

[3] 陳 松，劉宏程，儲一寧，等 12個桑品種桑葉中的1-脫氧野尻霉素含量測定與分析[J] 蠶業(yè)科學，2007，33（4）： 637-641

[4] Yatsunami K，Lchida M，Onodera S.The relationship between 1-deoxynojirimycin content and alpha-glucosidase inhibitory activity in leaves of 276 mulberry cultivars（Morus spp.）in Kyoto，Japan [J]. NatMed，2008，62：63-66

[5] 朱 見.桑葉、蠶體中1-脫氧野尻霉素的含量測定與分析[D].重慶：西南大學，2008

[6] 魯戰(zhàn)會，吳生文，唐 健，等 桑葉功效成分含量與產地關聯(lián)性研究[J] 食品科技，2007，1：75-77

[7] 楊 梅 高效液相色譜法測定桑葉中1-脫氧野尻霉素的含量[J] 武警醫(yī)學，2007，18（2）：121-123

[8] Meng X， Ouyang Z，Chang Y，et al Contrast of 1-deoxynojirimycin content in mulberry leaves from different habitats[J] Journal of Chinese Medicinal Materials，2008，31（1）：8-10

[9] 關麗萍，鄭光浩，金晴昊，等.RP-HPLC測定不同地區(qū)、不同采集期桑葉中1-脫氧野尻霉素[J].中草藥，2005，36（12）：1881-1882

[10] 葉晶晶，殷 浩，孫 波，等桑樹中的1-脫氧野尻霉素含量變化規(guī)律研究[J] 蠶業(yè)科學，2009，35（4）：722-727

[11] 施新琴 家蠶和桑葉中1-脫氧野尻霉素含量變化的研究[D] 泰安：山東農業(yè)大學， 2006

[12] 施新琴，崔為正，裘立群，等 反相高效液相色譜-紫外檢測法測定1-脫氧野尻霉素的含量[J] 蠶業(yè)科學，2006，32（1）：146-149

[13] 劉 凡，李平平，廖森泰，等 98份不同桑樹品種資源的桑葉總生物堿及1-脫氧野尻霉素含量測定[J]蠶業(yè)科學，2012，38（2）：185-191 山 東 農 業(yè) 科 學 2012，44（12）：103～105