提高液相色譜法檢測(cè)食品中食品添加劑準(zhǔn)確性的對(duì)策

摘要：針對(duì)日常工作中高液相色譜法檢測(cè)食品中添加劑時(shí)容易出現(xiàn)的問(wèn)題，從實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作、樣品處理、分析過(guò)程、實(shí)驗(yàn)后處理四個(gè)方面分析了可能出現(xiàn)的問(wèn)題，總結(jié)了一些應(yīng)對(duì)措施，對(duì)日常監(jiān)督工作有一定的指導(dǎo)意義。

關(guān)鍵詞：高液相色譜法（HPLC）；食品添加劑；準(zhǔn)確性

中圖分類號(hào)：TS207文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-9671-(2012)042-0215-01

1實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作

1.1流動(dòng)相過(guò)濾和脫氣

流動(dòng)相和樣品溶液中一般都存在一定量的直徑大于0.45 um的顆粒，由于色譜柱中填料顆粒很細(xì)，色譜柱內(nèi)腔很小，溶劑和樣品中的細(xì)小顆粒會(huì)使色譜柱和毛細(xì)管容易堵塞。所有溶劑使用前都必須經(jīng)濾過(guò)，以便除去溶劑中的雜質(zhì)微粒，色譜純?cè)噭┤绻麨V過(guò)沒(méi)有超過(guò)一天，也同樣如此。在用濾膜過(guò)濾時(shí)，要加倍注意分清楚有機(jī)相濾膜和水相濾膜。前者一般用于過(guò)濾有機(jī)溶劑，如果去過(guò)濾水溶液，就會(huì)出現(xiàn)流速低或?yàn)V不動(dòng)的現(xiàn)象。后者只能用于過(guò)濾水溶液，不能用于過(guò)濾有機(jī)溶劑，否則濾膜會(huì)被溶解。溶有濾膜的溶劑不能用于HPLC，否則對(duì)檢測(cè)會(huì)造成很大影響。對(duì)于混合流動(dòng)相，可在混合前分別濾過(guò)，如需混合后濾過(guò)，首選混合

濾膜。

HPLC所用的流動(dòng)相預(yù)先必須進(jìn)行脫氣處理，如若不然，容易在系統(tǒng)內(nèi)逸出氣泡，對(duì)泵的正常工作造成影響。氣泡柱的分離效率也會(huì)產(chǎn)生影響，主要是對(duì)檢測(cè)器的靈敏度和基線穩(wěn)定性產(chǎn)生影響，可能導(dǎo)致無(wú)法檢測(cè)。如果采用抽氣或煮沸法，則需要考慮低沸點(diǎn)溶劑揮發(fā)造成的組成變化。日常工作中最常用的脫氣方法是超聲脫氣，它不影響溶劑組成，20～30分鐘的超聲脫氣處理對(duì)許多有機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑/水混合液的脫氣已經(jīng)足夠了。超聲時(shí)應(yīng)避免溶劑瓶與超聲槽底部或壁接觸，以免玻璃瓶破裂，另外，容器內(nèi)液面不要高出水面太多。

1.2檢查柱壓和排氣泡

實(shí)驗(yàn)前，必須檢查柱壓是否正常，柱壓過(guò)高或過(guò)低，都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因：1）拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；2）把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；3）首先將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，同時(shí)，用10倍柱體積的流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行清洗。此時(shí)，如果柱壓仍沒(méi)有下降，再檢查；4）更換柱子入口篩板，若柱壓出現(xiàn)下降趨勢(shì)，就說(shuō)明溶劑或樣品中含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題。

實(shí)驗(yàn)前，排出輸液管路中的氣泡是提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的步驟之一。管路中存在氣泡，分析時(shí)會(huì)造成柱壓不穩(wěn)，表現(xiàn)在譜圖上會(huì)出現(xiàn)基線不穩(wěn)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假峰，給樣品定性、定量造成很大

影響。

1.3其他準(zhǔn)備

除了在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行上面的必要步驟外，還要注意比例閥、泵密封墊、流動(dòng)性過(guò)濾頭、單向閥、室內(nèi)溫度變化、電壓波動(dòng)、保護(hù)柱等。

1.4色譜柱的清洗和平衡

實(shí)驗(yàn)前，準(zhǔn)備工作完成后，要對(duì)色譜柱進(jìn)行短時(shí)間的清洗和平衡。清洗一般先用含有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）80%～90%的純水沖洗30分鐘左右，然后用純有機(jī)溶劑沖洗30分鐘左右，再用流動(dòng)相進(jìn)行平衡，直到基線平穩(wěn)為止。如果壓力過(guò)高或者過(guò)低，或者基線不穩(wěn)，就要按照前三個(gè)步驟逐個(gè)檢查，逐點(diǎn)進(jìn)行排除，直到壓力恢復(fù)正常，基線平穩(wěn)為止。

2樣品處理

樣品處理是檢測(cè)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。如果未按標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行處理，會(huì)出項(xiàng)兩種情況：一種是與待測(cè)成分結(jié)構(gòu)相近的成分沒(méi)有徹底分離出去，導(dǎo)致樣品檢測(cè)結(jié)果偏高；另外一種是待測(cè)成分未徹底分離處出來(lái)導(dǎo)致樣品檢測(cè)結(jié)果偏低，甚至導(dǎo)致定性失誤。一般情況下，應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行處理樣品，如試劑加入量、處理時(shí)間、處理溫度等，平行樣品要嚴(yán)格按照相同的處理?xiàng)l件

進(jìn)行。

3分析過(guò)程

3.1樣品定性

建議采用同類樣品加標(biāo)定性法，即采用向同類不含待測(cè)組分樣品（如不含山梨酸、苯甲酸、糖精鈉的樣品）中添加一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品，與樣品保留時(shí)間進(jìn)行比較定性。如果樣品保留時(shí)間與標(biāo)樣的相差不多（不超過(guò)1分鐘），可以向待測(cè)樣品中添加與樣品待測(cè)成分含量基本相等的等體積的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定性，如果加標(biāo)樣品中可能的待測(cè)組分峰出現(xiàn)叉峰，肯定不是待測(cè)組分，如果加標(biāo)樣品可能的待測(cè)組分峰未出現(xiàn)叉峰，而且加標(biāo)樣品可能的待測(cè)組含量與標(biāo)樣和樣品混合計(jì)算出的含量相吻合，肯定是待測(cè)組分，否則的話就不是待測(cè)組分。

3.2樣品定量

具體是，在一定條件下分別注入相同體積的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品，測(cè)得相應(yīng)的響應(yīng)值（峰高或峰面積，常用峰面積），繪制響應(yīng)值與含量關(guān)系的校正曲線，在完全相同的條件下測(cè)得被測(cè)樣品的響應(yīng)值，從校正曲線上查的待測(cè)組分的含量。因此，在實(shí)際工作中，如果待測(cè)組分濃度低于最低檢出濃度，如果按照標(biāo)準(zhǔn)無(wú)法濃縮，即使有檢出，也要按未檢出上報(bào)；如果可以濃縮，應(yīng)該濃縮至適當(dāng)?shù)捏w積再進(jìn)行檢測(cè)；如果可以增加稱樣量，應(yīng)增加稱樣量再進(jìn)行檢測(cè)；如果待測(cè)組分濃度高于校正曲線的上限溶度，應(yīng)該適當(dāng)稀釋，再進(jìn)行檢測(cè)。

在山梨酸、苯甲酸、糖精鈉的分析中，有時(shí)會(huì)在苯甲酸前很近的地方出現(xiàn)安賽蜜的峰，在糖精鈉前面很近的地方出現(xiàn)脫氫乙酸的峰，這些峰距離很近，且分離不開(kāi)，有時(shí)部分重疊，形成饅頭峰或分叉峰，對(duì)樣品定性和定量造成很大影響。如果通過(guò)標(biāo)簽等信息能確定樣品中存在這些添加劑，可以直接定性，如果超標(biāo)，就要通過(guò)降低流動(dòng)相極性將雜質(zhì)峰徹底分開(kāi)后再定量；如果不能確定樣品中存在這些添加劑，就要通過(guò)樣品加標(biāo)法來(lái)定性，然后再定量；如果標(biāo)準(zhǔn)要求不允許添加，而在待測(cè)峰附近出現(xiàn)了這些添加劑色譜峰，首先要通過(guò)樣品加標(biāo)法來(lái)定性，然后再定量，定量時(shí)注意待測(cè)峰與雜質(zhì)峰應(yīng)完全分離，否則，要通過(guò)降低流動(dòng)相極性將雜質(zhì)峰徹底分開(kāi)后再定量。

4實(shí)驗(yàn)后處理

實(shí)驗(yàn)后，要徹底清洗色譜柱。清洗時(shí)先用含有機(jī)溶劑（甲醇或乙腈）80%～90%的純水沖洗，直到壓力恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)前用沖洗時(shí)的壓力，然后用純有機(jī)溶劑沖洗，直到壓力恢復(fù)到實(shí)驗(yàn)前用純有機(jī)溶劑沖洗時(shí)的壓力。

一般情況下，對(duì)于可能堵塞的部件，如流動(dòng)性過(guò)濾頭、單向閥、保護(hù)柱等，要經(jīng)常注意清洗，一般15-30天清洗一次。另外對(duì)清洗用的純水，最好現(xiàn)做現(xiàn)過(guò)濾現(xiàn)用，如果想延長(zhǎng)清洗用的純水使用時(shí)間，可在過(guò)濾好的純水里添加10%-20%純有機(jī)溶劑，以免有細(xì)菌滋生，影響色譜分析工作。

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