羅非魚鱗膠原蛋白水解液生物活性研究

摘 要 本文以羅非魚魚鱗明膠為原料，利用六種蛋白酶對明膠進行酶解，測定其不同酶解產物的抗氧化性、血管緊張素I轉換酶（ACE）抑制活性、α-葡萄糖苷酶（AG）抑制活性等生物活性。六種蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力為76.7%和76%，高于VC的65.6%；除中性蛋白酶對DPPH自由基沒有清除力以外，其余5種蛋白酶均對DPPH自由基有清除力，但是低于VC；胃蛋白酶水解液對α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用最強，為67.1%，而中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶水解液對α-葡萄糖苷酶沒有抑制作用。6種蛋白酶的水解產物均有的ACE抑制活性。

關鍵詞 魚鱗；明膠；酶解產物；生物活性

中圖分類號 TS20 文獻標識碼 A 文章編號 1673-9671-(2012)062-0228-01

魚鱗是有鱗魚加工的主要副產品之一，占魚體重量的1%-5%。目前對魚鱗的開發(fā)利用主要有以下幾個方面：提取魚鱗膠，作為食品、化妝品等原材料，具有抗氧化和降低血壓、降低血液總膽固醇、抗衰老等功效；制備魚鱗水解液，除水解出大量的氨基酸外還會產生具有特定功能的肽；提取魚銀，作為一種昂貴的生物試劑，用于珍珠裝飾業(yè)和油漆制造業(yè)；低值淡水魚的魚鱗可用來開發(fā)魚鱗涼粉、魚鱗凍膏、干制魚鱗等食品，制作成各種工藝品；提取卵磷脂；提取鳥嘌呤，用于治療白血病。

1 材料與儀器

1.1 實驗材料

冷凍羅非魚魚鱗；木瓜蛋白酶、胰蛋白酶；胃蛋白酶；酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶。

1.2 實驗儀器

真空泵、旋轉蒸發(fā)器；紫外可見分光光度計；冷凍干燥機；氨基酸自動分析儀；精密增力電動攪拌器

2 實驗方法

2.1 魚鱗明膠提取

魚鱗50.00 g按照設定的提取時間、溫度、液料比提取，經鐵篩過濾，濾液用105℃干燥，得到明膠。

2.2 明膠酶解產物活性研究

2.2.1 明膠的酶解

不同蛋白酶對同一底物的水解效果不同，本實驗選用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶分別對明膠進行水解。

2.2.2 抗氧化活性的測定

1）羥自由基清除作用。試管中依此加入硫酸亞鐵1mL，水楊酸-乙醇1 mL，樣品1 mL，H2O2 1 mL，將混合液在37℃水浴鍋中反應30 min，取出后用分光光度計在510 nm波長下測定吸光值。

計算公式為：清除率I（%）=[1-（As-Ao）/Ac ]×100

2）DPPH自由基清除力。試管中加入4 mL樣品，1 mLDPPH-乙醇溶液，充分震蕩后暗室反應30min，用分光光度計在517 nm波長下測定吸光值。（不加樣品加蒸餾水為空白對照，以100 μg/ml的VC作陽性對照）

計算公式為：DPPH自由基清除率I（%）=（Ac-As）/Ac×100

2.2.3 血管緊張素I轉換酶抑制活性測定

取5ul樣品加入15 ul的ACE酶（37℃ 5 min）后，加入25 ulHHL（三肽馬尿酰-組氨酸-亮氨酸）（37℃ 25 min），再加入0.1%三氟乙酸（TFA）10 ul于16500×g的速度4℃離心20 min后，取上清液在228 nm處紫外光檢測條件下檢測馬尿酸的峰面積。（以緩沖液替代樣品作為空白對照）

計算公式為：抑制率I（%）=（Ac- As）/Ac×100%

2.2.4 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定

抑制劑活力測定：根據Tremblay等的方法測定AG的活性，即以pNPG為底物，0.5 mol/L碳酸鈉溶液為終止液。在37℃，pH6.8的條件下反應，用酶標儀在405 nm波長處比色測定。

計算公式為：抑制率I（%）=1-[（As- AB）/Ac×100%]

3 結果與討論

3.1 抗氧化活性的測定

3.1.1 羥自由基清除作用

六種蛋白酶水解液中，胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強分別為76.7%和76.0%，甚至高于VC的65.6%；其次為中性蛋白酶水解液、酸性蛋白酶水解液和胃蛋白酶水解液；而木瓜蛋白酶水解液清除率僅為6.8%。

3.1.2 DPPH自由基清除力

六種蛋白酶水解液中，堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強為42.2%，低于陽性對照VC的47.7%，其次為胃蛋白酶水解液30.8%和酸性蛋白酶水解液25.6%，再次為胰蛋白酶水解液16.3%和木瓜蛋白酶水解液10.9。中性蛋白酶對DPPH自由基沒有清除能力。

3.2 血管緊張素I轉換酶抑制活性測定

六種蛋白酶水解液中，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高為71.7%，其次為木瓜蛋白酶水解液68.9%和堿性蛋白酶水解液68.7%，再次為胰蛋白酶水解液63.9%和中性蛋白酶水解液61.5%，ACE抑制率最低的是胃蛋白酶水解液僅為0.78%。

3.3 α-葡萄糖苷酶抑制活性的測定

六種蛋白酶水解液對AG活性有截然不同的作用。酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對AG有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制率為67.10%，對AG的抑制作用最強。而中性蛋白酶、堿性蛋白酶和胰蛋白酶明膠水解液對AG沒有抑制作用。

4 結論

六種不同的酶（酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶）水解魚鱗明膠，對其生物活性進行比較。其中胰蛋白酶水解液和堿性蛋白酶水解液的羥自由基清除力較強分別為76.7%和76.0%，高于VC的65.6%；堿性蛋白酶水解液的DPPH自由基清除力最強42.4%，但不及VC；六種蛋白酶水解液中酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶對AG活性有抑制作用，其中胃蛋白酶水解液的抑制作用最強為67.10%；六種酶水解液均有ACE抑制作用，酸性蛋白酶水解液的ACE抑制率最高71.7%。

參考文獻

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作者簡介

康樂（1983—），女，遼寧遼陽人，助教，碩士研究生，研究方向：食品科學。